張志娟,周丹,錢民怡,朱沛,李道穩(wěn),劉曉東,陳婷婷,湯樹生(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京海淀100193)

復(fù)方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究

張志娟,周丹,錢民怡,朱沛,李道穩(wěn),劉曉東,陳婷婷,湯樹生
(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京海淀100193)

本文對自制氟苯尼考(FF)和氟尼辛葡甲胺(FM)復(fù)方制劑在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行了研究.試驗選用健康斷奶仔豬6頭(30±5 kg),采用三周期交叉設(shè)計,FF給藥劑量均為20 mg/kg體重,FM給藥劑量均為2 mg/kg體重(以氟尼辛計),同一頭豬不同給藥的時間間隔為2周,給藥途徑均為頸部肌肉注射.試驗結(jié)果顯示,自制復(fù)方制劑與兩種進(jìn)口市售單方制劑在動物體內(nèi)的藥代過程基本一致,氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺相對生物利用度分別為99.89%和108.78%,表明本復(fù)方注射液中兩種藥物的藥效均與國外進(jìn)口單方產(chǎn)品相當(dāng),一次給藥即可獲得兩種進(jìn)口單方制劑同時給藥的良好療效,且具有方便臨床給藥、減少動物應(yīng)激的顯著優(yōu)點.

豬;藥代動力學(xué);氟苯尼考;氟尼辛葡甲胺

氟苯尼考(Florfenicol,FF)為新一代氯霉素類獸醫(yī)專用抗生素,具有抗菌譜廣、吸收良好、體內(nèi)分布廣、耐藥性發(fā)生率低、體內(nèi)殘留量較低的特點,對多種革蘭陽性菌和陰性菌及支原體等均有較強活性,是我國獸醫(yī)臨床用于治療畜禽呼吸道疾病的首選藥之一[1-3].然而,由于近年來畜禽呼吸道疾病大都呈多病原混合感染的趨勢,常伴有體溫升高、炎癥及肌肉疼痛等癥狀,而氟苯尼考單方制劑有效抑殺呼吸道病原菌后,無法清除死亡細(xì)菌釋放出的內(nèi)毒素,亦無抗炎鎮(zhèn)痛作用.因此,氟苯尼考單方制劑對當(dāng)前畜禽呼吸道疾病的療效仍不夠理想[4].氟尼辛葡甲胺(Flunixin me?glumine,FM)是一種動物專用的非麻醉、非類固醇類的解熱消炎鎮(zhèn)痛藥物,通過抑制環(huán)氧酶而阻止前列腺素的合成,減少炎性病變介質(zhì)的繁殖來發(fā)揮抗炎作用,具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛和抗內(nèi)毒素作用[5-7].因此,本實驗室研制了該復(fù)方注射液,并對其在豬體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)進(jìn)行了研究.

1　材料與方法

1.1藥品與試劑氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺復(fù)方注射液(FF/FM復(fù)方注射液),FF 30%,FM 5.5%,本實驗室自制;Nuflor(氟苯尼考注射液),FF 30%,先靈葆雅(美國)動物保健公司;Finadyne(氟尼辛葡甲胺注射液),FM 5%,先靈葆雅(美國)動物保健公司; FF對照品,含量98%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;氟尼辛葡甲胺對照品,含量99%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;甲醇、乙腈,色譜級,美國Fisher chemical公司;甲酸,色譜級,美國Fisher chemical公司;其他試劑均為分析純.

1.2主要儀器高效液相色譜儀(2695分離系統(tǒng),2996二極管陣列檢測器)美國Waters公司; XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm),美國Waters公司;N-EVAPTM111型氮吹儀,美國Organomation Associates公司;WH-I型微型漩渦混合儀,北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司;MI?KR022R型臺式高速冷凍離心機,德國Hettich公司;SHK-99-II臺式空氣恒溫?fù)u床,北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司.

1.3試驗動物及給藥方案試驗選用健康斷奶仔豬6頭,體重30±5 kg,于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物房飼養(yǎng),給藥前飼喂不含藥物的全價飼料2周以適應(yīng)環(huán)境.試驗采用三周期交叉設(shè)計,FF給藥劑量為20 mg/kg體重,FM給藥劑量為2 mg/kg體重(以氟尼辛計),同一頭豬不同給藥方式的時間間隔為2周.動物隨機分成A、B、C 3組,頸部肌肉注射,具體給藥方式見表1.

表1　三周期交叉設(shè)計

1.4樣品采集復(fù)方注射液組于給藥前和給藥后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.75、0.83、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h從豬的頸靜脈采血8 mL;氟苯尼考注射液組于給藥前和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h頸靜脈采血4 mL;氟尼辛葡甲胺注射液組于給藥前和給藥后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.83、1、2、4、6、8、12、24、36、48 h頸靜脈采血4 mL,采好的血樣放入預(yù)先用肝素鈉處理好的離心管中,3 000 r/min離心10 min后吸取上清,分裝為3管,置于-20℃保存.

1.5血漿樣品處理

1.5.1氟苯尼考精密量取0.5 mL血漿,加入4 mL乙酸乙酯,渦動混勻2 min,在搖床上以250 r/min水平搖蕩15 min,充分提取藥物.然后以0℃,4 500 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管,重復(fù)提取和離心一次,合并上清液.將合并后的上清液用45℃氮氣吹干,然后用0.5 mL流動相復(fù)溶,漩渦2 min混勻溶解,0.22 μm微孔濾膜過濾,取50 μL進(jìn)HPLC檢測.

1.5.2氟尼辛葡甲胺精密量取血漿樣品400 μL,依次加入乙腈4 mL、1 mol/L鹽酸40 μL,渦動提取2 min后,10 000 r/min(0℃)離心10 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管,重復(fù)提取和離心一次,合并上清液.將合并后的上清液用40℃氮氣吹干,400 μL初始流動相復(fù)溶殘留物后,漩渦2 min,0.22 μm微孔濾膜過濾,取50 μL進(jìn)HPLC檢測.

1.6色譜條件

1.6.1氟苯尼考流動相:乙腈:水=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;檢測波長:224 nm;進(jìn)樣量: 50 μL;色譜柱:XBridge Shield RP C-18柱(250 X 4.6 mm,5 μm);HPLC系統(tǒng):Waters 600-717-2487系統(tǒng);柱溫:30℃±5℃.

1.6.2氟尼辛葡甲胺流動相:0.2%甲酸水:乙腈=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;檢測波長:276 nm;進(jìn)樣量:50 μL;色譜柱:XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm);HPLC系統(tǒng):Waters 2695分離系統(tǒng);柱溫:30℃±5℃.

1.7標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.7.1氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)曲線配制FF濃度分別為18,10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血漿添加樣品,按照1.5.1處理方法處理后上樣,記錄色譜圖和峰面積.

1.7.2氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)曲線配制FM濃度分別為10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血漿添加樣品,按照1.5.2處理方法處理后上樣,記錄色譜圖和峰面積.

1.8數(shù)據(jù)處理對獲得的FF和FM血漿藥物濃度-時間數(shù)據(jù)用Phoenix WinNonlin 6.1藥代動力學(xué)軟件進(jìn)行分析,并計算主要的藥動學(xué)參數(shù),然后用SPSS軟件的單因素方差分析程序?qū)λ幋鷧?shù)進(jìn)行差異顯著性分析.

2　結(jié)果

2.1檢測方法

2.1.1氟苯尼考檢測方法FF在濃度為0.1～18 μg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r=0.9996);回收率為92.62%～101.63%;日內(nèi)變異系數(shù)為1.97%～5.49%,日間變異系數(shù)為1.86%～4.29%;檢測限為0.05 μg/mL,定量限為0.1 μg/mL.

2.1.2氟尼辛葡甲胺檢測方法FM在濃度為0.1～ 10 μg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r=0.9999);回收率為99.56%～100.31%;日內(nèi)變異系數(shù)為2.17%～5.35%,日間變異系數(shù)3.25%～4.87%;檢測限為0.05 μg/mL,定量限為0.1 μg/mL.

2.2藥代動力學(xué)試驗

2.2.1血漿測定結(jié)果豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和FF單方注射液后的FF血藥濃度及藥時曲線圖見圖1;豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和FM單方注射液后的FM血藥濃度及藥時曲線圖見圖2.從圖1和圖2可以看出,本實驗室研制的FF/FM復(fù)方注射液的FF和FM均與其單方進(jìn)口制劑的相應(yīng)藥物在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)行為表現(xiàn)極為相似.

圖1　豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和FF單方注射液后的FF血藥濃度(n=6)

圖2　豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和FM單方注射液后的FM血藥濃度(n=6)

2.2.2藥代動力學(xué)參數(shù)將試驗所得的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)用Phoenix WinNonlin 6.1藥代動力學(xué)軟件處理,兩藥的主要藥動學(xué)參數(shù)及其差異顯著性檢驗結(jié)果見表2和表3.從表2和表3可以看出,本實驗室研制的FF/FM復(fù)方注射液的FF和FM與其單方進(jìn)口制劑相應(yīng)藥物的主要藥代動力參數(shù)均無顯著性差異,其中FF和FM的相對生物利用度分別為99.89%和108.78%.

表2　豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和單方注射液后的FF的藥物動力學(xué)參數(shù)(n=6,±S)

表3　豬頸部肌肉注射FF/FM復(fù)方注射液和單方注射液后的FM的藥物動力學(xué)參數(shù)(n=6,±,S)

3　討論

3.1檢測方法的建立本試驗以《中華人民共和國獸藥典》(2010年版)為基礎(chǔ),查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)[8-15]后,建立了檢測血漿中FF和FM含量的檢測方法,所建方法較好地實現(xiàn)了藥峰與雜質(zhì)峰的良好分離,空白血漿對藥物出峰無干擾,同時,所建方法能良好滿足分離度、線性關(guān)系、回收率、變異系數(shù)等要求,且具有快速、方便、穩(wěn)定的特點.

關(guān)于血漿中FM的提取方法,大多文獻(xiàn)[11-14]用鹽酸和乙腈或磷酸鹽緩沖液和乙腈等作為蛋白沉淀劑.考慮到FM的弱酸性,本研究選用鹽酸和乙腈作為提取液,并比較了鹽酸和乙腈的加入順序?qū)μ崛⌒实挠绊?結(jié)果表明,鹽酸和乙腈加入血漿的先后順序雖對FM的提取效率顯著影響,但先加入鹽酸可致血漿產(chǎn)生大量炭,導(dǎo)致上機檢測樣品達(dá)不到色譜級要求,因此提取時應(yīng)先加乙腈,再加鹽酸.此外,提取時如只提取1次則回收率仍達(dá)不到要求,本研究嘗試了用同樣提取液提取兩次并合并提取液的方法,最終回收率達(dá)到要求.

3.2藥動學(xué)先靈葆雅(美國)動物保健公司生產(chǎn)的Nuflor是治療畜禽呼吸道疾病療效較好的單方氟苯尼考注射液[3,16],該公司生產(chǎn)的氟尼辛葡甲胺單方注射液(Finadyne)亦因其抗炎鎮(zhèn)痛和抗內(nèi)毒素作用良好在國內(nèi)外獸醫(yī)臨床獲得廣泛運用[17],因此,本文選用上述兩藥作為本實驗室自制FF/FM復(fù)方注射液的對照藥物.本文的藥代動力學(xué)試驗結(jié)果顯示,肌肉注射本實驗室自制FF/FM復(fù)方注射液以及注射Nuflor和Finadyne單方注射液后,本實驗室自制FF/FM復(fù)方注射液的FF和FM與其單方進(jìn)口制劑相應(yīng)藥物的半衰期、達(dá)峰時間、達(dá)峰濃度、藥時曲線下面積等主要藥代動力參數(shù)均無顯著性差異,其中FF和FM的相對生物利用度分別為99.89%和108.78%,即自制復(fù)方制劑中氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺均與市售進(jìn)口相應(yīng)單方制劑在動物體內(nèi)的藥代過程基本一致,表明本復(fù)方注射液在方便臨床給藥、減少動物應(yīng)激的同時,良好地保持了氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺的藥效,一次給藥即可獲得兩種進(jìn)口單方制劑同時給藥的良好療效.

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Pharmacokinetic study on a florfenicol/flunixin meglum ine com pound injection in sw ine

ZHANG Zhi-juan,ZHOU Dan,QIAN Min-yi,ZHU Pei,LI Dao-wen, LIU Xiao-dong,CHEN Ting-ting,TANG Shu-sheng
(College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China)

The pharmacokinetics of the florfenicol/flunixin meglumine(FF/FM)compound injection prepared in our lab was studied in pigs in this paper.Six healthy pigs(30±5 kg)were used in this experiment with three cycles of cross.The dose of FF was 20 mg/kg while FM was 2 mg/kg(by flunixin).The animals were administered by IM in neck with a two-week-cycle.The result showed that,for both FF and FM,the pharmacokinetic parameters of the FF/FM compound injection were similar with their single prescription preparation(Nuflor and Finadyne).The relative bioavailability was 99.89%for FF and 108.78%for FM.Therefore, the FF/FM compound injection prepared in our lab exhibit the excellent effect of both drugs while it is more convenient to be used in practice and induces less animal stress.

swine;pharmacokinetics;florfenicol;flunixin meglumine

TANG Shu-sheng

S858.28

A

0529-6005(2016)02-0102-04

2014-09-09

公益性行業(yè)科研專項"新型動物專用藥物的研制與應(yīng)用"(201303038)

張志娟(1989-),女,碩士,主要從事獸藥新制劑研究,E-mail:zhangzhijuan369@163.com

湯樹生,E-mail:tssfj@163.com