王霆鈞　邱揚(yáng)凌　蔡嘉莉　江祖泰　苗宇田　許建華福建醫(yī)科大學(xué)，福建福州　350001

姜黃素衍生物FM0807對(duì)佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠療效觀察

王霆鈞邱揚(yáng)凌蔡嘉莉江祖泰苗宇田許建華▲
福建醫(yī)科大學(xué)，福建福州350001

目的觀察姜黃素衍生物FM0807對(duì)佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的療效。方法取雄性SD大鼠，用弗氏完全佐劑誘導(dǎo)制作類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組對(duì)照組、雷公藤組、姜黃素衍生物FM0807低、中、高劑量組，觀察關(guān)節(jié)炎癥指標(biāo)及血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平。結(jié)果姜黃素衍生物FM0807各組能降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平，中、高劑量組能有效降低關(guān)節(jié)炎癥指標(biāo)，呈劑量依賴關(guān)系。結(jié)論姜黃素衍生物FM0807對(duì)佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠有較好療效。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；姜黃素；姜黃素衍生物；大鼠模型

［Abstract］Objective To observe the effect of curcumin derivative FM0807 on rheumatoid arthritis mode1 in rats. Methods Ma1e SD rats with freund′s comp1ete adjuvant induced mode1 of rheumatoid arthritis，were se1ected and random1y divided into six groups:norma1 contro1 group，mode1 contro1 group，tripterygium g1ycoside group，curcumin derivative FM0807 1ow，medium and high dose group，joint inf1ammation and the serum 1eve1s of TNF-α，IL-1，IL-6 were compared.Results Curcumin derivative FM0807 groups reduced the serum 1eve1s of TNF-α，IL-1，IL-6，medium and high dose group effective1y reduced joint inf1ammation in a dose-dependent manner.Conclusion Curcumin derivatives FM0807 has good curative effect on adjuvants rheumatoid arthritis rats.

［Key words］Rheumatoid arthritis；Curcumin；Curcumin derivatives；Rat moda1s

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以慢性關(guān)節(jié)滑膜炎性疾病為主要表現(xiàn)的全身自身免疫性疾?。?］，疾病主要特征為侵蝕關(guān)節(jié)及周圍組織并導(dǎo)致骨質(zhì)破壞，最終導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)畸形、功能喪失并影響患者生活質(zhì)量［2］，目前全球發(fā)病率達(dá)0.8%，在我國(guó)的發(fā)病率為0.32%～0.36%［3］。姜黃素具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基等多方面藥理作用，姜黃素衍生物FM0807克服了水溶性差、生物利用度低的缺點(diǎn)。本研究以佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠為研究對(duì)象，研究姜黃素衍生物FM0807對(duì)模型大鼠的療效，為RA的治療探索新的思路?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物來(lái)源

清潔級(jí)SD大鼠（雄性）48只，體重150～180 g，福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證編號(hào)SCXK（閩）2004-0002。

1.2藥品、試劑及儀器

弗氏完全佐劑（美國(guó)Sigma，貨號(hào)F-5881），大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒 （美國(guó)Scien Ce11，貨號(hào)EK-0526），大鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒（美國(guó)Scien Ce11，貨號(hào)EK-0412），大鼠白介素1 （IL-1）ELISA試劑盒 （美國(guó)Scien Ce11，貨號(hào)EK-0390），足趾容積測(cè)定儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，型號(hào)YLS-7C），姜黃素衍生物FM0807及雷公藤內(nèi)酯醇（福建醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所提供，純度＞99%）。

1.3分組與建模

SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、雷公藤（TPL）組、姜黃素衍生物FM0807低、中、高劑量組（50、100、200 mg/kg）6組，每組8只。除正常對(duì)照組外，其余各組于右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1 mL/只致炎，正常對(duì)照組注射等量生理鹽水作致炎物質(zhì)。造模當(dāng)天為0 d。

表1　各實(shí)驗(yàn)組大鼠左足足趾容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)（）

表1　各實(shí)驗(yàn)組大鼠左足足趾容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)（）

注：F值分別為2.453、2.164、2.308、2.863、2.373、2.398，與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　n　大鼠左足足趾容積（mm3）第7天　第14天　第21天關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）第7天　第14天　第21天正常對(duì)照組模型對(duì)照組TPL組FM0807（50）FM0807（100）FM0807（200）8 8 8 8 8 8 1.59±0.07 2.60±0.55**2.95±0.67 2.47±0.36 2.58±0.46#2.43±0.52#1.52±0.10 2.58±0.49**2.78±0.37 2.26±0.41 1.91±0.56#1.65±0.28##1.55±0.15 2.53±0.20**2.14±0.88 2.17±0.32 2.29±0.31#2.08±0.56#0 0 0 4.67±0.82**3.43±0.79#4.33±1.75 3.20±0.48#2.14±0.90##4.17±0.98**3.17±0.75 2.67±0.52 2.50±0.28#2.20±0.34#3.50±1.38**2.80±0.33 3.00±0.88 2.50±0.30#2.17±0.47#

1.4給藥方法

模型對(duì)照組、TPL組、FM0807低、中、高劑量組于造模后第1天至第21天期間，每日給藥，TPL組給予TPL 20 μg/kg腹腔注射，每日1次，連續(xù)21 d；FM0807低、中、高劑量組分別給予FM0807 50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌胃，每日1次，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予生理鹽水灌胃，每日1次。

1.5標(biāo)本采集與檢測(cè)

1.5.1大鼠足趾腫脹度測(cè)量第1天至第21天期間，每周應(yīng)用足趾容積測(cè)定儀測(cè)定各組動(dòng)物致炎足的體積1次，每足測(cè)3次，取平均值。

1.5.2關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）的計(jì)算全身病變按5級(jí)評(píng)分法評(píng)價(jià)，無(wú)紅腫為0分；小趾關(guān)節(jié)紅腫為1分；趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹為2分；踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹為3分；包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹為4分。把各個(gè)關(guān)節(jié)的積分累計(jì)起來(lái)，即為每只大鼠的AI。

1.5.3檢測(cè)血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平 深麻大鼠后，取血，按照ELISA試劑盒操作，檢測(cè)血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用SPSS14.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)及方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠足趾容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠左足足趾容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）不同時(shí)間點(diǎn)均高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （t=2.342、2.533、2.164、2.872、3.237、2.523，P＜0.01）；與模型對(duì)照組相比，TPL組和姜黃素衍生物FM0807低劑量組大鼠左足足趾容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但姜黃素衍生物FM0807中、高劑量組大鼠足趾容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）與模型對(duì)照組比較均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.353、2.236、2.453、2.316、2.753、2.386、2.314、2.386、2.643、2.597、2.873、2.349，P＜0.05），其中高劑量組療效更顯著（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

2.2各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平比較

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組血清TNF-α、IL-1及IL-6水平均明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 27.342、37.342、31.536，P＜0.01）；與模型對(duì)照組相比，TPL組和姜黃素衍生物FM0807各劑量組血清TNF-α、IL-1及IL-6水平均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=23.644、27.833、26.753、21.673、32.643、36.231、31.324、32.536、22.642、30.563、21.326、23.649，P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2　各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平比較（，pg/mL）

表2　各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平比較（，pg/mL）

注：F值分別為13.752、12.873、17.342，與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較，##P＜0.01

組別　n　TNF-α　IL-1　IL-6正常對(duì)照組模型對(duì)照組TPL組FM0807（50）FM0807（100）FM0807（200）8 8 8 8 8 8 127.01±16.08 255.99±22.98**129.17±22.87##199.60±13.37##172.93±14.65##156.32±18.34##46.02±6.66 109.93±10.20**56.21±5.91##84.84±5.98##74.82±7.53##67.92±5.72##58.20±6.56 120.55±18.37**66.64±5.12##95.03±5.67##83.24±6.81##78.66±4.34##

3　討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 （RA）的病因?qū)W目前尚未完全清楚，RA病理特征主要表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞異常增殖及纖維化、血翳形成、骨和軟骨損害，RA患者的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)異?；钴S，被公認(rèn)為RA炎癥和關(guān)節(jié)損傷的重要原因，其中TNF-α、IL-1及IL-6水平均顯著升高與RA的病理過(guò)程密切相關(guān)。上述促炎癥細(xì)胞因子主要由內(nèi)源性免疫細(xì)胞和Th1細(xì)胞分泌，TNF-α屬于TNF超家族，是RA的重要促炎癥細(xì)胞因子，主要來(lái)自于單核-巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞以及激活的T淋巴細(xì)胞，在炎癥反應(yīng)中起重要的免疫調(diào)節(jié)作用，RA發(fā)病與TNF-α的過(guò)度表達(dá)有關(guān)。IL-1是一種促炎癥細(xì)胞因子，是炎癥、組織損傷及免疫反應(yīng)的主要介質(zhì)之一，能抑制糖蛋白的合成，增加糖蛋白降解，促進(jìn)軟骨細(xì)胞分泌纖維蛋白溶酶原激活劑，加速膠原的分解代謝，在介導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎和RA的軟骨破壞方面發(fā)揮重要作用［4］。IL-6也是RA重要的炎性細(xì)胞因子，在RA發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。以動(dòng)物模型為基礎(chǔ)是當(dāng)前研究RA的重要手段之一，動(dòng)物模型的建立在研究中的作用越來(lái)越受到重視，大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎是研究RA的常用動(dòng)物模型，因其病理學(xué)改變與人類的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎極其相似［5］，已廣泛應(yīng)用于探索RA治療藥物和方法的研究。實(shí)驗(yàn)中使用的對(duì)照藥物雷公藤具有免疫抑制和消炎、鎮(zhèn)痛的雙重作用，臨床上多用來(lái)治療關(guān)節(jié)炎癥，現(xiàn)已廣泛用于RA的治療之中，并經(jīng)眾多臨床開(kāi)放性試驗(yàn)證實(shí)，其療效已獲廣泛認(rèn)可。一直以來(lái)，植物來(lái)源的藥物很受研究者重視。姜黃素（Curcumin，Cur）是姜科植物姜黃（Curcuma Longa L.）的有效成分，是從中提取的酚性色素，已廣泛用作食品添加劑和染料，毒性很低，具較好抗炎作用，受到藥理研究推崇，近些年研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠有效地阻斷RA患者FLS細(xì)胞IL-6表達(dá)，減輕滑膜炎性反應(yīng)［6］，但臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)口服姜黃素的生物利用度相對(duì)較低，影響了藥物的臨床推廣與應(yīng)用。福建醫(yī)科大學(xué)新藥研究所在姜黃素基礎(chǔ)上又合成了一系列姜黃素衍生物，其中包括FM0807，前期研究發(fā)現(xiàn)它的親脂性、藥理活性及穩(wěn)定性均高于其母體化合物姜黃素，具有較好的發(fā)展前景。姜黃素衍生物FM0807對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致小鼠足跖腫脹、棉球植入法誘發(fā)慢性肉芽腫均有明顯的抑制作用，對(duì)急性、亞急性和慢性炎癥均具有抗炎作用［7，8］，且毒副作用較?。?-15］。

本研究通過(guò)建立佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，從正常對(duì)照組與模型對(duì)照組對(duì)比資料觀察，模型對(duì)照組大鼠左足足趾容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)及血清TNF-α、IL-1、IL-6的水平明顯高于正常對(duì)照組，說(shuō)明類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型建立成功，研究中應(yīng)用低、中、高不同劑量姜黃素衍生物FM0807與雷公藤進(jìn)行對(duì)照研究，結(jié)果顯示姜黃素衍生物FM0807中、高劑量組對(duì)大鼠足趾容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）均有明顯改善，效果超過(guò)雷公藤組，有顯著性差異（P＜0.01）。對(duì)血清炎癥指標(biāo)對(duì)照顯示不同劑量姜黃素衍生物FM0807均能明顯抑制炎癥反應(yīng)，血清TNF-α、IL-1及IL-6數(shù)值明顯低于模型對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.01）。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)FM0807能不同程度地降低模型大鼠關(guān)節(jié)軟骨炎癥反應(yīng)及血清中促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1和IL-6的表達(dá)水平，其中以中、高劑量組療效較好。研究結(jié)果顯示，姜黃素衍生物FM0807對(duì)佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠具有較好的治療作用，抗炎效果隨FM0807濃度增大而提高，呈一定劑量依賴關(guān)系。該研究為RA的臨床藥物開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供了一種新的選擇，通過(guò)研究，有望將FM0807開(kāi)發(fā)成為毒副作用小的治療RA的藥物，對(duì)于需要長(zhǎng)期藥物控制的RA患者而言有重要的意義。

［1］Grover HS，Gaba N，Gupta A，et a1.Rheumatoid arthritis：A review and denta1 care considerations［J］.Nepa1 Med Co11 J，2011，13（2）：74-76.

［2］Jeong EH，Jang MH，Yong HB，et a1.Anti-inf1ammatory and anti-nociceptive effect of Betu1a p1atyphy11a var. japonica in human inter1eukin-1β-stimu1ated fibrob1ast-1ike synoviocytes and in experimenta1 anima1mode1s［J］. Journa1 of Ethnopharmaco1ogy，2011，135（1）：126-134.

［3］中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診治指南（草案）［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2003，7（4）：145.

［4］Buhrmann C，Shayan P，Aggarwa1 BB，et a1.Evidence that TNF beta（1ymphotoxin a1pha）can activate the inf1ammatory environmentin human chondrocytes［J］.Arthritis Res Ther，2013，15（6）：202.

［5］袁靜，唐照亮，宋小鴿，等.艾灸對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎影響的形態(tài)學(xué)觀察［J］.針刺研究，1997，22（3）：179.

［6］K1oesch B，Becker T，Dietersdorfer E，et a1.Anti-inf1ammatory and apoptotic effects of the po1ypheno1 curcumin on human fibrob1ast-1ike synoviocytes［J］.Int Immunopharmaco1，2013，15（2）：400-405.

［7］溫彩霞，鄭婷婷，許建華.姜黃素衍生物FM02的溶解度、抗抑郁和抗炎作用［J］.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，140 （4）：341-343.

［8］劉紅艷，王海燕，葉松，等.姜黃素藥理作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2012，22（6）：48-50.

［9］葉麗香，王蜀平，余麗莉，等.姜黃素衍生物FM0807體內(nèi)抗炎作用研究［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（5）：55-57.

［10］曾曉會(huì)，陳玉興，趙自明，等.姜黃素微囊在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16 （2）：107-110.

［11］雷軍榮，秦軍，張晶，等.姜黃素對(duì)大鼠缺血性腦損傷炎癥反應(yīng)和血腦屏障通透性的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010，26（1）：120-123.

［12］許東暉，王勝，金晶，等.姜黃素的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中草藥，2005，36（11）：1737-1739.

［13］Strimpakos AS，Sharama RA.Curcumin：Preventive and therapeutic properties in 1aboratory studies and c1inica1 trai1s［J］.Antioxid Redox Signa1，2008，10（3）：511-545.

［14］Sandur SK，Ichikawa H，Pandey MK，et a1.Ro1e of prooxidants and anti oxidant s in the an ti-inf 1am matory and apoptotic effects of curcumin（diferu1 oy1methane）［J］.Free Rad Bio1 Med，2007，43（4）：568-580.

［15］趙承光，梁廣，邵麗麗，等.姜黃素類化合物抗炎和細(xì)胞保護(hù)作用的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展［J］.中草藥，2008，39 （4）：619-622.

Effect of curcumin derivative FM0807 on rheumatoid arthritis model in rats

WANG TingjunQIU YanglingCAI JialiJIANG ZutaiMIAO YutianXU Jianhua
Fujian Medica1 University，F(xiàn)uzhou350001，China

R285.5

A

1673-97O1（2O16）11-OO2O-O3

福建省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（201410392053）▲

2016-01-29）