柯雅莉，沈靜茹，郭小倩，章冰娜

(中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院分析化學(xué)國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074)

科研與開發(fā)

新型高效毛細(xì)管電泳手性整體柱拆分普羅帕酮

柯雅莉，沈靜茹*，郭小倩，章冰娜

(中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院分析化學(xué)國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074)

以雙-(6-氧-間硝基苯磺?；?-β-環(huán)糊精作為手性選擇劑，利用原位聚合反應(yīng)制得雙-(6-氧-間硝基苯磺酰基)-β-環(huán)糊精手性高效毛細(xì)管電泳(HPCE)整體柱，采用HPCE法考察該柱對手性藥物普羅帕酮(Propafenone)的手性拆分能力，并對其拆分條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：在最佳條件下，普羅帕酮兩對映體分離度RS達(dá)到52.82，建立了一種有效的普羅帕酮兩對映體分離分析新方法。

雙-(6-氧-間硝基苯磺?；?-β-環(huán)糊精；手性HPCE整體柱；普羅帕酮；手性拆分

高效毛細(xì)管電泳(HPCE)中環(huán)糊精類手性固定相以其高效、經(jīng)濟(jì)、自動化程度高和環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)在手性拆分中的應(yīng)用很廣[1-3]，其中整體柱因其制備方法簡單、通透性好、活性位點(diǎn)利用率高等優(yōu)點(diǎn)，越來越受到關(guān)注[4-5]。普羅帕酮是廣譜高效的鈉通道阻滯類抗心律失常藥，臨床上以消旋體形式給藥。在阻斷β受體方面，S-型異構(gòu)體活性是R-型的100倍，兩對映體均有鈉通道阻斷作用，都存在藥理活性[6-7]。在人體的藥代動力學(xué)上卻表現(xiàn)出立體選擇性的差異[8]，故探究其對映體拆分，獲得單一對映體分離分析方法對于臨床具有意義。從文獻(xiàn)報(bào)道情況來看，對普羅帕酮進(jìn)行手性拆分的方法主要包括化學(xué)拆分法、色譜拆分法及萃取拆分法[9]，本文以新型手性選擇劑雙-(6-氧-間硝基苯磺?；?-β-環(huán)糊精(簡稱β-CD-N2)，制備成新型HPCE手性整體柱，拆分普羅帕酮外消旋體，建立了普羅帕酮對映異構(gòu)體分離分析的新方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效毛細(xì)管電泳儀(CL1020,負(fù)電源，北京華陽利民儀器有限公司)，融硅石英毛細(xì)管柱(75μm I.D.,40cm，河北永年光纖廠)。普羅帕酮標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)，超純水(美國Moleculer超純水機(jī))，β-CD-N2自行合成，其他試劑均為分析純(略)。

1.2 電泳條件

β-CD-N2整體柱為固定相，Tris-H3PO4緩沖液為流動相，溶液均經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過濾。電泳整體柱每運(yùn)行一次前，分別用水及相應(yīng)條件下的Tris-H3PO4緩沖液沖洗30min，采用壓力進(jìn)樣方式。

2 結(jié)果與討論

2.1 緩沖液pH值的變化對分離情況的影響

選擇β-CD-N2衍生物HPCE整體柱，波長254nm，分離電壓-25kV，普羅帕酮外消旋體濃度1.054×10-8mol/L，壓力進(jìn)樣時(shí)間30s，環(huán)境溫度25℃，Tris-H3PO4緩沖液濃度為40mmol/L拆分條件下，改變緩沖液pH值，分離結(jié)果如表1所示。

表1 緩沖液pH值的變化對分離情況的影響

在酸性至中性較寬的pH值范圍(3.5～7.0)，普羅帕酮外消旋體中兩對映體分離度均大于32。但隨著pH值的升高，流動相的洗脫強(qiáng)度變?nèi)?。前峰的變化更明顯，綜合考慮pH值4.0時(shí)對映異構(gòu)體前后峰對稱性、洗脫強(qiáng)度及基線均較理想。故選擇緩沖液pH值4.0為最佳pH值。

2.2 緩沖液濃度的變化對分離情況的影響

選擇2.1拆分條件，僅改變緩沖液濃度30mmol/L～70mmol/L，分離部分結(jié)果如圖1所示。

a. 30mmol/L ；b. 40mmol/L；c. 50mmol/L；d. 70mmol/L

圖1 緩沖液濃度對普羅帕酮分離的影響

從圖1結(jié)果可知，普羅帕酮對映異構(gòu)體在此緩沖液體系適用濃度范圍較寬，均能獲得分離，濃度為40mmol/L時(shí)分離度達(dá)44.22，且峰型對稱，基線平緩，故選定緩沖液最佳濃度為40mmol/L。

2.3 工作電壓的變化對分離情況的影響

選擇2.1拆分條件下，改變分離電壓，分別考察-5kV、-10V、-15kV、-25kV和-28kV時(shí)普羅帕酮的拆分情況，分離部分結(jié)果如圖2所示。

a.-10 kV；b. -15kV；c. -25kV；d. -28kV

圖2 工作電壓對普羅帕酮分離的影響

隨著分離電壓的升高，對映異構(gòu)體的分析時(shí)間明顯縮短，后峰的拖尾情況明顯改善。但接近極限值-28kV對對映體峰形的干擾較大，故選擇工作電壓-25kV為最佳的分離電壓。

2.4 方法評價(jià)

2.4.1 普羅帕酮對映體拆分的線性范圍和精密度

最佳分離條件下(β-CD-N2衍生物HPCE整體柱，波長254nm，分離電壓-25kV，普羅帕酮外消旋體濃度1.054×10-8mol/L，壓力進(jìn)樣時(shí)間30s，環(huán)境溫度25℃，Tris-H3PO4緩沖液濃度為40mmol/L，pH值4.0)，考察線性范圍，結(jié)果顯示外消旋體濃度在2.280×10-9mol/L～1.054×10-8mol/L范圍內(nèi)與兩對映體峰高、峰面積呈線性相關(guān)性。同樣條件下，普羅帕酮濃度1.054×10-8mol/L，重復(fù)進(jìn)樣6次，考察精密度。結(jié)果顯示，前峰，后峰保留時(shí)間RSD分別為3.79%，3.65%；峰高RSD分別為4.21%，6.31%；峰面積RSD分別為6.31%，1.73%。

2.4.3 對比實(shí)驗(yàn)

最佳條件下，在β-CD-N2衍生物HPCE整體柱和HPCE空柱中分別用等量的普羅帕酮外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品作對照，結(jié)果如圖3所示，可以看出普羅帕酮對映異構(gòu)體在空柱中無分離跡象，而手性整體柱對其拆分作用理想。

a. β-CD-N2手性整體??；b.空柱

圖3 普羅帕酮對映異構(gòu)體在不同毛細(xì)管柱中的分離

3 結(jié)語

用雙-(6-氧-間硝基苯磺?；?-β-環(huán)糊精手性HPCE整體柱拆分手性藥物普羅帕酮，采用單一變量法，分別考察緩沖液pH值、濃度和工作電壓等條件對分離的影響，與空柱對比有顯著的拆分效果，建立了手性藥物普羅帕酮拆分的HPCE新方法。結(jié)果表明，具有環(huán)狀疏水空腔的β-環(huán)糊精經(jīng)衍生化后，苯環(huán)產(chǎn)生的π-π共軛作用，硝基、磺?；c對映異構(gòu)體的協(xié)同作用，增強(qiáng)了β-CD-N2衍生物與普羅帕酮兩對映異構(gòu)體的手性選擇性差異，使得普羅帕酮對映異構(gòu)體在適宜的條件下獲得拆分。在pH值4.0，濃度為40mmol/L的Tris-磷酸緩沖液中，壓力進(jìn)樣30s，工作電壓-25kV，檢測波長254nm的條件下，普羅帕酮對映體在β-CD-N2手性HPCE整體柱上分離度Rs達(dá)到52.82，明顯優(yōu)于文獻(xiàn)9中結(jié)果(在毛細(xì)管區(qū)帶電泳中，用單-3-氧-苯氨基甲酰基-β-CD為手性添加劑，分離普羅帕酮，分離度3.32)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，重現(xiàn)性佳，普羅帕酮消旋體濃度在2.280×10-9mol/L～1.054×10-8mol/L范圍內(nèi)兩對映體峰高和峰面積等響應(yīng)信號與濃度有線性相關(guān)性。

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(本文文獻(xiàn)格式：柯雅莉，沈靜茹，郭小倩，等.新型高效毛細(xì)管電泳手性整體柱拆分普羅帕酮[J].山東化工，2016，45(04)：1-3.)

The Novel Chiral Monolithic HPCE Column for Propafenone Enantiomers Resolution

Ke yali，Shen Jingru*，Guo Xiaoqian，Zhang Bingna

(key laboratory of Analytical Chemistry of the State Ethnic Affair Commission，College of Chemistry and Materials Science，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China)

Using bis-(6-oxygen-m-nitro benzene sulfonyl)-β-cyclodextrins as chiral selector, a chiral HPCE monolithic column was prepared in Situ polymerization reaction. The chiral separation performance of column for Propafenone enantiomer was investigated, the separation conditions were optimized. Under optimal conditions, the resolutionRSreached 52.82. An effective separation method of Propafenone enantiomer was established.

bis-(6-oxygen-m-nitro benzene sulfonyl)-β-cyclodextrins; chiral HPCE monolithic column; propafenone; chiral separation

2016-01-09

中央高?；鹳Y助項(xiàng)目(CZW14053)

柯雅莉(1990—)，女，福建晉江人，碩士研究生，手性藥物分離分析；通訊作者：沈靜茹。

O657.7

A

1008-021X(2016)04-0001-03