劉麗麗　陳麗華（江西中醫(yī)藥大學(xué)　南昌　330004）

浙貝提取物固體分散體的制備及溶出特性研究△

劉麗麗陳麗華*（江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌330004）

目的：制備浙貝提取物固體分散體，考察其中貝母素甲及貝母素乙的溶出效果，從而確定制備的最佳方法和最佳比例。方法：選擇聚乙二醇6000（PEG6000）與聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30）兩種載體材料，分別采用熔融法和溶劑法制備浙貝提取物固體分散體；通過(guò)比較提取物、固體分散體的溶出性能，確定最佳工藝。結(jié)果：使用HPLC-ELSD法測(cè)定貝母素甲及貝母素乙的溶出量，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定。制備成固體分散體能顯著提高貝母素甲及貝母素乙的體外溶出速度；PEG6000作為載體的浙貝提取物固體分散體溶出速度快于PVP K30為載體的浙貝提取物固體分散體。結(jié)論：以PEG6000為載體，采用熔融法制備的藥物/載體比例為1∶6的固體分散體能顯著提高浙貝提取物中貝母素甲及貝母素乙的溶出速率。

浙貝提取物固體分散體 貝母素甲 貝母素乙 溶出特性

浙貝母為百合科植物浙貝母（Fritillaria thunbergii Miq.）的干燥鱗莖，具有止咳祛痰、鎮(zhèn)痛抗炎等功效［1］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為浙貝母具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥作用［2，3］，用于治療白血??；化學(xué)研究表明浙貝母的主要成分是生物堿類，其中貝母素甲（peimine）、貝母素乙（peiminine）為藥典中浙貝母的質(zhì)量控制成分及主要藥效成分。課題組前期開(kāi)展了浙貝提取物大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，浙貝提取物中貝母素甲及貝母素乙口服生物利用度低，分別為2.94%和11.71%，其原因可能為其在水中的溶解度極小，吸收不完全［4］。

制備固體分散體，是提高難溶性藥物溶出度和口服生物利用度的一種有效方法［5，6，7］。浙貝提取物是目前制劑工業(yè)中浙貝原料應(yīng)用的主要形式，為此本研究以浙貝提取物作為研究對(duì)象，采用固體分散技術(shù)提高其脂溶性成分的溶出性能。研究中選擇浙貝中主要脂溶性活性成分貝母素甲及貝母素乙作為指標(biāo)性成分，考察不同載體材料制備的固體分散體對(duì)浙貝提取物溶出性能的影響。

1　儀器與試藥

BS124S十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Startorius公司）；KQ-250VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀（天大天發(fā)科技有限公司）；Agilent1200型高效液相色譜儀；Waters ELSD-2420型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；SEM掃描電鏡（FEI Quanta 250，美國(guó)FEI公司）；Vertex70紅外光譜儀（德國(guó)BRUKER光譜儀器公司）。

貝母素甲及貝母素乙對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110750-200608；110751-200504）；浙貝提取物（南京澤朗植提技術(shù)有限公司，貝母素甲及貝母素乙含量分別為0.24%及0.13%）；聚乙烯吡咯烷酮PVPK-30（德國(guó)BASF公司）；聚乙二醇6000（西隴化工股份有限公司）；光譜純溴化鉀（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；乙腈（色譜純，Tedia）；甲醇（色譜純，Tedia）；流動(dòng)相用水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2　方法

2.1固體分散體的制備

2.1.1浙貝提取物-PVP K30固體分散體的制備：采用溶劑法制備浙貝提取物的PVP固體分散體。將浙貝提取物和PVP K30按1∶4、1∶6、1∶8與1∶10的藥載比投料，用適量無(wú)水乙醇溶解成澄明溶液，水浴加熱揮去乙醇，放入真空干燥箱干燥除去剩余溶劑后，粉碎即得浙貝提取物的PVP K30固體分散體。

2.1.2浙貝提取物-PEG6000固體分散體的制備：采用熔融法制備浙貝提取物的聚乙二醇（PEG6000）固體分散體。將浙貝提取物和PEG6000按1∶4、1∶6、1∶8與1∶10的藥載比投料，制備浙貝提取物固體分散體。將載體材料于60℃熔融，強(qiáng)力攪拌下加入浙貝提取物使其均勻分散，之后放入冰浴中快速完全冷卻，取出放至真空干燥箱中干燥，粉碎即得浙貝提取物的PEG6000固體分散體。

2.2物理混合物的制備：將浙貝提取物與載體PVP K30及PEG6000分別按質(zhì)量比1∶4、1∶6、1∶8與1∶10的比例于研缽中研細(xì)，過(guò)60目篩，即得不同載體、不同配比的浙貝提取物及載體的物理混合物。

2.3浙貝提取物中貝母素甲及貝母素乙的含量測(cè)定

2.3.1色譜條件：色譜柱：phenomenex C18（250mm×4.60mm，5μm），柱溫30℃；流動(dòng)相：［乙腈（A）∶0.03%二乙胺水］65∶35；體積流量：1.0mL·min-1，進(jìn)樣量10μL。ELSD檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度85.8℃；載氣流量：2.2mL·min-1；增益比：1。理論塔板數(shù)按貝母甲素計(jì)算不低于2500。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3.2對(duì)照品溶液、浙貝提取物溶液、供試品溶液的制備：①對(duì)照品溶液：分別精密稱取貝母素甲及貝母素乙對(duì)照品5.81mg、4.19mg置于10mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得。②浙貝提取物溶液：精密稱取浙貝提取物適量，置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得。③供試品溶液：分別取所制備固體分散體粉末適量，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲10min，再加甲醇至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3線性關(guān)系考察：分別精密量取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，制得一系列濃度的貝母素甲對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液（581，116.2，58.1，29.0，14.5，7.3μg/mL）及貝母素乙標(biāo)準(zhǔn)溶液（419，83.8，41.9，20.95，10.48，5.25μg/mL），分別精密吸取10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得貝母素甲回歸方程Y=1.477X+6.663（r=0.9997），貝母素乙回歸方程Y= 1.37X+6.744（r=0.9994），貝母素甲及貝母素乙分別在7.3～581μg/mL及5.25～419μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.4回收率試驗(yàn)：精密稱取兩種具有代表性的浙貝提取物固體分散體（即載體材料分別為PEG6000與PVPK30，藥載比均為1∶10）各9份，每份精密加入貝母素甲及貝母素乙對(duì)照品適量，依“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算回收率與RSD。結(jié)果顯示，高、中、低3種加樣量下，兩種具有代表性的固體分散體中貝母素甲及貝母素乙回收率分別在95.26%～102.54%（n=3）及96.32%～103.73%（n=3）之間，RSD分別在0.98%～2.31%及1.85%～3.84%之間，表明樣品回收率符合要求。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：取上述兩種具有代表性的固體分散體的溶出樣品，分別于0、4、8、10h進(jìn)樣，按上述色譜方法測(cè)定貝母素甲及貝母素乙的峰面積，測(cè)得的2種供試溶出液中貝母素甲及貝母素乙峰面積RSD分別為1.27%（PEG6000，藥載比1∶10）與1.96%（PVP K30，藥載比1∶10），表明溶出樣品在10h內(nèi)穩(wěn)定。2.4浙貝提取物固體分散體的含量測(cè)定：分別精密稱取各種浙貝提取物固體分散體粉末適量，依“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述HPLC-ELSD方法測(cè)定其中貝母素甲及貝母素乙的含量，各組固體分散體中測(cè)得的貝母素甲及貝母素乙含量與投藥量一致，具體見(jiàn)表1。

表1　浙貝提取物固體分散體含量測(cè)定結(jié)果（，n=3）

表1　浙貝提取物固體分散體含量測(cè)定結(jié)果（，n=3）

編號(hào)　固體分散體　貝母素甲含量/μg·g-1貝母素乙含量/μg·g-112345678 PEG（藥載比1∶4）PEG（藥載比1∶6）PEG（藥載比1∶8）PEG（藥載比1∶10）PVP（藥載比1∶4）PVP（藥載比1∶6）PVP（藥載比1∶8）PVP（藥載比1∶10）519.5±1.94 326.8±0.96 287.0±2.45 219.1±1.71 398.16±2.56 271.45±1.56 201.93±0.99 160.7±1.48 380.5±2.13 247.0±1.45 221.3±2.57 167.25±1.44 278.53±3.48 234.79±2.66 160.15±1.79 122.65±0.91

2.5體外溶出度試驗(yàn)：參照《中國(guó)藥典》2015年版二部溶出度測(cè)定法第三法進(jìn)行溶出試驗(yàn)。精密稱取各種浙貝提取物固體分散體適量，以1%SDS水溶液為溶出介質(zhì)，溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100r·min-1進(jìn)行試驗(yàn)，于5、10、20、30、45、60、90min分別取樣3mL，同時(shí)補(bǔ)加等量同溫溶出介質(zhì)。樣品溶液用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液用HPLC-ELSD檢測(cè)，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥物濃度，計(jì)算累積溶出百分率。

3　結(jié)果

3.1載體材料的篩選：溶出度結(jié)果（圖2，3）顯示，以PVP K30，PEG6000為載體將浙貝提取物制成固體分散體后，貝母素甲及貝母素乙的溶出速率較浙貝提取物均有顯著提高，其中以PEG6000為載體制得的固體分散體貝母素甲及貝母素乙均快速溶出，5min內(nèi)貝母素甲及貝母素乙的累積溶出率達(dá)64%及63%，顯著高于PVP K30載體制得的固體分散體，故選擇PEG6000為載體制備浙貝提取物固體分散體。

3.2載體比例的選擇：分別對(duì)浙貝提取物-PEG6000 1∶4、1∶6、1∶8 及1∶10樣品進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，考察不同配比載體對(duì)體外溶出度的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4及圖5。從圖中可看出，貝母素甲及貝母素乙在四種不同藥載比下均溶出迅速，90min時(shí)，藥載比為1∶6、1∶8、1∶10時(shí)貝母素甲的累積溶出率接近，藥載比為（1∶4，1∶6，1∶8）時(shí)貝母素乙的累積溶出率接近，綜合上述結(jié)果，我們認(rèn)為選用PEG6000（藥載比1∶6）較為合適，此時(shí)載體用量適中。

3.3掃描電鏡：通過(guò)SEM掃描電鏡觀察藥物、載體材料、藥物與載體材料物理混合物及固體分散體的形態(tài)，結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖中可看出，PEG6000（圖6A）為一些不規(guī)則形狀的結(jié)晶粉末，粒徑在56.7～140μm之間，浙貝提取物（圖6B）為一些表面較光滑且大小不一的粉末，粒徑在5.45～92.53μm之間，PEG6000與浙貝提取物的物理混合物（圖6C）與PEG6000（圖6A）及浙貝提取物（圖6B）比較，未發(fā)生明顯變化。浙貝提取物固體分散體（圖6D）可見(jiàn)顆粒表面不再光滑，載體與藥物發(fā)生了不同程度的結(jié)合，推測(cè)藥物可能以無(wú)定形的形態(tài)分散于PEG6000中。

3.4紅外：分別取適量的PEG6000，浙貝提取物及浙貝提取物PEG6000（藥載比1∶6）的固體分散體和物理混合物，經(jīng)溴化鉀壓片后，在400～4000cm-1進(jìn)行紅外掃描，研究藥物和載體之間的相互作用，紅外光譜圖如圖7所示。比較可見(jiàn)，質(zhì)量比相同的浙貝提取物-PEG6000機(jī)械混合物（圖7C）和固體分散物（圖7D）的紅外光譜圖在指紋區(qū)以及其他區(qū)域均基本相似，沒(méi)有顯示浙貝提取物與PEG6000之間有氫鍵等作用，這表明，固體分散物中浙貝提取物與PEG6000分子間未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，它們間僅僅是物理作用。

4　小結(jié)

本研究采用固體分散技術(shù)，選擇水溶性載體材料PEG6000 與PVP K30制備浙貝提取物固體分散體，改善其中貝母素甲及貝母素乙的溶出問(wèn)題。溶出度試驗(yàn)結(jié)果顯示，載體材料種類及藥載比對(duì)固體分散體中貝母素甲及貝母素乙的溶出具有不同的影響，PEG6000提高溶出度的作用相對(duì)優(yōu)于PVP K30。PEG6000固體分散體系可顯著增加浙貝提取物中貝母素甲及貝母素乙的溶出，最佳藥載比為1∶6，固體分散物中浙貝提取物與PEG6000分子間未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，他們間僅僅是物理作用，其增溶機(jī)制可能與晶態(tài)性質(zhì)等改變有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。

［1］錢伯初，許衡鈞.浙貝母堿和去氫浙貝母堿的鎮(zhèn)咳鎮(zhèn)靜作用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1985，20（4）：306-308.

［2］李仝，胡凱文，陳信義，等.浙貝母對(duì)呼吸系統(tǒng)耐藥金黃色葡萄球菌逆轉(zhuǎn)作用的臨床研究 ［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，24 （5）：51-52.

［3］Li P，Xu GJ，Xu LS，et al.Active constituents of the bulbs of fritillaria ebeiensis and their antitumour activity in mice［J］. Phytother Res，1995，9（1）：460-462.

［4］陳麗華，劉麗麗，劉紅寧，等.LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中貝母素甲、貝母素乙的濃度及其在藥代動(dòng)力學(xué)中的應(yīng)用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（7）：891-894.

［5］戴春蘭，王光發(fā)，廖正根，等.柚皮素-PVPK30固體分散體的制備及體外特性研究［J］.中成藥，2011，33（1）：45-49.

［6］韓剛，閻林奇，索煒，等.大黃素固體分散體的制備及其溶出度測(cè)定［J］.中草藥，2011，42（3）：487-490.

［7］巫劍峰，邱佩斯，陳彥雯，等.丹參提取物固體分散體的制備及溶出特性［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30（1）：900-905.

Preparation and dissolution study of solid dispersions of Fritillaria thunbergii Miq.extract

Liu Lili Chen Lihua*（Jiangxi university of traditional Chinese medicine，Nanchang，330004）

0bjective：To prepare solid dispersions of Fritillaria thunbergii Miq.extract and investigate their dissolution behaviour by using peimine and peiminine as index component.Method：Using PEG6000 and PVP K30 as carriers，the solid dispersions were prepared by melted method and dissolved method respectively.Comparing the dissolution behaviour of Fritillaria thunbergii Miq.extract with solid dispersions，searching the optimal technological condition.Result：A HPLC-ELSD method was using to determine the dissolution liquid，the method was accurate and stable.Solid dispersions improve in vitro dissolution velocity ofpeimine and peiminine significantly. Conclusion：The solid dispersion，which was prepared with PEG6000 as carrier at a drug carrier ratio of 1∶6，demonstrated the optimal dissolution behaviour.Compared with Fritillaria thunbergii Miq.extract，the dissolution of peimine and peiminine from the solid dispersions was markedly enhanced.

Fritillaria thunbergii Miq.extract Peimine Peiminine Dissolution characteristics

R284

A

1672-8351（2016）09-0007-03

江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研計(jì)劃（課題編號(hào)：2013A027）