李紫薇, 張　藝，歐陽艷，李雙雙，劉　沖

(伊犁師范學(xué)院新疆自治區(qū)教育廳普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆　伊寧　835000)

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薰衣草葉子化學(xué)成分分析與抗氧化活性*

李紫薇, 張藝，歐陽艷，李雙雙，劉沖

(伊犁師范學(xué)院新疆自治區(qū)教育廳普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆伊寧835000)

薰衣草葉；化學(xué)成分；抗氧化活性

1　實(shí)　驗(yàn)

1.1材料與儀器

石油醚(AR)，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；乙酸乙酯(AR)，成都市科龍化工試劑廠；正丁醇(AR)，天津市福晨化學(xué)試劑廠；無水乙醇、甲醇(AR)，天津市科盟化工工貿(mào)有限公司；氯仿(AR)，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；1，1-二苯基-2-2-苦基肼自由基(AR)，梯希愛上?；晒I(yè)發(fā)展有限公司；ABTS(AR)，上海金穗生物科技有限公司；抗壞血酸(AR)，天津光友精細(xì)化工研究所；維生素E(AR),北京鼎國生物技術(shù)有限公司。

UV-2500紫外可見分光光度計(jì)，日本島津公司；VOS-60A冷凍干燥箱，施都凱儀器設(shè)備有限公；KQ-300GVDV三頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-52系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠。

實(shí)驗(yàn)用去離子水。薰衣草葉產(chǎn)自新疆伊犁，薰衣草葉經(jīng)陰干粉碎，過60目篩，冷藏備用。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1薰衣草葉提取物化學(xué)成分定性實(shí)驗(yàn)

按照天然藥物化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)方法[5]設(shè)計(jì)流程，以去離子水、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯為溶劑，得薰衣草葉不同溶劑提取物，對伊犁產(chǎn)薰衣草葉子中的化學(xué)成分進(jìn)行初步定性研究[6-9]，每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)。

表1　提取液定性實(shí)驗(yàn)

1.2.2抗氧化活性實(shí)驗(yàn)的提取物制備

準(zhǔn)確稱取薰衣草葉粉末80.0000 g，在超聲波輔助下用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇及體積分?jǐn)?shù)60%乙醇依次各提取2次，合并提取液，真空過濾，減壓濃縮(40 ℃)得到浸膏，用去離子水定容至100 mL，然后依次分別用100 mL的石油醚萃取(6次)、乙酸乙酯萃取(3次)、正丁醇萃取(3次)，剩余部分為水層，分別減壓濃縮得到浸膏，冷凍干燥后得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物。配制適宜濃度供試液，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3清除DPPH·實(shí)驗(yàn)

依次移取10.00 mg/mL石油醚提取物試液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mL分別置10 mL比色管中，用無水乙醇定容至刻度線，依次得到0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL溶液。按上述方法操作，配制相同系列濃度的乙酸乙酯提取物溶液和正定醇提取物溶液。參考文獻(xiàn)方法[3]，分別測定不同濃度提取物、VC對DPPH·清除能力。每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)，取其平均值。

1.2.4清除ABTS+·實(shí)驗(yàn)

分別配制0.03、0.05、0.08、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應(yīng)質(zhì)量濃度的VC、VE溶液。

參照Ozcan·Erel提出的用H2O2/ABTS+·/醋酸鹽緩沖溶液體系[10]。用pH 3.6醋酸鈉鹽緩沖液將278 μL過氧化氫稀釋到1000 mL(2 mmol/L)；以該過氧化氫溶液為溶劑配制10 mmol/L ABTS+·溶液，室溫放置1 h，溶液呈藍(lán)綠色，冷藏備用[11]。取一定體積10 mmol/L的ABTS+·溶液，用醋酸鈉鹽緩沖液稀釋到吸光度為0.70±0.02(734 nm)。取1.00 mL樣品溶液，加入4.00 mL ABTS+·溶液，準(zhǔn)確震蕩30 s，在30 ℃下測定6 min內(nèi)反應(yīng)溶液吸光度。計(jì)算清除率[7]。每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)，取其平均值。

1.2.5清除·OH實(shí)驗(yàn)

分別配制0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應(yīng)質(zhì)量濃度的VC溶液。取4.50 mmol/L FeSO4溶液1.00 mL，加入1.00 mL 4.50 mmol/L水楊酸-乙醇溶液1.00 mL、提取物溶液1.00 mL、1.00 mL 4.40 mmol/L H2O2。37 ℃水浴中反應(yīng)0.5 h，在 510 nm 處測定吸光值，計(jì)算清除率[3]。每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)，取其平均值。

取3.00 mL Tris-HCl緩沖液(pH 8.2)，加入0.50 mL不同濃度供試液，30 ℃水浴保溫20 min，加入7 mmol/L鄰苯三酚溶液3.00 mL，反應(yīng)4 min后加入1.00 mL濃HCl終止反應(yīng)，420 nm 處測吸光度值，計(jì)算清除率[3]。每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)，取其平均值。

1.2.7FRAP還原法實(shí)驗(yàn)

分別配制0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應(yīng)質(zhì)量濃度的VC溶液。移取提取物溶液及VC溶液各2.50 mL，分別加入0.20 mol/L磷酸鈉緩沖溶液(pH6.6)2.50 mL和10.00 mg/mL鐵氰化鉀溶液2.50 mL。50 ℃保溫20 min，再加入0.10 g/mL 2.50 mL三氯乙酸溶液，離心10 min(650 r/min)。移取上層溶液5.00 mL，分別加入5.00 mL去離子水和1 mg/mL氯化鐵溶液1.00 mL，混合均勻，在700 nm處測定吸光度。每個(gè)檢測做4個(gè)重復(fù)，取其平均值。

2　結(jié)果與討論

2.1薰衣草葉化學(xué)成分定性實(shí)驗(yàn)

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，伊犁產(chǎn)薰衣草葉子中含有多糖、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、酚類、甾體、萜類、香豆素、內(nèi)酯類、黃酮類化合物及揮發(fā)油等成分。

2.2提取物對DPPH·的清除作用

在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，不同溶劑提取物都表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化活性，其對DPPH·的清除作用隨提取物的濃度增大而增大。由圖2可知，當(dāng)濃度為1.00 mg/mL時(shí)，薰衣草葉不同溶劑提取物DPPH·的清除作用的大小順序?yàn)椋篤C≈乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物≈水提取物。即乙酸乙酯提取物所表現(xiàn)的DPPH·清除效果最好，相當(dāng)于VC清除能力的99.56%，水提取物的清除率相當(dāng)于VC的84.45%。

圖2　提取物對DPPH·的清除作用

2.3提取物對ABTS+·的清除作用

在抗氧化物質(zhì)的作用下，ABTS自由基陽離子被部分清除，綠色逐漸減弱，溶液吸光度降低。由圖3可知，當(dāng)提取物濃度為0.70 mg/mL時(shí)，薰衣草葉子的不同溶劑提取物對ABTS+·清除能力大小順序?yàn)椋篤E>乙酸乙酯提取物>VC≈水提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物。即乙酸乙酯提取物所表現(xiàn)的ABTS+·清清除率相當(dāng)于VE的97.85%，石油醚提取物的清除率相當(dāng)于VE的55.71%。

圖3　提取物對ABTS+·的清除作用

2.4提取物對·OH的清除作用

羥基自由基是生物細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)活性最強(qiáng)的氧族自由基。實(shí)驗(yàn)采用水楊酸競爭捕捉自由基的方式進(jìn)行測定。由圖4可知，當(dāng)提取物濃度為1.00 mg/mL時(shí)，薰衣草葉不同溶劑提取物對·OH的清除作用的大小順序?yàn)椋篤C>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物>水提取物。乙酸乙酯提取物對羥自由基清除能力最強(qiáng)，相當(dāng)于等濃度VC清除作用的76.76%。水提取物的清除率相當(dāng)于VC的55.68%。

圖4　提取物對·OH的清除作用

圖5　提取物對·的清除作用

2.6提取物的還原能力

還原能力是表征物質(zhì)在氧化還原反應(yīng)中給出電子自身發(fā)生氧化的能力。實(shí)驗(yàn)中，采用三價(jià)鐵離子還原法觀察物質(zhì)的還原能力，吸光值越大，說明樣品溶液的還原能力越強(qiáng)。由圖6可知，在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，不同溶劑提取物都均表現(xiàn)出一定的還原能力，但各部分均弱于等濃度VC溶液。當(dāng)濃度為1.00 mg/mL時(shí)，薰衣草葉子不同溶劑提取物還原能力的大小順序?yàn)椋?VC>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>水提取物>石油醚提取物。此時(shí)乙酸乙酯提取物的還原能力相當(dāng)于VC還原能力的28.13%，正丁醇提取物與之接近，石油醚提取物所表現(xiàn)的還原能力最弱，相當(dāng)于VC還原能力的10.80%。

圖6　提取物的還原能力

3　結(jié)　論

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1998:112.

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Chemical Composition and Antioxidant Activity of Lavender Leaves*

LIZi-wei,ZHANGYi,OUYANGYan,LIShuang-shuang,LIUChong

(Key Laboratory at Universities of Education Department of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Yili Normal University, Xinjiang Yining 835000, China)

lavender leaves; chemical composition; antioxidant activity

新疆維吾爾自治區(qū)教育廳普通高等學(xué)?！疤烊划a(chǎn)物化學(xué)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”重點(diǎn)開放課題(No.2013YSHXZD02)。

李紫薇(1970-)，女，副教授，主要從事天然產(chǎn)物的應(yīng)用研究和環(huán)境分析。

O652

A

1001-9677(2016)010-0064-04