劉宴林鄭錦坤徐曉梅郭基燕黃義純譚本仁（.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬粵北人民醫(yī)院　韶關(guān)52026；2.韶關(guān)市食品藥品檢驗所　韶關(guān)　52028）

HPLC法測定復(fù)方丹七郁膠囊中丹酚酸B的含量△

劉宴林1鄭錦坤1徐曉梅1郭基燕2黃義純2譚本仁1（1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬粵北人民醫(yī)院韶關(guān)512026；2.韶關(guān)市食品藥品檢驗所韶關(guān)512028）

目的：建立高效液相法測定復(fù)方丹七郁膠囊中丹酚酸B含量的方法。方法：采用Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；以甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）為流動相，波長為286nm；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：丹酚酸B 在6.25～249.87μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率100.51%（RSD為0.3%，n=6）。結(jié)論：該法快速，簡便易行，結(jié)果可靠，專屬性強，可作為復(fù)方丹七郁膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)。

復(fù)方丹七郁膠囊 丹酚酸B高效液相色譜法

復(fù)方丹七郁膠囊是基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論研制的中藥復(fù)方制劑，具有補肝腎、活血化瘀、降血脂、抗動脈粥樣硬化的功效。該方由丹參、三七、山楂、川芎等8種中藥組成，對高脂血癥、腦動脈粥樣硬化癥、冠心病等有良好的療效。方中丹參為君藥，主要活性成分為丹參酮ⅡA、丹酚酸B等。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法，建立了處方中丹酚酸B的含量測定方法，可用于復(fù)方丹七郁膠囊的質(zhì)量控制。

1　儀器與試藥

1.1儀器：AG-135電子天平（瑞士METTLER T0LED0公司）；LC-2010C高效液相色譜儀（島津公司）；HT-300BQ數(shù)控超聲波清洗器（濟(jì)寧恒通超聲電子設(shè)備有限公司）。

1.2試劑：丹酚酸B對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號：111562-201313，含量97.0%；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

1.3樣品：復(fù)方丹七郁膠囊，批號為：20140201、20140301、20140401。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱：Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）；檢測波長：286nm；流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2供試品溶液的制備：取復(fù)方丹七郁膠囊內(nèi)容物約1g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加入70%甲醇適量，超聲處理30min（功率350W，頻率50kHz），取出，放冷，定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3陰性對照溶液的制備：按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中處方工藝制成缺丹參的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，依法測定。結(jié)果表明，復(fù)方丹七郁膠囊中其他成分對丹酚酸B的測定無干擾，見圖1。

2.4對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品12.88mg至50mL容量瓶中，加70%甲醇適量，超聲處理30min，取出，放冷，定容至刻度，制成濃度為0.26mg·mL-1的對照品溶液，備用。

2.5線性關(guān)系考察：精密稱取丹酚酸B對照品溶液適量加70%甲醇稀釋成濃度為6.25μg·mL-1；12.49μg·mL-1；62.47μg·mL-1；124.94μg·mL-1；249.87μg·mL-1的對照品溶液，在上述色譜條件下試驗，測定各濃度的峰面積，以丹酚酸B峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X（μg），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得丹酚酸B回歸方程：Y=3550.4X-2350.4，r=0.9992。結(jié)果表明丹酚酸B在6.25～12.49μg·mL-1范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗：分別精密吸取丹酚酸B對照品溶液10μL，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定含量。丹酚酸B的RSD%為0.07%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗：取復(fù)方丹七郁膠囊約1.0g（批號：20140201），精密稱定，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，于室溫下分別放置0、2、4、8、12、24h后進(jìn)樣，記錄丹酚酸B的峰面積，結(jié)果丹酚酸B含量的RSD為0.8%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗：取復(fù)方丹七郁膠囊約1.0g（批號：20140201），精確稱取6份，依“2.2”項下方法制備供試品溶液及測定。丹酚酸B的平均含量為9.58mg·g-1，RSD為0.24%。表明本方法重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率試驗：稱取6份同一批樣品（批號：20140201），約0.5g，精密稱定，分別精密加入丹酚酸B對照品溶液，按“2.2”項下方法制備供試液及測定，計算回收率。測得丹酚酸B的平均回收率為100.51%，RSD為0.31%。結(jié)果見表1。

表1　丹酚酸B的回收率測定（n=6）

2.10含量測定：取3批樣品，按“2.2”項下制備供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2　復(fù)方丹七郁膠囊中丹酚酸B的含量（n=3）

3　討論

中藥丹參是唇形科植物丹參（Salviae MiltiorrhizaBunge）的干燥根及根莖，作為活血化瘀藥，被廣泛用于治療冠心病、心絞痛等心血管疾病。丹參的化學(xué)成分主要為脂溶性二萜醌類和水溶性酚酸類，其中水溶性酚酸類中以丹參素和原兒茶醛含量較高，活性較強［1］。近年研究發(fā)現(xiàn)作為丹參素衍生物的丹參多酚酸鹽是丹參最主要的水溶性有效成分，具有抗血栓，改善血液循環(huán)，減輕白細(xì)胞損傷、抗氧化、減少細(xì)胞凋亡等作用［2］。丹參作為方中君藥，丹酚酸B作為其主要藥理成分故選為含量測定的指標(biāo)。

本次研究參照了《中華人民共和國藥典》（2015年版）［3］，考察了不同濃度甲醇對復(fù)方丹七郁膠囊中丹酚酸B的提取率。結(jié)果表明，75%甲醇提取率高，雜質(zhì)峰少，重現(xiàn)性好，故本試驗采用75%甲醇為提取溶劑。通過紫外掃描顯示丹酚酸B在286mm波長處有最大吸收，同時參考相關(guān)文獻(xiàn)［4］及反復(fù)實驗選取甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）作為流動相可使得色譜峰分離度大于1.5，峰型良好，無雜質(zhì)干擾峰，保留時間較短。

采用本研究建立的HPLC含量測定方法，對復(fù)方丹七郁膠囊進(jìn)行含量測定。結(jié)果表明，本方法簡便可行，重現(xiàn)性良好，適用于復(fù)方丹七郁膠囊的質(zhì)量控制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定。

［1］吳燕燕，孫煜，王易.丹參多酚酸鹽活血化瘀作用的多元化藥理作用［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，27（12）：1072-1076.

［2］戈升榮，俞一心，謝更新.丹酚酸的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2002，9（25）：683-686.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

［4］楊道炬，張懷，劉樹強，等.HPLC法測定消脂膠囊中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量 ［J］.中藥新藥與臨床藥理，2014，25（6）：737-740.

△項目名稱：復(fù)方丹七郁膠囊工藝制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，項目編號：20161245。

Determination of Compound DanQiYu Capsule of Salvianolic acid B by HPLC

Liu Yanlin1Zheng Jinkun1Xu Xiaomei1Guo Jiyan2Huang Yichun2Tan Benren1（1.The Affiliated YueBei People’s Hospital of Shantou University Medical College，Shaoguan，512026；2.shaoguan institue for food and drug control，shaoguan，512028）

0bjective：To develop a high performance liquid chromatography（HPLC）method for simultaneous determination of salvianolic acid B in Compound DanQiYu jiangzhi Capsule.Methods：Samples were analyzed on Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）. Salvianolic acid B was detected with a mobile phase of methanol-acetonitrile-methanoic acid-water（10：30：1：59）for isocratic elution and a detection wavelength of 286 nm.The flow rate was 1.0mL·min-1，temperature of column was set at 30℃ and injection volume was 10μL.Results：Salvianolic acid B showed good linearity in the range of 6.25～249.87μg·mL-1，and the recovery was 100.51%（RSD= 0.3%，n=6）.Conclusion：The established method is rapid，practical and accurate，and is suitable for the quanlity control of Fufang DanQiYu Capsule.

Fufang DanQiYu Capsule Salvianolic acid B HPLC

R927.2

A

1672-8351（2016）09-0002-02