陳迎麗，王永士，肖　飛，宋光林，楊鴻波

(1貴州大學(xué)，貴州　貴陽　55002；2貴州省分析測(cè)試研究院，貴州　貴陽　550002)

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高效液相色譜法測(cè)定環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分的含量

陳迎麗1，2，王永士2，肖飛1，2，宋光林2，楊鴻波2

(1貴州大學(xué)，貴州貴陽55002；2貴州省分析測(cè)試研究院，貴州貴陽550002)

為了建立一種高效液相色譜測(cè)定環(huán)丙酰草胺含量的分析方法，為農(nóng)藥登記提供科學(xué)的評(píng)估數(shù)據(jù)。采用高效液相色譜法，使用ZORBAXSB-C18色譜柱，以甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V/V)為流動(dòng)相，流速為1mL/min，在255nm波長(zhǎng)下對(duì)環(huán)丙酰草胺進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明當(dāng)環(huán)丙酰草胺質(zhì)量濃度在25～400mg/L范圍內(nèi)，高效利用液相色譜法的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 1，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.20 %，平均回收率為：99.2 %。該分析方法準(zhǔn)確、快速，適用于環(huán)丙酰草胺定量分析。

環(huán)丙酰草胺，高效液相色譜，定量分析

環(huán)丙酰草胺化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1，純品為白色粉狀固體，通用名稱為Cyclanilide，化學(xué)名稱為：1-(2，4-二氯苯氨基羰基)環(huán)丙烷羧酸，分子式：C11H9Cl2NO3，CAS號(hào)：113136-77-9，熔點(diǎn)195.5℃，蒸汽壓<1×10-5Pa(25℃)、8×10-6Pa(50℃)，分配系數(shù)Kow lgP=3.25(21℃)。環(huán)丙酰草胺屬植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，即可以抑制頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)植物側(cè)芽萌發(fā)、側(cè)枝的生長(zhǎng)，對(duì)一些觀賞植物起到自然修剪的作用，如秋焰紅楓[1]，也可以增加一些觀賞花花朵的數(shù)量，如輪葉金雞菊[2]。從經(jīng)濟(jì)方面考慮，環(huán)丙酰草胺可以促進(jìn)一些植物的成熟，縮短植物的收獲時(shí)間，如蘋果[3]，棉花[4]等。有文獻(xiàn)報(bào)道[5]，使用HPLC-MS / MS的方法可以檢測(cè)出水果中的環(huán)丙酰草胺含量，但近年來關(guān)于環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分分離和定量分析的文獻(xiàn)報(bào)道很少，本文采用反相高效液相色譜法，使用C18色譜柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，對(duì)環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分進(jìn)行分離和定量分析。該方法具有操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，能為環(huán)丙酰草胺的生產(chǎn)質(zhì)量控制和分析方法提供參考。

圖1　環(huán)丙酰草胺結(jié)構(gòu)式Fig.1　The constitutional formula of Cyclanilide

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

Agilent 1220 液相色譜儀；Agilent UV-Vis 8453紫外分光光度計(jì)；超聲波振蕩器；AL204電子天平；甲醇(色譜純，Honeywell Burdick Jackson Ulsan，680-160 Korea，批號(hào)：100296)；環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品(99.9 %，Dr.Ehrenstorfer GmbH)；蒸餾水為新蒸二次蒸餾水；環(huán)丙酰草胺原藥(四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司)。

1.2色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，4.6×250 mm×5 μm；流動(dòng)相：甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V / V)；流速：1 mL / min；檢測(cè)波長(zhǎng)：255 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。在上述色譜操作條件下，環(huán)丙酰草胺的保留時(shí)間大約為3.9 min。

圖2　環(huán)丙酰草胺標(biāo)樣色譜圖Fig.2　HPLC standard chromatogram of cyclanilide

圖3　環(huán)丙酰草胺原藥色譜圖Fig.3　HPLC chromatograms of cyclanilide

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取0.025 0 g環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解定得到環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度為1 000 mg / L的儲(chǔ)備液，搖勻備用。稀釋1 000 mg / L的儲(chǔ)備液為以下濃度：25、50、100、200和400 mg / L，搖勻作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

神經(jīng)外科患者免疫力低,侵入性操作多,是醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)人群。通過主動(dòng)性目標(biāo)監(jiān)測(cè),及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染的危險(xiǎn)因素,采取針對(duì)性的預(yù)防控制措施。

1.3.2試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取環(huán)丙酰草胺原藥0.010 3、0.010 1、0.010 2、0.010 2、0.010 0 g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到環(huán)丙酰草胺原藥濃度分別為103 mg / L、101 mg / L、102 mg / L、102 mg / L、100 mg / L的溶液，搖勻作為試樣溶液。

1.3.3樣品溶液的測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定性后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針環(huán)丙酰草胺的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.2 %后，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4計(jì)算

樣品有效成分含量W(%)按下式(1)計(jì)算：

W=C×P×V×D×10-6/ M

(1)

式中：

W：樣品有效成分含量(%)；

C：測(cè)定濃度(mg·L-1)；

P：標(biāo)準(zhǔn)樣品純度(%)；

V：樣品定容體積(mL)；

D：樣品稀釋倍數(shù)；

M：樣品質(zhì)量(g)。

2　結(jié)果與討論

2.1流動(dòng)相的選擇

色譜柱及流動(dòng)相的選擇是決定液相色譜分離效果的關(guān)鍵，分別用甲醇和乙腈配制流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，甲醇在255 nm波長(zhǎng)下吸光度值低，粘度小，分離效果和色譜峰形均較好，所以選擇甲醇作為流動(dòng)相中的有機(jī)相。環(huán)丙酰草胺為弱酸性，因此當(dāng)流動(dòng)相呈弱酸性時(shí)，可以抑制待測(cè)組分的解離，延長(zhǎng)各組分在固定相上的保留時(shí)間并改善峰形。為使其能得到完全分離，調(diào)節(jié)流動(dòng)相中水溶液的pH進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。同時(shí)分別用鹽酸、磷酸、甲酸和冰乙酸來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的酸度，由實(shí)驗(yàn)得知用冰乙酸調(diào)節(jié)pH時(shí)，引起基線的漂移最小，靈敏度最佳，所以本實(shí)驗(yàn)采用2 %冰乙酸調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值。

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

使用紫外可見光分光光度儀對(duì)環(huán)丙酰草胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行200～400 nm的全波長(zhǎng)掃描(見圖4)得到其最大吸收波長(zhǎng)為210 nm，但是在該波長(zhǎng)處干擾峰多，不適合常量分析。在255nm為環(huán)丙酰草胺的第2個(gè)吸收峰，在該波長(zhǎng)下，環(huán)丙酰草胺吸收值適中，線性范圍寬，可以滿足定量分析要求。

圖4　環(huán)丙酰草胺紫外吸收譜圖Fig.4　UV Absorbance of cyclanilide

2.3線性范圍

在1.2色譜條件下，分別注入不同質(zhì)量濃度的環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，從而得到不同質(zhì)量濃度的環(huán)丙酰草胺的峰面積。峰面積(y)與濃度(x)之間表現(xiàn)良好的線性，線性方程為y=20.237 28x+ 32.366 42，相關(guān)系數(shù)為：0.999 1。具體數(shù)據(jù)見表1，校正曲線見圖5。

2.4精密度測(cè)定

在相同的色譜操作條件下，取同一原藥樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算環(huán)丙酰草胺的濃度。結(jié)果見表2，方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21 %，變異系數(shù)為0.20 %，表明該方法可用。

表1　環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與峰面積Tab.1　The concentration and peak area of cyclanilide standard

圖5　環(huán)丙酰草胺標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5　Calibration curve of cyclanilide 表2　環(huán)丙酰草胺精密度測(cè)定結(jié)果 Tab.2　The precision of the determination results of cyclanilide

樣品編號(hào)測(cè)定含/(μg·mL-1)平均值/%標(biāo)準(zhǔn)偏差/%變異系數(shù)/%1100.512100.903100.484100.475100.586100.27100.540.210.20

2.5準(zhǔn)確度測(cè)定

取0.010 1 g樣品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制成100 μg / mL溶液；將100 μg / mL的環(huán)丙酸酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液按照體積比1∶1加入到上述樣品溶液中，配制成濃度為100.50 μg / mL的待測(cè)溶液。重復(fù)上述操作，配制6份與待測(cè)組分含量測(cè)定時(shí)濃度相同的待測(cè)溶液。按上述1.2條件重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果見表3，均回收率為 99.19 %，變異系數(shù)為0.22 %。表明本方法可用。具體數(shù)據(jù)見表3。

表3　環(huán)丙酰草胺準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果Tab.3　The accuracy of determination results of cyclanilide

3　結(jié)論

隨著高效液相色譜儀的發(fā)展，高效液相色譜儀已經(jīng)成為當(dāng)今農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)、化學(xué)品檢測(cè)以及農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主要手段。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文所建立的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度線性關(guān)系良好，是進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)較理想的分析方法。

【REFERENCES】

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[2]FARRIS M E，KEEVER G J，KESSLER J R，et al.Cyclanilide Promotes Shoot Production and Flowering of Coreopsis and Coneflower during Nursery Production[J].Journal of Environmental Horticulture， 2011，29(3)：108.

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[4]BURTON J D，PEDERSEN M K，COBLE H D.Effect of Cyclanilide on Auxin Activity[J].Journal of Plant Growth Regulation，2008，27(4)：342-352.

[5]HUANG H H，ZHANG J，XU D M，et al.Determination of 21 plant growth regulator residues in fruits by QuEChERS-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Chinese Journal of Chromatography，2014，32(7)：707-716.

Determination of active ingredients content in cyclanilide by HPLC

CHEN Yingli1，2，WANG Yongshi2，XIAO Fei1，2，SONG Guanglin2，YANG Hongbo2

(1GuizhouUniversity，Guiyang550002；2GuizhouAcademyofTestingandAnalysis，Guiyang550002，China)

An HPLC method was developed for the quantitative determination of cyclanilide.The result would provide scientific data for pesticide registration.The content of active ingredients in cyclanilide was determined quantitatively by HPLC with ZORBAX SB C18 column at UV 255 nm，and methanol-water(90︰10，V / V) as mobile phase at a flow rate of 1 mL / min.The assay exhibited a good linearity when the cyclanilide concentration was from 25 to 400 mg / L with a coefficient of 0.9991.The relative standard deviation was 0.20 % and the average recovery was 99.2 %.The method is simple and accurate，and is suitable for the quantitative analysis of cyclanilide.

cyclanilide，HPLC，quantitative analysis

TQ450.7

A

1003-6563(2016)04-0061-04

2016-05-27；

2016-06-03

陳迎麗(1989-)，女，本科。研究方向：從事儀器分析。