滕希峰，李鐘，方壬德，李國全，黃詩瑩，何洋，何琳（廣東藥科大學(xué).國家中醫(yī)藥管理局嶺南藥材生產(chǎn)與開發(fā)重點研究室，廣東廣州50006；.醫(yī)藥化工學(xué)院，廣東中山58458；.廣州市醫(yī)療救助服務(wù)中心，廣東廣州5060）

吲哚美辛口服自微乳化給藥系統(tǒng)的大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究

滕希峰1，李鐘1，方壬德1，李國全3，黃詩瑩1，何洋2，何琳2
（廣東藥科大學(xué)1.國家中醫(yī)藥管理局嶺南藥材生產(chǎn)與開發(fā)重點研究室，廣東廣州510006；2.醫(yī)藥化工學(xué)院，廣東中山528458；3.廣州市醫(yī)療救助服務(wù)中心，廣東廣州510630）

目的研究吲哚美辛口服自微乳化給藥系統(tǒng)（IDM-SMEDDS）在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)特征。方法大鼠灌胃給予IDM-SMEDDS（給藥劑量按IDM計為8.0 mg/kg），采用HPLC法測定IDM在大鼠血漿中的藥物濃度，以IDM原料藥制備混懸液作為參比，繪制兩者血藥濃度-時間曲線，DAS Ver2.0藥動學(xué)軟件計算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果IDM-SMEDDS的藥動學(xué)過程符合二室模型，權(quán)重因子為1/C2，IDM混懸液的藥動學(xué)過程符合一室模型，權(quán)重因子為1/C2；大鼠口服IDM-SMEDDS的Cmax為42.56 μg/mL、Tmax為1 h、AUC0-48 h為814.25（μg·h）/mL，口服IDM混懸液的Cmax為9.72 μg/mL、Tmax為6 h、AUC0-48 h為134.57 （μg·h）/mL。結(jié)論自微乳化給藥系統(tǒng)可以提高吲哚美辛的口服生物利用度。

吲哚美辛；自微乳化給藥系統(tǒng)；藥動學(xué)參數(shù)

口服制劑具有給藥方便、患者依從性高的特點，是最方便的給藥方式。由高通量篩選獲得的候選藥物中，40%的化合物屬于難溶性藥物［1］。難溶性藥物在體內(nèi)消化道的溶出是吸收的限速步驟，因溶解度小、吸收不好、生物利用度低，因此很難獲得較好的治療效果。研究發(fā)現(xiàn)，自微乳化給藥系統(tǒng)是一種能夠很好地改善口服藥物生物利用度的新劑型［2］。自微乳化給藥系統(tǒng) （self-microemulsifying drug delivery systems，SMEDDS）是由藥物、油相、一種（或多種）乳化劑和一種（或多種）助乳化劑組成均相混合物，可以在水溶液中自發(fā)形成透明或輕微淺藍(lán)色乳光的O/W型乳滴，具有熱力學(xué)及動力學(xué)穩(wěn)定性的性質(zhì)，粒徑范圍為10～300 nm。只需要輕微攪拌，或經(jīng)口服后在胃腸道內(nèi)蠕動，即可自發(fā)形成微乳。由于形成的微乳具有大的表面積、滲透性好及避免藥物代謝酶及糖蛋白p-GP的破壞等優(yōu)勢，可為提高水難溶性藥物的口服吸收提供一種新的劑型。吲哚美辛在水中溶解度為0.004 g/L［3］，pH為7.4時的油水分配系數(shù)為1.49［4］。在生物藥劑分類系統(tǒng)（biopharmaceutical classification system，BCS）中屬第Ⅱ類，滲透性高但溶解度低［5-6］。本課題組前期已制備了IDM-SMEDDS［7］，本文主要考察IDM-SMEDDS在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)行為，以自制IDM混懸液為參比，為SMEDDS的體內(nèi)研究提供依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器

BP211D型十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯）；JB-2型恒溫磁力攪拌器（上海智光儀器儀表有限公司）；IKI磁力攪拌器（無錫市宇壽醫(yī)療器械有限公司）；ZH-2型自動漩渦混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市富華儀器有限公司）；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；800型電動離心機（廣州富城儀器廠）；TGL-16B型高速臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；激光粒度散射儀（英國馬爾文）；依利特230高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；UV230+紫外-可見檢測器（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2000色譜工作站（大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2試劑

吲哚美辛對照品（供含量測定用，批號:100258-200403，中國藥品生物制品檢定所）；吲哚美辛原料藥［阿拉丁試劑（上海）有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞99%，批號:060619］；自制 IDM-SMEDDS（規(guī)格:30 mg/ 0.45 g，批號:20140519）；萘普生鈉對照品（批號: 100330-200101，中國藥品生物制品檢定所）；油酸乙酯（上海飛祥化工廠）、吐溫-80（批號:10200319，上海申宇醫(yī)藥化工有限公司）、聚乙二醇400（進(jìn)口分裝，批號:20090419，廣東光華化學(xué)廠有限公司）、無水乙醚（廣州化學(xué)試劑廠）、冰醋酸均為市售分析純；制劑所用水為純化水（pH=6.0）；甲醇（色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；高效液相色譜分析所用水為雙蒸水（阻值＞16）。

1.3動物

SD大鼠12只，雌雄各半，體質(zhì)量200～250 g，SPF級，購自南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，許可證號為 SCXK（粵）2011-0015。飼養(yǎng)條件:溫度18～29℃，日溫差≤3℃，相對濕度40%～70%。水為純化水，飼料購于南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制

2.1.1吲哚美辛對照品溶液的配制 精密稱取吲哚美辛對照品10.08 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇適量振搖溶解并稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為100.8 μg/mL的吲哚美辛甲醇儲備液。另取該溶液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得質(zhì)量濃度為10.08 μg/mL的吲哚美辛對照品溶液。

2.1.2內(nèi)標(biāo)溶液配制 精密稱取內(nèi)標(biāo)物萘普生鈉對照品10.50 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解，搖勻稀釋至刻度，制得質(zhì)量濃度為105.0 μg/mL的萘普生鈉對照品溶液。另取該溶液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得質(zhì)量濃度為10.50 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2血漿樣品處理

精密移取血漿150 μL于5 mL帶塞EP管中，依次加內(nèi)標(biāo)物萘普生鈉對照品溶液50 μL及10%乙酸溶液 100 μL，渦旋振蕩 2 min，加入無水乙醚3 mL，渦旋振蕩5 min，10 000 r/min離心10 min，吸取上層無水乙醚提取液，向管內(nèi)下層液再加入無水乙醚3 mL重復(fù)萃取1次。合并2次的無水乙醚提取液，置40℃水浴蒸干，蒸干后，用無水乙醚1 mL潤洗管壁，再次蒸干，將管內(nèi)殘留物用甲醇-水-冰醋酸（體積比58∶22∶0.05）150 μL溶解，10 000 r/min離心10 min，取上清液20 μL，HPLC測定。

2.3IDM-SMEDDS生物樣品分析方法的建立

2.3.1色譜條件 色譜柱為島津VP-ODS C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱溫:25℃；流動相為甲醇-水-冰醋酸（體積比 58∶22∶0.05）；流速: 1.0 mL/min；檢測波長:254 nm；進(jìn)樣量:20 μL。

2.3.2專屬性試驗 分別取空白血漿、血漿+吲哚美辛對照品（質(zhì)量濃度為10.08 μg/mL）+內(nèi)標(biāo)物（質(zhì)量濃度為10.50 μg/mL）、IDM-SMEDDS給藥1 h血漿樣品，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，各峰分離度符合要求，理論塔板數(shù)按吲哚美辛計算不低于5 000，吲哚美辛的保留時間在13 min左右，內(nèi)標(biāo)物萘普生鈉的保留時間在6 min左右，與雜質(zhì)峰可實現(xiàn)基線分離，內(nèi)源性物質(zhì)對樣品測定無干擾，方法專屬性好。

圖1　大鼠血漿中IDM-SMEDDS的HPLC圖譜Figure 1 HPLC chromatograms of IDM-SMEDDS in rats plasma

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下限 精密稱取吲哚美辛對照品40.16 mg，置100 mL容量瓶中，甲醇適量振搖溶解并稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為 401.6 μg/mL的吲哚美辛甲醇儲備液，分別移取 0.10、0.50、1.00、1.50、6.00、8.00、10.00 mL，用甲醇分別配制成質(zhì)量濃度為4.016、20.08、40.16、60.24、241.0、321.3、401.6μg/mL的系列吲哚美辛溶液。精密移取空白大鼠血漿150 μL，分別加入上述系列質(zhì)量濃度的吲哚美辛溶液50 μL，再加入“2.1.2”項下內(nèi)標(biāo)物萘普生鈉對照品溶液 50 μL，渦旋混合2 min，得1.004、5.020、10.04、15.06、60.25、80.32、100.4 μg/mL的血漿吲哚美辛質(zhì)量濃度樣品。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程以藥物峰面積（Ai）與內(nèi)標(biāo)物峰面積（As）的比值（A）對質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程A=0.129 ρ-0.280，r=0.999 4。結(jié)果表明血漿吲哚美辛質(zhì)量濃度在1.004～100.4 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積比值線性關(guān)系良好。血漿樣品最低定量限為1.004 μg/mL。

2.3.4精密度試驗 取大鼠空白血漿150 μL，加入質(zhì)量濃度分別為4.016、241.0、401.6 μg/mL的吲哚美辛溶液各50 μL，再加入內(nèi)標(biāo)物萘普生鈉對照品溶液50 μL，制備成低、中、高3個質(zhì)量濃度的血樣各6份，按“2.2”項下操作，于同1天重復(fù)測定，記錄峰面積，根據(jù)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算各樣品中吲哚美辛的質(zhì)量濃度，計算日內(nèi)精密度，RSD結(jié)果分別為1.1%、1.8%、1.9%。同法操作，連續(xù)測定3天，計算日間精密度，RSD結(jié)果分別為3.3%、2.6%、1.3%，符合生物分析方法指導(dǎo)原則要求［8］。

2.3.5樣品穩(wěn)定性試驗 配制低、中、高3種質(zhì)量濃度（1.004、60.25、100.4 μg/mL）的吲哚美辛血漿標(biāo)準(zhǔn)溶液，每種濃度3份，經(jīng)歷3次冰凍-解凍循環(huán)后，按“2.2”項下操作處理血漿樣品，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果低、中、高3個質(zhì)量濃度RSD分別為3.8%、4.2%、2.9%，表明凍融條件對血漿樣品的檢測結(jié)果沒有明顯的影響。

2.3.6絕對回收率試驗 配制質(zhì)量濃度分別為1.004、60.25、100.4 μg/mL的吲哚美辛溶液，直接進(jìn)樣20 μL，其峰面積作為對照組的峰面積，另取大鼠空白血漿150 μL，分別加不同濃度的吲哚美辛溶液，使成質(zhì)量濃度為1.004、60.25、100.4 μg/mL的樣品溶液，按“2.2”項下操作處理血漿樣品，分別記錄對照組的峰面積及樣品的峰面積，絕對回收率分別為（78.42±2.1）%、（71.41±1.6）%、（78.53±3.1）%。

2.4IDM-SMEDDS和IDM混懸液大鼠體內(nèi)血藥濃度的測定

2.4.1給藥與血樣采集 取健康SD大鼠12只，體質(zhì)量200～250 g，隨機分成2組，每組6只，給藥前禁食12 h，自由飲水。分別灌胃給予IDM-SMEDDS與自制IDM混懸液，給藥劑量按IDM計均為8.0 mg/kg。分別于給藥前取空白血漿，給藥后0.5、1、2、3、4、6、8、10、24、36、48 h大鼠眼眶靜脈叢取血0.5 mL，置于肝素化離心管中，3 000 r/min離心15 min，分離并吸取上層血漿（約0.2 mL），備用。

2.4.2血藥濃度的測定 將待測樣品不同時間點的峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計算灌胃給藥后IDM-SMEDDS與IDM混懸液在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，繪制血藥濃度-時間曲線（n= 6），結(jié)果見圖2。從圖中可見IDM-SMEDDS的血藥濃度明顯高于IDM混懸液。

圖2　血漿中IDM-SMEDDS和IDM混懸液的血藥濃度-時間曲線Figure 2 The plasma concentration-time curves of IDMSMEDDS and IDM suspension in rats after oral administration（s，n=6）

2.5藥動學(xué)參數(shù)計算

用DAS 2.0軟件處理IDM-SMEDDS和IDM混懸液的血藥濃度數(shù)據(jù)，對IDM-SMEDDS和IDM混懸液的平均血藥濃度-時間曲線分別進(jìn)行房室模型擬合，根據(jù)AIC（Akaike′s information criterion）值和R2（擬合值與實測值之間的相關(guān)系數(shù)）進(jìn)行綜合比較，AIC值越小，R2值越大，則擬合效果越好。根據(jù)AIC最小原則判斷IDM-SMEDDS和IDM混懸液的隔室模型，結(jié)果表明，IDM-SMEDDS的藥動學(xué)符合二室模型，IDM混懸液的藥動學(xué)符合一室模型。權(quán)重因子均為1/C2。用統(tǒng)計矩法估算二者的藥動學(xué)參數(shù)，并用t檢驗對藥動學(xué)參數(shù)間進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果見表1。

可見，灌胃給予IDM-SMEDDS后，大鼠血漿中的Cmax為42.56 μg/mL，自制IDM混懸液的Cmax為9.72 μg/mL，前者是后者的4.38倍；灌胃給予IDMSMEDDS后，大鼠血漿中的Tmax為1 h，自制IDM混懸液的Tmax為6 h，前者比后者達(dá)峰時間減少；灌胃給予IDM-SMEDDS后，大鼠血漿中的 AUC0-48 h為814.25（μg·h）/mL，而 IDM 混懸液 AUC0-48 h為134.57（μg·h）/mL，前者是后者的6.05倍。

表1　IDM-SMEDDS和IDM混懸液的大鼠血漿中部分藥動學(xué)參數(shù)Table 1 The pharmacokinetic parameters of IDM-PMC and IDM suspension in rats plasma after oral administration，n=6）

表1　IDM-SMEDDS和IDM混懸液的大鼠血漿中部分藥動學(xué)參數(shù)Table 1 The pharmacokinetic parameters of IDM-PMC and IDM suspension in rats plasma after oral administration，n=6）

與IDM混懸液比較:*P＜0.05；**P＜0.005。

藥動學(xué)參數(shù)　IDM-SMEDDS　IDM混懸液Tmax/h　1.0　6.0 Cmax/（μg·mL-1）　42.56±2.82**　9.72±1.58 AUC0-48 h/（μg·h·mL-1）　814.25±234.69*　134.57±62.24 AUC0-∞/（μg·h·mL-1）　936.50±122.04**　135.72±62.27 AUM0-48 h/（μg·h·mL-1）　14 177.26±3 918.04*1 976.28±1 061.73 MRT0-48 h/h　17.45±0.21*　14.26±1.44

3　討論

本文采用HPLC法測定大鼠體內(nèi)IDM的血藥濃度，預(yù)試驗時分別以甲醇、三氯甲烷、正己烷、無水乙醚、丙酮等為萃取試劑萃取血液中的吲哚美辛，結(jié)果顯示甲醇沉淀蛋白質(zhì)的能力佳，但是甲醇揮發(fā)后有大量蛋白析出，影響血藥濃度的測定，比較上述試劑以無水乙醚萃取的效果最好，故本法選取無水乙醚為萃取溶劑。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，內(nèi)源性雜質(zhì)與吲哚美辛能得到較好分離，空白血漿吲哚美辛的回收率大于70%，且結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性良好，符合生物樣品分析的要求。

吲哚美辛在水中溶解度為0.004 g/L，幾乎不溶，制成IDM-SMEDDS后溶解度增加。因吲哚美辛為非甾體抗炎藥，市售口服片劑、膠囊規(guī)格為25 mg/片，本文未考察其最大載藥量，直接制成30 mg 的IDM-SMEDDS。從大鼠灌胃給予IDM混懸液和IDM-SMEDDS來看，IDM的Cmax為9.72 μg/mL，制成IDM-SMEDDS后Cmax為42.56 μg/mL，而且達(dá)峰時間提前，提示將難溶性藥物制成自微乳化給藥系統(tǒng)可以提高生物利用度及起效快。藥動學(xué)結(jié)果表明，IDM-SMEDDS符合二室模型，IDM混懸液符合一室模型，原因可能是IDM-SMEDDS吸收很快或者存在獨特的吸收機理，抑或是選擇采樣的時間點的問題，在體內(nèi)的藥-時過程為二室模型，更準(zhǔn)確深入研究需要增加吸收相的時間點。

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（責(zé)任編輯：陳翔）

Study on the pharmacokinetics of indomethacin oral self-microemulifying drug delivery system（SMEDDS）in rats

TENG Xifeng1，LI Zhong1，F(xiàn)ANG Rende1，LI Guoquan3，HUANG Shiying1，HE Yang2，HE Lin2
（1.Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine for Production&Development of Cantonese Medicinal Materials，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2.School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangdong Pharmaceutical University，Zhongshan 528458，China；3.Guangzhou Medical Assistance Service Center，Guangzhou 510630，China）

Objective To study the pharmacokinetics of indomethacin oral self-microemulsifying drug delivery system（IDM-SMEDDS）in rats.Methods IDM-SMEDDS was given to rats by oral administration （8.0 mg/kg）.HPLC method was used to determine the plasma concentration of IDM.The plasma concentration-time profiles were obtained in contrast with indomethacin suspension.The pharmacokinetic parameters were calculated by using DAS ver2.0 as pharmacokinetic software.Results Pharmacokinetics of IDM-SMEDDS was accord with two-compartment model with the weight factor of 1/C2.IDM suspension was accord with one-compartment model with the weight factor of 1/C2.After given IDM-SMEDDS，the Cmaxwas 42.56 μg/mL，Tmaxwas 1 h，and AUC0-48 hwas 814.25（μg·h）/mL.After given self-made IDM suspension，the Cmaxwas 9.72 μg/mL，Tmaxwas 6 h，and AUC0-48 hwas 134.57（μg·h）/mL.Conclusion The self-microemulsifying drug delivery system can increase the oral bioavailability of indomethacin.

indomethacin；self-microemulsifying drug delivery system；pharmacokinetics

天然藥物化學(xué)

R965.5

A

1006-8783（2016）04-0406-04

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016062708

2016-06-27

廣東藥學(xué)院“創(chuàng)新強校工程”醫(yī)藥化工省級實驗教學(xué)示范中心資助項目；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項目（A2015345）；廣東省科技計劃項目（2016A020226018）

滕希峰（1977—），男，講師，主要從事中藥資源與新藥研發(fā)，電話:020-39352176，Email:xfteng78@163.com；通信作者:何洋，女，高級實驗師，主要從事新藥研究與開發(fā)工作，電話:0760-88207977，Email:heyang626@163.com；何琳，女，高級實驗師，主要從事藥劑新劑型與新技術(shù)，電話:0760-88207977，Email:helin721@163.com。

網(wǎng)絡(luò)出版時間:2016-07-011 10:09 網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160711.1009.001.html