吳美媛，余甜女，王喜周（麗水學(xué)院成教學(xué)院，浙江麗水323000）

猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠體內(nèi)抗氧化作用的研究

吳美媛，余甜女，王喜周*
（麗水學(xué)院成教學(xué)院，浙江麗水323000）

研究猴頭菇多糖的體內(nèi)抗氧化活性。通過頸背部皮下注射D-半乳糖，制備衰老小鼠模型，測(cè)定猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠血清及肝臟組織內(nèi)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）及蛋白質(zhì)羰基含量的影響。結(jié)果表明，D-半乳糖衰老模型小鼠血清及肝臟內(nèi)T-SOD、GSH含量顯著降低（P＜0.01），MDA與蛋白質(zhì)羰基含量明顯升高（P＜0.01），猴頭菇多糖可以顯著提高D-半乳糖小鼠血清和肝臟內(nèi)T-SOD、GSH含量，降低MDA與蛋白質(zhì)羰基含量，對(duì)D-半乳糖小鼠，猴頭菇多糖表現(xiàn)出良好的體內(nèi)抗氧化作用。

猴頭菇多糖；體內(nèi)；抗氧化；自由基

猴頭菇是一種易人工栽培的食用真菌，味道鮮美，性平味甘，有補(bǔ)脾健胃，助消化，安五臟之功效，歷代醫(yī)學(xué)典籍中均有記載。猴頭菇不僅具有很高的食用價(jià)值，還具有一定的保健功能，是我國常用的健康食材。近年來，隨著人們養(yǎng)生理念的興起和對(duì)食用真菌的開發(fā)利用研究不斷深入，食用真菌中多糖逐漸成為研究熱點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、降血脂、延緩衰老等活性［1］。本文研究了猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖所致的衰老模型小鼠體內(nèi)抗氧化作用，為猴頭菇食品的進(jìn)一步研究開發(fā)提供一些參考。

1　材料

猴頭菇多糖：浙江方格藥業(yè)，純度大于90%；D-半乳糖（sigma）；丙二醛（Malondialdehyde，MDA）試劑盒、總超氧化物歧化酶（Total Superoxide Dismutase，TSOD）試劑盒、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）試劑盒、蛋白質(zhì)羰基試劑盒均購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

昆明種雄性小鼠（清潔級(jí)），18 g～22 g：購自上海交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：生產(chǎn)許可SCXK（滬）2013-0021。

2　方法

2.1分組、造模與實(shí)驗(yàn)方案

取60只小鼠，按照隨機(jī)隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、猴頭菇多糖低、中、高劑量組，每組12只，模型組和猴頭菇多糖組小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖（200 mg/kg體重）復(fù)制衰老小鼠模型，正常組注射等體積的生理鹽水。每日給藥一次，連續(xù)給藥6周，注射D-半乳糖4周時(shí)，猴頭菇多糖組給藥組灌胃給于100、200 mg/mL和300 mg/mL的猴頭菇多糖溶液，灌胃體積為20 mL/kg體重，正常組和模型組灌胃相同體積的生理鹽水［2-3］。

2.2血清及肝組織樣品制備

各組小鼠眼眶取血，4℃條件下3 000 r/mim離心15 min，取上清（即血清）備用。小鼠取血后脫臼處死，快速取出肝組織，0℃～2℃生理鹽水洗去淤血。精密稱取肝組織0.5 g，加入0℃生理鹽水4.5 mL，置勻漿器中冰水浴迅速研磨制成組織勻漿，4℃條件下4 000 r/min離心10 min，取上清，備用［4-5］。

2.3T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定

嚴(yán)格按照T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基水平測(cè)定試劑盒操作說明測(cè)定血清及肝臟組織內(nèi)T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基水平含量。

2.4數(shù)據(jù)處理

3　結(jié)果與分析

3.1猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白羰基含量的影響

猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響見表1。

表1猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響（±SD）Table 1　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum of aging mice induced by D-galactose

表1猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響（±SD）Table 1　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum of aging mice induced by D-galactose

注：▲與正常組比較P＜0.05；▲▲與正常組比較P＜0.01；★與模型組比較P＜0.05；★★與模型組比較P＜0.01。

組別　T-SOD/（U/mL） MDA/（nmol/mL） GSH/（mg/L）　蛋白質(zhì)羰基/ （nmol/mgprot）對(duì)照組　154.32±26.33　12.37±6.18　13.68±2.25　6.43±1.02模型組　94.21±23.17▲▲　37.25±13.14▲▲　7.12±1.33▲▲　12.80±1.54▲▲低劑量組　105.41±20.56　25.66±7.25★　8.92±2.17★　10.48±1.77中劑量組　122.88±23.72★★　19.68±9.44★★　10.15±3.72★　7.15±1.64★★高劑量組　147.25±25.34★★　15.50±4.13★★　12.65±3.27★★　7.13±2.22★★

由表1可知，模型組小鼠血清中T-SOD、GSH含量與對(duì)照組相比顯著下降（P＜0.01），MDA及蛋白質(zhì)羰基含量顯著上升（P＜0.01），表明造模成功。100 mg/mL猴頭菇多糖對(duì)衰老小鼠血清中MDA含量下降和GSH含量上升有顯著影響（P＜0.05），對(duì)T-SOD水平升高及蛋白質(zhì)羰基含量降低無明顯影響（P＞0.05），200 mg/mL 和300 mg/mL猴頭菇多糖對(duì)衰老小鼠血清中MDA及蛋白質(zhì)羰基含量下降、GSH和T-SOD水平升高均有極顯著影響（P＜0.01）。猴頭菇多糖能提高衰老小鼠血清中SOD和GSH水平，并且能降低血清中MDA及蛋白質(zhì)羰基的含量，且其活性與濃度正相關(guān)，其中高劑量多糖組效果最好，小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量基本接近對(duì)照組。

3.2猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠肝臟組織中TSOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響

猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠肝臟組織中TSOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響見表2。

表2猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠肝臟組織中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響（±SD）Table 2　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in liver tissue of aging mice induced by D-galactose

表2猴頭菇多糖對(duì)D-半乳糖小鼠肝臟組織中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量的影響（±SD）Table 2　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in liver tissue of aging mice induced by D-galactose

注：▲與正常組比較P＜0.05；▲▲與正常組比較P＜0.01；★與模型組比較P＜0.05；★★與模型組比較P＜0.01。

蛋白質(zhì)羰基/ （nmol/mgprot）對(duì)照組　197.43±20.68　0.82±0.30　6.72±1.34　3.43±0.42模型組　152.34±10.57▲▲　2.54±0.36▲▲　4.47±0.71▲▲　7.86±0.75▲▲低劑量組　164.94±18.61　1.97±0.28★★　5.27±0.88★　6.58±0.69★★中劑量組　186.74±21.33★★　1.51±0.17★★　6.34±1.14★★　4.36±0.53★★高劑量組　203.41±15.63★★　1.03±0.21★★　7.13±1.51★★　3.13±0.22★★組別　T-SOD/ （U/mgprot）MDA/ （nmol/mgprot）GSH/ （mg/gprot）

可知模型組肝臟組織中T-SOD、GSH含量與對(duì)照組相比顯著下降（P＜0.01），MDA和蛋白質(zhì)羰基含量顯著上升（P＜0.01）。100 mg/mL猴頭菇多糖可以顯著提高衰老小鼠肝臟組織中GSH水平（P＜0.05），極顯著降低MDA和蛋白質(zhì)羰基含量（P＜0.01），對(duì)TSOD水平升高無明顯影響（P＞0.05）。200 mg/mL和300 mg/mL猴頭菇多糖對(duì)衰老小鼠肝臟組織中MDA和蛋白質(zhì)羰基含量下降、GSH和T-SOD水平升高均有極顯著影響（P＜0.01）。綜上，猴頭菇多糖能提高衰老小鼠肝臟組織中SOD和GSH水平，并且能降低MDA和蛋白質(zhì)羰基的含量，且其活性與濃度正相關(guān)，其中高劑量多糖組效果最好，小鼠肝臟組織中T-SOD、GSH和蛋白質(zhì)羰基含量?jī)?yōu)于對(duì)照組，MDA含量基本接近對(duì)照組。

4　結(jié)論與討論

在正常代謝條件下，生物體內(nèi)自由基處于產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡中，若水平過量則會(huì)導(dǎo)致生物體代謝功能紊亂，引發(fā)疾病。D-半乳糖作為一種營養(yǎng)成分參與機(jī)體葡萄糖代謝過程，濃度增高則其代謝產(chǎn)物半乳糖醇會(huì)在細(xì)胞內(nèi)大量堆積而引起細(xì)胞功能障礙，從而破壞機(jī)體抗氧化系統(tǒng)，引起自由基積聚，產(chǎn)生過氧化效應(yīng)。本研究通過向小鼠注射D-半乳糖制造小鼠氧化衰老模型，考察不同劑量猴頭菇多糖對(duì)氧化衰老小鼠機(jī)體的修復(fù)能力。

SOD是構(gòu)成機(jī)體酶促抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，參與機(jī)體自由基清除代謝反應(yīng)，能直接反應(yīng)體內(nèi)抗氧化功能。MDA是不飽和脂肪酸被自由基攻擊后生成的氧化代謝產(chǎn)物，能反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度。GSH通過還原反應(yīng)將自由基和過氧化物還原成水和羥基化物，降低兩者對(duì)細(xì)胞膜的損害，保障細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，其水平高低可反映機(jī)體氧化修復(fù)能力的強(qiáng)弱［7-9］。蛋白羰基主要是由于蛋白多肽鏈的Pro、Ser、Thr 或Tyr等殘基被氧化而降解形成的衍生物，其含量高低可反映蛋白質(zhì)氧化程度的高低［10］。本研究以D-半乳糖小鼠血清及肝臟組織內(nèi)T-SOD、MDA、GSH及蛋白質(zhì)羰基含量為指標(biāo)評(píng)價(jià)猴頭菇多糖的抗氧化活性。

本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠血清和肝臟組織中T-SOD、GSH水平顯著下降，MDA水平顯著升高，肝臟組織中蛋白羰基類化合物水平顯著升高，猴頭菇多糖對(duì)小鼠血清和肝臟組織中T-SOD、GSH水平，降低MDA水平有顯著提高作用，能顯著降低肝臟組織中蛋白羰基類化合物水平，高劑量多糖組小鼠的抗氧化修復(fù)能力基本接近甚至優(yōu)于對(duì)照組。研究結(jié)果表明猴頭菇多糖具有良好的體內(nèi)抗氧化活性，且其抗氧化活性與濃度正相關(guān)，具有較大的開發(fā)潛力，在功能食品以及日化用品領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊。

［1］Ding-Tao Wu，Wen-Zhi Li，Jun Chen，et al.An evaluation system for characterization of polysaccharides from the fruiting body of Hericium erinaceus and identification of its commercial product［J］.Carbohydrate Polymers，2015，124（25）：201-207

［2］張繼業(yè)，李亞楠，常春，等.補(bǔ)陽還五湯小鼠體內(nèi)抗氧化作用的藥效動(dòng)力學(xué)研究［J］.中草藥，2015，46（1）：96-100

［3］石娟，張曼莉，孫漢巨，等.黑米花青素體內(nèi)抗氧化研究［J］.食品工業(yè)科技，2015，36（5）：348-351

［4］李永慧，孫朝輝，山永凱，等.黑果枸杞口服液對(duì)正常小鼠體內(nèi)抗氧化活性的影響［J］.中成藥，2015，37（8）：1836-1839

［5］程水明，劉瑩，梅光明，等.羧甲基茯苓多糖的抗氧化活性研究［J］.食品研究與開發(fā)，2013，34（3）：1-4

［6］高璐，王瀅，饒勝其，等.葡萄籽原花青素提取物對(duì)衰老模型小鼠抗氧化作用［J］.食品科學(xué)，2014，35（23）：253-256

［7］劉迪，尚華，宋曉宇，等.杜仲葉多酚體內(nèi)和體外抗氧化活性［J］.食品研究與開發(fā)，2014，35（9）：5-8

［8］Diana Dumitriu，Rafael A.Peniado，José Peinado，et al.Grape pomace extract improves the in vitro and in vivo antioxidant properties of wines from sun light dried Pedro Ximénez grapes［J］.Journal of Functional Foods，2015，17（2）：380-387

［9］余曉紅，朱雪梅，李鳳偉，等.蘆葦葉黃酮類提取物體內(nèi)體外抗氧化性研究［J］.食品科學(xué)，2015，36（1）：209-212

［10］白銀花，劉婧，李曉，等.不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)乙醇氧化損傷模型小鼠的抗氧化作用比較［J］.食品研究與開發(fā)，2014，35 （13）：126-129

Investigation on the Antioxidant Effects in Vivo of Hericium Polysaccharides on Aging Mice Induced by D-Galactose

WU Mei-yuan，YU Tian-nü，WANG Xi-zhou*
（Continuing Education College of Lishui University，Lishui 323000，Zhejiang，China）

To study the antioxidant effects in vivo of polysaccharide from Hericium erinaceus on aging mice induced by D-galactose.Mice were subcutaneous injected with D-galactose at the neck back to establish the aging model，the antioxidant activity in vivo of polysaccharide from Hericium erinaceus was evaluated by measure the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum and liver tissue.The results showed that the contents of T-SOD and GSH in serum and liver tissue of aging mice induced by D-galactose were reduced significantly（P＜0.01），the contents of MDA and protein carbonyl were increased significantly（P＜0.01），Hericium polysaccharides was effective in improving the the contents of T-SOD and GSH in serum and liver tissue of aging mice induced by D-galactose and reducing the contents of MDA and protein carbonyl，have strong antioxidant activity in vivo.

Hericium polysaccharides；in vivo；antioxidant activity；free radical

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.014

吳美媛（1973—），女（漢），實(shí)驗(yàn)師，學(xué)士，研究方向：天然藥物活性成分提取及純化研究。
*

2016-03-24