張　嵐,王　丹,聶晶石

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院,吉林吉林 132013;2.吉林省中醫(yī)藥管理局二級(jí)實(shí)驗(yàn)室,吉林吉林 132013;3.吉林省敦化市蠶業(yè)科技發(fā)展有限責(zé)任公司,吉林敦化 133700)

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蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫功能的影響

張嵐1,2,王丹1,2,聶晶石3

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院,吉林吉林 132013;2.吉林省中醫(yī)藥管理局二級(jí)實(shí)驗(yàn)室,吉林吉林 132013;3.吉林省敦化市蠶業(yè)科技發(fā)展有限責(zé)任公司,吉林敦化 133700)

本文研究了蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能影響。將雄性ICR小鼠隨機(jī)分為I、II、III三個(gè)大組,每大組隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、蛹蟲(chóng)草低(0.167 g/kg·bw)、中(0.333 g/kg·bw)、高(0.999 g/kg·bw)劑量組,每組10 只。每天灌胃一次,連續(xù)30 d。分別進(jìn)行淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、并測(cè)定抗體生成細(xì)胞及血清溶血素。結(jié)果表明,與陰性對(duì)照組相比,蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠的體重,脾臟/體重比值,胸腺/體重比值無(wú)顯著性影響(p>0.05)。蛹蟲(chóng)草中、高劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)有顯著性影響(p<0.05);蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)小鼠體液免疫功能也具有一定調(diào)節(jié)作用,蛹蟲(chóng)草低、中、高劑量組對(duì)抗體生成細(xì)胞作用均有顯著性影響(p<0.05),且中、高劑量組對(duì)HC50值影響有顯著性影響(p<0.05)。說(shuō)明一定劑量的蛹蟲(chóng)草片具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫能力,也為蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

蛹蟲(chóng)草片劑,體液免疫,細(xì)胞免疫

蛹蟲(chóng)草(Cordycepsmilitaris,CM)指寄生于鱗翅目昆蟲(chóng)蛹體后能形成蟲(chóng)菌復(fù)合體的真菌,也是人們通常所說(shuō)的北冬蟲(chóng)夏草,多出現(xiàn)在北半球的大部分地區(qū)[1]。與冬蟲(chóng)夏草都屬于蟲(chóng)草屬,但是屬于不同種類的藥用真菌。蛹蟲(chóng)草對(duì)于寄主和生存環(huán)境并沒(méi)有嚴(yán)格的要求[2],加之蛹蟲(chóng)草已實(shí)現(xiàn)大規(guī)模人工栽培,使其逐漸成為野生冬蟲(chóng)夏草的替代品,由于具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功效,已被越來(lái)越多的消費(fèi)者所接受[3]。蛹蟲(chóng)草中目前已被確定的藥理學(xué)活性成分有多種,這其中包括蟲(chóng)草素,蟲(chóng)草氨基酸,多糖,大環(huán)內(nèi)脂類和麥角甾醇等[4]。蟲(chóng)草素屬于核苷類物質(zhì),是蛹蟲(chóng)草中的主要活性物質(zhì)之一,也是蟲(chóng)草中含量最大的脫氧核苷類物質(zhì)?？蒲腥藛T曾從蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)液中分離得到蟲(chóng)草素[5],研究發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草素能夠促進(jìn)細(xì)胞分化、增強(qiáng)某些細(xì)胞株的抗腫瘤活性和巨噬細(xì)胞系的趨化性,具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[6]。蛹蟲(chóng)草中含有豐富的蛋白質(zhì)和多肽,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人體中,很多具有生物活性的蛋白質(zhì)具有抗腫瘤作用[4]。另外,蛹蟲(chóng)草多糖也已經(jīng)被證明具有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)、延緩衰老、抗腫瘤、抗輻射、降血糖等功能作用[7]。許多研究?jī)A向于蛹蟲(chóng)草多糖的分離純化,尤其針對(duì)不同部位多糖含量的研究[8],研究證明蛹蟲(chóng)草多糖能夠潛在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[9]。此外,蛹蟲(chóng)草中富含多達(dá)30種的微量元素,其中硒是一種極其重要的元素,硒的缺乏會(huì)引發(fā)機(jī)體發(fā)生多種疾病。經(jīng)過(guò)富硒培養(yǎng),蛹蟲(chóng)草可將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)硒,提高其藥用價(jià)值。綜上可以看出關(guān)于蛹蟲(chóng)草單一成分的功效作用研究較多,但是關(guān)于蛹蟲(chóng)草的免疫作用報(bào)道較少。目前許多慢性疾病的發(fā)生都與機(jī)體免疫力下降有直接關(guān)系,而在日常生活中通過(guò)飲食提高機(jī)體免疫力至關(guān)重要。而蛹蟲(chóng)草中含有多種活性成分,本實(shí)驗(yàn)室前期利用蛹蟲(chóng)草的活性成分以其為原料開(kāi)發(fā)蛹蟲(chóng)草片保健食品,本論文將進(jìn)一步研究蛹蟲(chóng)草片對(duì)機(jī)體免疫力的作用,研究其增強(qiáng)免疫力生理活性的作用機(jī)理,為其應(yīng)用于臨床實(shí)踐,實(shí)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草對(duì)多種疾病的靶向治療奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

柞蠶蛹蟲(chóng)草粉敦化市蠶業(yè)科技發(fā)展有限責(zé)任公司提供。

RPM1640細(xì)胞培養(yǎng)液，小牛血清，MTT上海研瑾生物有限公司;刀豆蛋白A(ConA)，Hank’s液上海撫生酶聯(lián)試劑公司;綿羊紅細(xì)胞北京博爾西科技有限公司;補(bǔ)體C豚鼠血清鄭州百基生物科技有限公司;SA緩沖液百浩天生物科技有限公司;臺(tái)酚藍(lán)染色液北京美科美生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司;異丙醇、生理鹽水南京安培化工科技有限公司;瓊脂糖上海江萊生物科技有限公司;行知生物科技有限公司。

二氧化碳培養(yǎng)箱上海智城;酶標(biāo)儀美國(guó)伯騰;721分光光度計(jì)上海精科;離心機(jī)美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特;手持式細(xì)胞計(jì)數(shù)器美國(guó)默克密理博。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1蠶蛹蟲(chóng)草片劑制備

1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方式清潔級(jí)雄性ICR小鼠160只,體重為18～22 g,由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(吉)-2011-0004。將動(dòng)物分為I、II、III、Ⅳ四個(gè)大組,每大組40只動(dòng)物。免疫I 組進(jìn)行ConA 誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn);免疫II組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn);免疫III組半數(shù)溶血值(HC50)的測(cè)定;免疫Ⅳ組抗體生成細(xì)胞數(shù)測(cè)定。每大組又隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、蛹蟲(chóng)草低、中、高劑量組,每組10 只小鼠。實(shí)驗(yàn)組給藥劑量分別按人體推薦量的2.0 g/60 kg·bw(折算成人的每公斤體重劑量0.0333 g/kg·bw),5倍(0.1665 g/kg·bw)為低劑量組,10倍(0.3333 g/kg·bw)為中劑量組,30倍(0.9999 g/kg·bw)為高劑量組。每天灌胃一次,灌胃容積0.1 mL/10 g·bw,每三天稱一次體重,連續(xù)給藥30 d,陰性對(duì)照組灌胃同體積的蒸餾水。小鼠培養(yǎng)條件為:室溫20～24 ℃,濕度50%～70%。

1.2.3蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能作用

1.2.3.1蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)無(wú)菌取脾,置于無(wú)菌Hank’s液內(nèi),制成單個(gè)細(xì)胞懸液。經(jīng)過(guò)200目篩網(wǎng)過(guò)濾,用Hank’s液洗2次,每次在1000 r/min下離心10 min,然后將細(xì)胞懸浮于1 mL的完全培養(yǎng)液中,用臺(tái)酚藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(95%以上),調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106個(gè)/mL。淋巴增殖反應(yīng):將每一只小鼠脾細(xì)胞懸浮液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中,每孔1 mL,一孔加75 μL ConA液,另一孔作為對(duì)照孔,加培養(yǎng)液75 μL,置于50% CO2,37 ℃孵箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h,每孔輕輕吸去上清液0.7 mL,加入0.7 mL不含小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液,同時(shí)加入MTT 50 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入1 mL 酸性異丙醇,吹打混勻,使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中,每個(gè)孔200μL,作3個(gè)平行,用酶標(biāo)儀,以570 nm 波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。受試樣品的光密度值顯著高于對(duì)照組的光密度值,可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性。

淋巴細(xì)胞的增殖能力=ConA孔的光密度值-不加ConA孔的光密度值

1.2.3.2蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響每只小鼠用2%(v/v)綿羊紅細(xì)胞(SRBC)腹腔免疫,每只鼠注射0.2 mL(約為1×108個(gè)SRBC)。免疫后4 d,測(cè)量左后足趾部厚度,然后在測(cè)量部位皮下注射2%(v/v)SRBC,每只鼠20 μL(約為1×108個(gè)SRBC),注射后24h測(cè)量左后足趾部厚度,同一部位測(cè)量三次,取平均值。結(jié)果以攻擊前后足趾厚度的差值來(lái)表示DTH的程度,受試樣品組的差值顯著高于對(duì)照組的差值,可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性。

1.2.4蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠體液免疫功能作用

1.2.4.1蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)抗體生成細(xì)胞的檢測(cè)(Jerne改良玻片法)將1 mL壓積SRBC加入到5 mL豚鼠血清中,4 ℃冰箱放置30 min,每隔幾分鐘振蕩一次,離心上清,分裝后于-70 ℃保存。同時(shí)以SA緩沖液按1∶8稀釋,在清潔玻片上刷一薄層瓊脂粉,干后保存?zhèn)溆?。將壓積SRBC用生理鹽水制成2%(v/v)的細(xì)胞懸浮液,每只鼠腹腔注射0.2 mL。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前5 d后的小鼠頸椎脫臼處死,取出脾臟,放在盛有Hank’s液的小平皿內(nèi),輕輕磨碎脾臟,制成細(xì)胞懸液,經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾,1000 r/min離心10 min,用Hank’s液洗2次,最后將細(xì)胞懸浮液在5 mL RPMI 1640培養(yǎng)液中,計(jì)算細(xì)胞將細(xì)胞濃度調(diào)整為5×106個(gè)/mL。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后,放于45 ℃水浴保溫,與等量pH7.2,2倍濃度的Hank’s液混合,分裝小試管,每管0.5 mL,再向管內(nèi)加50 μL 10% SRBC(v/v用SA緩沖液配制)20 μL脾細(xì)胞懸液(5×106個(gè)/mL)迅速混勻傾倒于刷瓊脂糖薄層的玻片上,做平行片,待瓊脂凝固后,將玻片水平在片架上,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1.5 h,然后用SA緩沖液稀釋劑(1∶8),加入到玻片架凹槽內(nèi),繼續(xù)溫育1.5 h后,計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。用空斑數(shù)/106脾細(xì)胞來(lái)表示,受試樣品組的空斑數(shù)顯著高于對(duì)照組的空斑數(shù)。

表2　蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響±SD,n=10)Table 2　Effect of CM on the spleen lymphocyte proliferation in ConA-treated ±SD,n=10)

1.2.4.2蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)血清溶血素的測(cè)定將1 mL壓積SRBC加入到5 mL豚鼠血清中,放4 ℃冰箱30 min,每隔幾分鐘振蕩一次,離心取上清,分裝,-70 ℃保存。用時(shí)以SA液按1∶8稀釋。將壓積SRBC用生理鹽水配成2%的細(xì)胞懸浮液,每只小鼠腹腔注射0.2 mL進(jìn)行免疫,5 d后,摘除眼球取血于離心管內(nèi),放置1 h,使血清充分析出,2000 r/min離心10 min,收集血清。取血用SA緩沖液稀釋200倍,將稀釋后的血清1 mL置試管內(nèi),依次加入10%(v/v)SRBC 0.5 mL,補(bǔ)體1 mL(用SA液按1∶8稀釋)。另設(shè)不加血清的對(duì)照管(以SA緩沖液代替)。置于37 ℃恒溫水浴中體溫30 min后,冰浴終止反應(yīng),2000 r/min離心10 min。取上清液1 mL,加都氏試劑3 mL,同時(shí)取10%(v/v)SRBC 0.25 mL加都氏試劑至4 mL,充分混勻,放置10 min后,于540 nm處以對(duì)照管作空白,分別測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示,按下列公式計(jì)算,受試樣品組的HC50顯著高于陰性對(duì)照組的HC50,可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

HC50=(樣品光密度值/SCBC半數(shù)溶血時(shí)間的光密度值)×稀釋倍數(shù)

2　結(jié)果與討論

2.1蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠臟器系數(shù)影響

胸腺的主要功能是產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞和分泌胸腺素,主要參與細(xì)胞免疫;脾臟中有豐富的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,但B淋巴細(xì)胞比例較大,因此與體液免疫關(guān)系更為密切[10]。胸腺和脾臟指數(shù)的高低取決于其中淋巴細(xì)胞增殖的程度,在一定程度上能夠反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。胸腺指數(shù)降低,機(jī)體免疫功能也會(huì)下降[11]。表1表明蠶蛹蟲(chóng)草片劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠的體重,脾臟/體重比值,胸腺/體重比值的影響情況。與陰性對(duì)照組相比,蠶蛹蟲(chóng)草片劑量組小鼠體重、脾臟/體重比值與胸腺/體重比值變化均不顯著(p>0.05)。說(shuō)明蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)于小鼠的體重,脾臟/體重比值,胸腺/體重比值的影響較小?？梢?jiàn)蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠臟器系數(shù)調(diào)節(jié)作用并不明顯。

表1蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)

Table 1Effect of CM on the internal organ indices of

組別體重(g)脾臟/體重(mg/g)胸腺/體重(mg/g)陰性對(duì)照37.56±1.654.12±0.241.94±0.17低劑量36.38±1.994.01±0.131.71±0.12中劑量37.15±2.044.06±0.191.96±0.17高劑量36.91±1.853.92±0.141.87±0.16

注:*表示與陰性對(duì)照組相比有顯著差異,p<0.05,表2～表4同。

2.2蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響見(jiàn)表2。

表2表明蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化影響。光密度值能夠反映淋巴細(xì)胞增殖程度。與陰性對(duì)照組相比,蛹蟲(chóng)草低劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化無(wú)顯著性影響(p>0.05),蛹蟲(chóng)草中高劑量組具有差異顯著性(p<0.05),由此可見(jiàn),中高劑量組可判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性。隨著蛹蟲(chóng)草劑量的增加,小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度逐漸增加。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚍从秤枷x(chóng)草免疫活性機(jī)制[12]。相關(guān)研究報(bào)道黃芪多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞免疫功能的作用機(jī)制是通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)信息分子NO、Ca2+及cAMP、cGMP來(lái)實(shí)現(xiàn)的[13]。因此可以說(shuō)明脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化與細(xì)胞內(nèi)部信號(hào)分子密切相關(guān)。另外,研究報(bào)道蛹蟲(chóng)草多糖能夠顯著刺激小鼠脾細(xì)胞增殖[14]。Wang等人研究報(bào)道一定劑量的醇提蛹蟲(chóng)草多糖能顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,增強(qiáng)血清抗體滴度,提高血清中γ-干擾素及白細(xì)胞介素的濃度,蛹蟲(chóng)草多糖可以提高新城疫疫苗的免疫功效[15]。所以,蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化影響可能與其中蛹蟲(chóng)草多糖成分有關(guān),但是關(guān)于其對(duì)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的信號(hào)通路相關(guān)研究報(bào)道較少,有待于進(jìn)一步研究,為蛹蟲(chóng)草相關(guān)保健品或者免疫輔助藥物的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

表3　蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響±SD,n=10)Table 3　Effects of CM on delayed type hypersensitivity of ±SD,n=10)

表4　蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)抗體生成細(xì)胞的影響±SD,n=10)Table 4　Effect of CM on quantity ofantibody forming cells of ±SD,n=10)

表5 蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠半數(shù)溶血值的影響±SD,n=10)Table 5　Effects of CM on hemolytic value(HC50)of ±SD,n=10)

2.3蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響。

綿羊紅細(xì)胞可以刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞,4 d后再以綿羊紅細(xì)胞攻擊時(shí),攻擊部位會(huì)出現(xiàn)腫脹,其腫脹程度可反映遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度,進(jìn)而反應(yīng)T淋巴細(xì)胞的增殖能力[16]。蠶蛹蟲(chóng)草中含有蟲(chóng)草素,研究發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草素能夠抑制伴刀豆球蛋白誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖,Th1和Th2細(xì)胞因子增殖,以及T細(xì)胞CD4+/CD8+[17]。表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),隨著蠶蛹蟲(chóng)草片劑劑量增加,小鼠左后足趾部厚度逐漸加厚。與陰性對(duì)照組相比,中、高劑量組的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有顯著性差異(p<0.05);低劑量組無(wú)顯著性差異(p>0.05),由此可判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。說(shuō)明中高劑量蠶蛹蟲(chóng)草片可以刺激T淋巴細(xì)胞增殖。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)與淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)共同反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能,兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中蛹蟲(chóng)草中、高劑量組均呈陽(yáng)性,說(shuō)明中、高劑量對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能具有顯著調(diào)節(jié)作用。

2.4蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)抗體生成細(xì)胞的檢測(cè)

蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)抗體生成細(xì)胞的檢測(cè)見(jiàn)表3。

脾臟抗體形成反映了B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答即體液免疫。應(yīng)答是指在綿羊紅細(xì)胞刺激下,抗原特異性B細(xì)胞活化增殖分化成熟為漿細(xì)胞,進(jìn)而合成各類免疫球蛋白并產(chǎn)生免疫效應(yīng)作用的應(yīng)答過(guò)程。由表4結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組相比,蠶蛹蟲(chóng)草片劑低、中、高劑量組空斑數(shù)升高,且差異具有顯著性(p<0.05),隨著蠶蛹蟲(chóng)草劑量的增加,空斑數(shù)量逐漸增加。可見(jiàn)蠶蛹蟲(chóng)草三個(gè)劑量組實(shí)驗(yàn)均呈陽(yáng)性。說(shuō)明蛹蟲(chóng)草能增強(qiáng)綿羊紅細(xì)胞(SRBC)致敏的正常小鼠空斑形成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的數(shù)量,也可以推斷蛹蟲(chóng)草能促進(jìn)IgM抗體生成,提高小鼠的體液免疫功能。

2.5蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)小鼠半數(shù)溶血值的測(cè)定

蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)小鼠半數(shù)溶血值的影響見(jiàn)表5。

用SRBC免疫小鼠后,血清中出現(xiàn)SRBC抗體,在補(bǔ)體參與下,與SRBC一起孵育,可以發(fā)生溶血反應(yīng),釋放血紅蛋白。通過(guò)測(cè)定血紅蛋白含量反映動(dòng)物血清中溶血素的含量,HC50可以定量地反映小鼠血清中溶血素抗體的生成量[18]。由表5可以看出蠶蛹蟲(chóng)草片劑量組小鼠半數(shù)溶血值高于陰性對(duì)照組,而且隨著其劑量增加而逐漸增高。與陰性對(duì)照組比較,低劑量組小鼠半數(shù)溶血值與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(p>0.05);中劑量組,高劑量組小鼠半數(shù)溶血值差異具有顯著性(p<0.05),可以判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。半數(shù)溶血值與抗體生成細(xì)胞共同反應(yīng)小鼠體液免疫變化。兩者都呈陽(yáng)性,說(shuō)明蛹蟲(chóng)草片能明顯提高實(shí)驗(yàn)小鼠體液免疫功能,具有很好調(diào)節(jié)作用。

3　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠免疫功能作用,結(jié)果表明,與陰性對(duì)照組相比,蠶蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠的體重,脾臟/體重比值,胸腺/體重比值的影響差異無(wú)顯著性差異(p>0.05)。通過(guò)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞免疫功能具有調(diào)節(jié)作用,尤其蠶蛹蟲(chóng)草中、高劑量組實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有顯著性差異(p<0.05)。通過(guò)測(cè)定血清溶血素HC50值和抗體生成細(xì)胞發(fā)現(xiàn),蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)小鼠體液免疫功能具有一定調(diào)節(jié)作用,其中蠶蛹蟲(chóng)草低、中、高劑量組對(duì)抗體生成細(xì)胞均具有顯著性差異(p<0.05),而中、高劑量組對(duì)HC50值具有顯著性差異(p<0.05)。綜上所述,一定劑量的蛹蟲(chóng)草片對(duì)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫能力具有很好的作用,同時(shí)也為減少相關(guān)疾病的發(fā)生奠定靶向作用,也為蛹蟲(chóng)草片劑對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

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Effect ofCordycepsmilitarison humoral immunity and cellular immunity

ZHANG Lan1,2,WANG Dan1,2,NIE Jing-shi3

(1.Department of Public and Health,Jinlin Medical college,Jilin132013,China;2.Lever Two Laboratory of Administration of Traditional Chinese Medicine of Jilin Province,Jinlin Medical College,Jilin132013,China;3.Jilin Dunhua Sericultural Sericulture Industry Development Co.,Ltd,Dunhua 133700,China)

In order to study effect ofCordycepsmilitarison humoral immunity and cellular immunity functions of mice. ICR male mice were assigned randomly to I,II,III groups. Every group was assigned to the following groups:negative control,low(0.167 g/kg·bw),medium(0.333 g/kg·bw),high(0.999 g/kg·bw)dosage CM for 30 days by intragastric infusion. Then spleen lymphocyte proliferation,delayed type hypersensitivity,quantity of antibody forming cells,and hemolytic value(HC50)were detected. The results showed thatCordycepsmilitarishad no significant effect on body weight increase,ratio of spleen weight to body weight,ratio of thymus weight to body weight(p>0.05). Medium and high dose groups had significant effect on cellular immunity(p<0.05);and had significant effect on humoral immunity,all groups had significant effect on quantity of antibody forming cells,and medium and high dose groups had significant effects on HC50(p<0.05). So it was concluded thatCordycepsmilitariscan strengthen immunity functions of mice,and lay the foundation for mechanism research of immune regulation.

Cordycepsmilitaris(CM);humoral immunity;cellular immunity

2015-07-09

張嵐(1980-),女,博士,副教授,研究方向:生物反應(yīng)器與功能性食品,E-mail:lan4531@163.com。

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130206022YY)。

TS201.4

A

1002-0306(2016)05-0349-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.05.062