劉百奇，孟祥龍，張　昊，車德馨，王國文，韓金剛（.齊齊哈爾市第一醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科，黑龍江6005；.天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院骨與軟組織腫瘤科，天津300060）

Sox9 mRNA在軟骨肉瘤去分化過程中的意義

劉百奇1，孟祥龍1，張昊1，車德馨1，王國文2，韓金剛1（1.齊齊哈爾市第一醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科，黑龍江161005；2.天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院骨與軟組織腫瘤科，天津300060）

目的探討Sox9 mRNA在軟骨肉瘤去分化過程中所起的作用，并分析其與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法利用免疫組織化學(xué)方法檢測Sox9 mRNA在人普通軟骨肉瘤與去分化軟骨肉瘤間的差異表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤中表達(dá)上調(diào)，在去分化軟骨肉瘤中表達(dá)下調(diào)；Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級之間表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Sox9 mRNA的陽性表達(dá)差異與年齡、性別、部位無關(guān)（P＞0.05），而與肺轉(zhuǎn)移、有無復(fù)發(fā)有關(guān)，且肺轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)者陽性率明顯高于無肺轉(zhuǎn)移、無復(fù)發(fā)者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論Sox9 mRNA與軟骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。

軟骨肉瘤；免疫組織化學(xué)；細(xì)胞去分化；腫瘤復(fù)發(fā)；腫瘤轉(zhuǎn)移；預(yù)后

Sox9 mRNA是許多組織和器官發(fā)生、發(fā)展所需的重要基因，也是軟骨細(xì)胞分化和軟骨形成的重要轉(zhuǎn)錄因子［1-2］。Sox9 mRNA已被確定在軟骨肉瘤中表達(dá)［3］，但對其在軟骨肉瘤中的表達(dá)差異及在軟骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展中所起作用的研究甚少。軟骨肉瘤中約90%是普通型軟骨肉瘤，惡性程度屬于低、中度，去分化軟骨肉瘤是在低度惡性軟骨肉瘤或內(nèi)生軟骨瘤的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)了含有骨肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤等高度惡性成分的腫瘤。普通軟骨肉瘤一般預(yù)后較好，而多數(shù)去分化軟骨肉瘤患者死于廣泛轉(zhuǎn)移。如何提高軟骨肉瘤患者生存率、減少復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是臨床醫(yī)生急需解決的難題。檢測Sox9 mRNA在不同分型軟骨肉瘤中的表達(dá)差異有助于揭示其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系，為靶向治療提供可能性。本研究利用分子生物學(xué)手段檢測Sox9 mRNA在不同分型軟骨肉瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)差異，為軟骨肉瘤去分化后進(jìn)展快、預(yù)后差提供理論依據(jù)，并為軟骨肉瘤的診斷、治療提供新方法。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1組織來源軟骨肉瘤石蠟包埋標(biāo)本來自天津市腫瘤防治重點實驗室，經(jīng)病理檢查確診，其中包括普通軟骨肉瘤組織標(biāo)本20例，去分化軟骨肉瘤組織標(biāo)本20例；另有正常軟骨組織標(biāo)本20例。

1.1.2試劑Sox9mRNA兔多克隆抗體（Santacruz公司）；鏈霉素抗生物素-過氧化物酶（SP）免疫試劑盒（Sigma公司）。DAB顯示試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.2方法

1.2.1操作方法將蠟塊進(jìn)行常規(guī)切片、脫蠟、水化、抗原修復(fù)等處理，嚴(yán)格按照SP免疫試劑盒要求操作。Sox9 mRNA陽性細(xì)胞主要定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜。根據(jù)染色細(xì)胞陽性比例及染色強度，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.2.2結(jié)果判定免疫組織化學(xué)陽性率計算方法：每張切片在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機選取10個高倍視野，以陽性細(xì)胞比例的平均值為陽性率，然后對結(jié)果進(jìn)行評分：陽性率小于或等于10%為0分，＞10%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%為3分；再按染色強度加以評分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕褐色為2分，深褐色為3分。將二者相乘作為最后評分：0分記為陰性，≥1分記為陽性。最終分別計算出Sox9mRNA在正常軟骨、普通軟骨肉瘤、去分化軟骨肉瘤中表達(dá)的陽性率，以及Sox9 mRNA在不同臨床參數(shù)間表達(dá)的陽性率。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，軟骨肉瘤不同分級中Sox9 mRNA的表達(dá)差異采用Kruskal-Wallis秩和檢驗（H檢驗），各臨床參數(shù)間Sox9 mRNA表達(dá)差異采用χ2檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1Sox9 mRNA在軟骨肉瘤組織和正常軟骨組織中的表達(dá)在正常軟骨組織中，Sox9 mRNA基本存在于軟骨細(xì)胞核中；在普通軟骨肉瘤和去分化軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA基因除在細(xì)胞核中表達(dá)外，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)也有少量表達(dá)。在普通軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA表達(dá)水平高于正常軟骨組織，在去分化軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA表達(dá)水平低于正常軟骨組織。與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤中表達(dá)上調(diào)，在去分化軟骨肉瘤中表達(dá)下調(diào)。見圖1。

圖1　Sox9 mRNA在不同類型軟骨肉瘤組織和正常軟骨組織中的表達(dá)（SP法，400×）

2.2Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級中的表達(dá)Sox9 mRNA在20例正常軟骨組織中表達(dá)11例，陽性率為55.0%；在20例普通軟骨肉瘤中表達(dá)18例，陽性率達(dá)90.0%；在20例去分化軟骨肉瘤中的表達(dá)8例，陽性率僅為40.0%。經(jīng)統(tǒng)計分析，Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級之間表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（H=9.077，P＜0.05）。見表1。

表1　Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級中的表達(dá)

2.3軟骨肉瘤中Sox9 mRNA與臨床參數(shù)之間關(guān)系

40例軟骨肉瘤標(biāo)本中，Sox9 mRNA陽性表達(dá)26例，總陽性率為65.0%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Sox9mRNA的陽性表達(dá)差異與年齡、性別、部位無關(guān)（P＞0.05），與肺轉(zhuǎn)移、有無復(fù)發(fā)有關(guān)，且肺轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)者陽性率明顯高于無肺轉(zhuǎn)移、無復(fù)發(fā)者（P＜0.01）。見表2。

表2　軟骨肉瘤中Sox9 mRNA與臨床參數(shù)之間關(guān)系

3　討　論

軟骨肉瘤是由軟骨發(fā)生的惡性骨腫瘤，是繼骨肉瘤之后第二常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤，約占原發(fā)性骨惡性腫瘤的40%，具有極其復(fù)雜的臨床病理特征［4］。軟骨肉瘤通常發(fā)生在10～80歲的男性，腫瘤一般通常出現(xiàn)在肩胛骨、肋骨、胸骨或骨盆等部位［5］，其對化療和放射治療不敏感［6］，所以廣泛的局部切除仍是目前主要的治療方式。部分患者通常在手術(shù)切除后，因局部侵犯及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移預(yù)后較差［7］，其生存率與尤文氏肉瘤和骨肉瘤相比顯著下降［8］。普通軟骨肉瘤預(yù)后一般較好，5年生存率可達(dá)60%，去分化軟骨肉瘤預(yù)后較差，患者多死于廣泛的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Sox9 mRNA是軟骨形成過程中一個非常重要的調(diào)節(jié)蛋白，指導(dǎo)軟骨特異性基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)軟骨組織的發(fā)育生長。最近研究報道顯示，Sox9 mRNA基因功能喪失可導(dǎo)致人類軟骨肉瘤細(xì)胞凋亡，說明在軟骨肉瘤中Sox9 mRNA發(fā)揮著致癌的作用［9］。Sox9 mRNA在多種類型的腫瘤中可增加腫瘤細(xì)胞增殖、入侵、遷移的能力［10］，多種生存和預(yù)后較差的實性瘤體與Sox9mRNA的過度表達(dá)相關(guān)［11-12］。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法探討不同分級軟骨肉瘤之間Sox9mRNA基因表達(dá)差異，結(jié)果顯示，Sox9mRNA表達(dá)在去分化軟骨肉瘤和普通軟骨肉瘤之間存在顯著性差異。與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤組織中高表達(dá)，而在去分化軟骨肉瘤組織中低表達(dá)，而且這種差異表達(dá)與腫瘤的肺轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)相關(guān)。這可能也是去分化軟骨肉瘤和普通軟骨肉瘤預(yù)后不同的原因之一。但Sox9 mRNA基因在軟骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及去分化過程中所起的具體作用尚不清楚，需進(jìn)一步研究證實。因此，從目前得到的信息來看，有效控制和干擾Sox9 mRNA的表達(dá)可能抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

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Significance of Sox9 mRNA in dedifferentiation process of chondrosarcoma

Liu Baiqi1，Meng Xianglong1，Zhang Hao1，Che Dexin1，WangGuowen2，HanJingang1（1.Department of Emergency Trauma Surgery，Qiqihaer Municipal First Hospital，Heilongjiang 161005，China；2.Department of Bone and Soft Tissue Tumor，Affiliated Tumor Hospital of Tianjin Medical University，Tianjin 300060，China）

ObjectiveTo investigate the role of Sox9 mRNA in differentiation process of chondrosarcoma，and to analyze its relation with clinical pathological parameters.MethodsThe expression difference of Sox9 mRNA between common chondrosarcoma and differentiated chondrosarcoma and its relation with the clinical pathological parameters were detected by using the immunohistochemical method.ResultsCompared with normal cartilage tissue，Sox9 mRNA was up-regulated in common chondrosarcoma and down-regulated in differentiated chondrosarcoma；the Sox9 mRNA expression level had statistical difference among different grades of chondrosarcoma（P＜0.05）；the positive difference of Sox9 mRNA expression had no relation with the age，gender and site（P＞0.05），while had relation with the lung metastasis and recurrence，moreover the positive rate in the patients with lung metastasis and recurrence was significantly higher than that in the patients without lung metastasis and recurrence，the difference was statistically significant（P＜0.01）.ConclusionSox9 mRNA is related with occurrence，progression，metastasis and prognosis of chondrosarcoma.

Chondrosarcoma；Immunohistochemistry；Cell dedifferentiation；Neoplasm recurrence；Neoplasm metastasis；Prognosis

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.15.006

A

1009-5519（2016）15-2292-02

劉百奇（1980-），碩士研究生，主治醫(yī)師，主要從事骨外科臨床工作。

（2016-03-11）