◎韓秋珍，周芳梅，張思妹（1.廣東省食品工業(yè)公共實驗室，廣東 廣州 510308；2.廣東省食品工業(yè)研究所，廣東 廣州 510308；3.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站，廣東 廣州 510308）

高效液相色譜法測定蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的含量

◎韓秋珍1，2，3，周芳梅1，3，張思妹2，3
（1.廣東省食品工業(yè)公共實驗室，廣東 廣州 510308；2.廣東省食品工業(yè)研究所，廣東 廣州 510308；3.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站，廣東 廣州 510308）

運用高效液相色譜法測定以蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉。樣品用水溶解，加入氯化鐵溶液，采用C18柱分離，以甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液進行梯度洗脫，出峰時間定性，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：該方法的乙二胺四乙酸二鈉檢出限為20 mg/kg，線性范圍為2～50 μg/mL，相關(guān)系數(shù)r=0.999 83，回收率為94.2％～97.5％，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）0.47％。該方法前處理簡便、靈敏度高、分離效果好、精確度高和精密度好，對蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的含量測定更有針對性。

乙二胺四乙酸二鈉；高效液相色譜法；蜜餞

乙二胺四乙酸二鈉，主要作為穩(wěn)定、凝固劑、抗氧化劑、防腐劑。我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2014）中允許乙二胺四乙酸二鈉用于果醬、地瓜果脯、腌漬的蔬菜、罐頭和飲料等［1］。但是，食入過多的乙二胺四乙酸二鈉，會影響人體健康，造成微量元素的損失，從而誘發(fā)一系列的疾病［2］。目前僅有一個行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)［3］SN/T 3855-2014《出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測定》可進行食品中乙二胺四乙酸含量的檢測，而國內(nèi)有關(guān)乙二胺四乙酸二鈉檢測方法的研究，也主要集中在醬腌菜、油炸小食品、罐頭等［2，4-9］。目前未有蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法。由于蜜餞中含有的雜質(zhì)較多，SN/T 3855-2014并不適用于蜜餞的檢測。蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的檢測，凈化過程的優(yōu)化成為分析的重點。因此，根據(jù)蜜餞的特性展開蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的分析技術(shù)研究很有必要。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀，配備二極管陣列檢測器；甲醇（色譜純）；磷酸（AR）；三氯化鐵（AR）以及實驗用水等。

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.97％）SGW （E）060311。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g（精確至0.000 1 g）至100 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的乙二胺四乙酸二鈉儲備液，4 ℃儲存?zhèn)溆?。分別吸取乙二胺四乙酸二鈉儲備液20、50、100、200 μL和500 μL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，即得含乙二胺四乙酸二鈉2、5、10、20 μg/mL和50 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2樣品處理

準(zhǔn)確稱取均勻樣品5 g至50 mL離心管中，加30 mL水，渦旋混勻，超聲15 min，接著加入1 mL氯化鐵溶液，渦旋混勻，超聲15 min，冷卻后用水定容至50 mL。用0.45 μm濾膜過濾，濾液備用。

1.2.3色譜條件

色 譜 柱：ZORBAX SB-Aq（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速：0.3 mL/min，柱溫：30 ℃，流動相為甲醇，B為甲醇，D為0.075 moL/L KH2PO4水溶液（10.2 g至1 000 mL，調(diào)節(jié)pH至3.0梯度洗脫，洗脫條件見表1，檢測波長為260 nm。

表1　梯度洗脫程序表

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

分別取乙二胺四乙酸二鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各20 μL，高效液相色譜分析，以乙二胺四乙酸二鈉質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5樣品測定

取樣品濾液20 μL作高效液相色譜分析，測定其峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定液中乙二胺四乙酸二鈉的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1樣品前處理方法的改進

由于SN/T 3855-2014《出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測定》中沒有規(guī)定蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法。很多文獻中測定乙二胺四乙酸二鈉時，會加入5 mL三氯甲烷進行衍生化后的凈化，試驗蜜餞樣品中加入三氯甲烷和不加三氯甲烷，結(jié)果沒有明顯差異（見圖1和圖2），最終確定樣品5 g至50 mL離心管中，加30 mL水，渦旋混勻，超聲15 min，接著加入1 mL氯化鐵溶液，渦旋混勻，超聲15 min，冷卻后用水定容至50 mL。用0.45 μm濾膜過濾，濾液備用。根據(jù)蜜餞樣品的特性，不需沉淀蛋白和脂肪，簡化了前處理過程，大大提高了工作效率。

圖1　樣品前處理不加三氯甲烷圖

圖2　樣品前處理加三氯甲烷圖

2.2流動相的選擇

據(jù)文獻報道，分析乙二胺四乙酸二鈉常用的流動相為四丁基氫氧化銨水溶液等離子對試劑，試驗一選擇甲醇和四丁基氫氧化銨水溶液作為流動相，試驗二選擇甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作為流動相，所得標(biāo)樣譜圖試驗結(jié)果（見圖3和圖4），考慮到選用離子對試劑會對色譜柱產(chǎn)生不可逆的影響，而且用離子對試劑時在譜圖上有個較大的溶劑峰，故實驗選擇了甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作為流動相。實驗發(fā)現(xiàn)，選擇等度洗脫時（見圖5），目標(biāo)分析物與樣品中的雜質(zhì)難以分離，雜質(zhì)干擾較大，因此在實驗中選擇了梯度洗脫（見圖6），有效地將目標(biāo)分析物與雜質(zhì)分離，且樣品測定效果較好。

圖3　甲醇和四丁基氫氧化銨水溶液作為流動相的乙二胺四乙酸二鈉色譜圖

圖4　甲醇和0.075 mol/L KH2PO4水溶液作為流動相的乙二胺四乙酸二鈉色譜圖

圖5　等度洗脫的樣品色譜圖

圖6　梯度洗脫的樣品色譜圖

2.3線性范圍

分 別 配 制2、5、10、20 μg/mL和50 μg/mL的乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.3中色譜條件上機測定，以乙二胺四乙酸二鈉質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程y=87.84x-41.59，相關(guān)系數(shù)為0.999 83（見圖7）。

圖7　乙二胺四乙酸二鈉的相關(guān)系數(shù)和回歸方程圖

2.4方法的加標(biāo)回收率

在樣品中加入低、中、高3個水平標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2進行樣品處理，按上述1.2.3中色譜條件上機測定，結(jié)果見表2，回收率范圍為94.2％～97.5％，平均回收率為95.9％。

表2　方法的加標(biāo)回收率表

2.5方法精密度

取同一樣品6份，在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)量0.500 mg，按1.2.2進行樣品處理，按上述1.2.3中色譜條件上機測定，進行重復(fù)性實驗，結(jié)果見表3，6次平行進樣的RSD為0.47％。

表3　方法的精密度表（n=6）

2.6檢出限

在空白蜜餞中添加20 mg/kg的乙二胺四乙酸二鈉時，按1.2.3中色譜條件上機測定，這時信噪比大于10，故檢出限定義為20 mg/kg。

3 結(jié)論

本實驗參照SN/T 3855-2014，針對蜜餞的特點，優(yōu)化了前處理方法，采用高效液相色譜法，甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作為流動相進行梯度洗脫測定蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的含量。實驗結(jié)果表明，該方法前處理簡便、靈敏度高、分離效果好、精確度高、精密度好，對蜜餞中乙二胺四乙酸二鈉的含量測定更有針對性。

［1］中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 2760-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

［2］鄭睿行，張 旭，方 芳，等.高效液相色譜法測定醬腌菜制品中EDTA殘留量［J］.中國食品添加劑，2011（2）：212-219.

［3］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 3855-2014 出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

［4］陳肇臻，劉小剛.油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉的高效液相色譜法測定［J］.標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)，2013 （6）：14.

［5］劉 波.甜蜜素檢測方法研究進展［J］.中國食品添加劑，2007（2）：218-222.

［6］張曉華，曾繁華，張銳夫.HPLC-MS/MS測定魚罐頭中乙二胺四乙酸二鈉殘留量［J］.化學(xué)工程師，2015，29（6）：39-43.

［7］楊長志，韓廣源，姜 冰，等.UPLC_MS_MS法測定八寶粥罐頭中乙二胺四乙酸二鈉殘留量［J］.食品科學(xué)，2015（4）：208-212.

［8］呂曉華，文 紅，許紅琴.高效液相色譜法測定板栗罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19（3）：517-518.

［9］魏冬旭，胡 坤，孫 瑩，等.高效液相色譜法測定食品中乙二胺四乙酸二鈉［J］.檢驗檢疫學(xué)刊，2013（6）：50-53.

Determination of Ethylenediamine Tetraacetic Acid Disodium Salt Content in Preserved Fruits by High Performance Liquid Chromatography

Han Qiuzhen1，2，3， Zhou Fangmei1，3， Zhang Simei2，3
（1. Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry， Guangzhou 510308， China；2. Guangdong Food Industry Institute， Guangzhou 510308， China；3.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 510308， China）

An analytical method for ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt in preserved fruits by high performance liquid chromatography was developed.Using pure water，F(xiàn)eCl3reagent， using C18column separation， with methanol and 0.075 mol/L KH2PO4solution gradient elution，high performance liquid chromatography was used to qualititative and quantitative analysis.Results show that the method of ethylenediamine tetraacetic acid disodium detection limit of 20 mg/kg， the linear range is 2 ～ 50 μg/mL，correlation coefficient r = 0.999 83， the recovery rate of 94.2％～97.5％， relative standard deviation （RSD） is 0.47％. The method is accurate，repeatable and suitable for the determination of ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt in preserved fruits.

Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt； High performance liquid chromatography；Preserved fruits

TS207.3

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.12.034

2013年國家發(fā)展改革委、工業(yè)和信息化部產(chǎn)業(yè)振興和技術(shù)改造專項（食品企業(yè)質(zhì)量安全檢測技術(shù)示范中心建設(shè)）。