應(yīng)盼

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科，浙江　杭州310009)

?

·輸血與檢驗·

類孟買型Ahm分泌型的血型鑒定及輸血

應(yīng)盼

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科，浙江杭州310009)

摘要：目的血清學(xué)和分子生物學(xué)鑒定類孟買型Ahm分泌型，為患者準(zhǔn)備手術(shù)用血。方法應(yīng)用常規(guī)血清學(xué)方法檢測患者紅細(xì)胞抗原及血清中的抗體，吸收放散試驗鑒定紅細(xì)胞上弱表達(dá)的ABO抗原，測定唾液中的血型物質(zhì)，進(jìn)行分子生物學(xué)測序分析。結(jié)果患者血型為罕見的類孟買型Ahm分泌型，血清中有抗-H抗體。結(jié)論鑒定出罕見類孟買型，血清中含有抗-H，其FUT1基因為第547~552位AG兩堿基缺失的純合態(tài)，為最常見單體型。

關(guān)鍵詞：類孟買型Ahm分泌型；抗-H；FUT1基因

1952年Bhende發(fā)現(xiàn)孟買型(Bombay phenotype)，1961年Levine發(fā)現(xiàn)類孟買型(para-Bombay phenotype)，這兩種罕見表型的紅細(xì)胞上完全或部分缺失H抗原[1]。目前研究證實α-1，2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因（FUT1）的突變是導(dǎo)致類孟買的主要原因[2]。筆者在本院入院病人中發(fā)現(xiàn)1例，并在血清學(xué)實驗的基礎(chǔ)上做基因測序分析，鑒定為類孟買型Ahm分泌型。

1　材料與方法

1.1樣本來源患者鮑某，女，70歲，無既往輸血史，臨床診斷為鼻腔腫瘤，擬手術(shù)治療，申請手術(shù)備血。入院后常規(guī)血型鑒定及備血，血型檢測時發(fā)現(xiàn)正反定型不符，正定型為A型，反定型與標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞均發(fā)生不同程度凝集，與自身紅細(xì)胞不凝集，抗體篩查陽性。重新收集其全血及唾液標(biāo)本進(jìn)一步檢測。

1.2試劑和儀器單克隆抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H、抗篩細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞(上海市血液生物醫(yī)藥有限公司)，抗-Lea、抗-Leb(加拿大TITUS公司產(chǎn)品)，微柱凝膠抗球蛋白卡（西班牙戴安娜公司生產(chǎn)），9700型PCR自動擴增儀(PE公司)、純化試劑盒（QIAGEN公司）、ABI PRISM 377測序儀。

1.3血型鑒定⑴正定型：取4支試管，各加入洗滌后的5%患者紅細(xì)胞懸液50μl；再分別各加入抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H試劑50μl，離心觀察結(jié)果。⑵反定型：取4支試管各加入患者血清50μl，再分別各加入A、B、O細(xì)胞和自身細(xì)胞50μl，離心觀察結(jié)果。⑶Lewis血型：取2支試管，各加入洗滌后5%患者紅細(xì)胞懸液50μl，再分別加入單克隆抗-Lea、抗-Leb試劑50μl，離心觀察結(jié)果。

1.4抗體篩選在微柱凝膠抗球蛋白卡中三孔分別加入患者血清50μl，和抗體篩選細(xì)胞（OⅠ~OⅢ）各50μl，37℃溫育15min，專用離心機離心10min取出觀察結(jié)果。

1.5吸收放散試驗取一定量患者壓積紅細(xì)胞洗滌4次后平均分成2份（每份1ml），分別加入等量抗-A、抗-B血清混合，經(jīng)冰箱4℃吸收1h，取出用冷鹽水洗滌4次，經(jīng)56℃10min熱放散，并保溫離心，吸取上層暗紅色放散液分別與A、B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞反應(yīng)。

1.6唾液中血型物質(zhì)測定把單克隆抗-A、抗-B、抗-H血清以4+的最高稀釋倍數(shù)分別稀釋備用，取患者煮沸處理后的唾液與稀釋過的抗血清作中和抑制試驗，檢測唾液中A、B、H血型物質(zhì)。

1.7測序分析FUT1基因擴增方法同文獻(xiàn)[3]的方法。PCR擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳30 min，紫外透射儀下顯示擴增成功后，從凝膠上切取目的DNA片段，用QIA-quick gelextraction kit(德國Qiagen公司)試劑盒純化后直接用ABI PRISM 377測序儀進(jìn)行測序分析。

2　結(jié)果

2.1血型鑒定結(jié)果見表1。

2.2抗體篩選患者血清與上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的抗體篩選細(xì)胞(OⅠ~OⅢ)均呈陽性（2+）反應(yīng)。經(jīng)抗-A血清吸收后的紅細(xì)胞釋放液與標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞呈凝集反應(yīng)，經(jīng)抗-B血清吸收后的紅細(xì)胞釋放液與標(biāo)準(zhǔn)B細(xì)胞無凝集，結(jié)果證實患者紅細(xì)胞上含有A抗原。唾液中檢出A、H物質(zhì)，未檢出B物質(zhì)，結(jié)果證實患者為A分泌型。

2.3測序結(jié)果患者ABO基因第6外顯子第261位為G/del雜合，第7外顯子第297位A/A純合、第467位C/T雜合、第526位C/C純合、第657位C/C純合、第703位G/G純合、第796位C/C純合、第803位G/G純合、第930位G/G純合，表明ABO基因型為A102/O01?；颊邷y序發(fā)現(xiàn)FUT1基因第547~552位兩堿基(AG)缺失純合態(tài)，見圖1。

表1　ABO、H、Lewis血型鑒定結(jié)果

圖1　正常對照和類孟買型Ahm分泌型的FUT1基因序列圖

3　討論

類孟買血型是一種罕見的紅細(xì)胞血型表型，其主要特征是紅細(xì)胞表面H抗原部分或完全缺失，而分泌液中存在H物質(zhì)?；颊咭蛘炊ㄐ筒灰恢伦鬟M(jìn)一步檢測時發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞與抗-H血清反應(yīng)陰性，但紅細(xì)胞吸收釋放試驗中能釋放A抗原，唾液中分泌A、H物質(zhì)，證實患者的ABO血型為Ahm分泌型，但紅細(xì)胞上缺乏H抗原。

分子生物學(xué)實驗中患者ABO基因第6、7外顯子的測序結(jié)果也證實含有A基因。文獻(xiàn)報導(dǎo)類孟買型的Lewis血型通常為Le (a-b+)，該患者的Lewis血型也為Le(a-b+)。根據(jù)Race分類患者血型可命名為Ahm[4]。患者FUT1編碼序列測序結(jié)果顯示：α-1，2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因第547～552處的兩個核苷酸AG缺失（CAGAGAG→CAGAG），導(dǎo)致閱讀框架發(fā)生移碼，提前形成終止密碼。本例患者的突變?yōu)轭惷腺I型的常見突變[5]，也與中國香港和臺灣等地的報道完全一致[6，7]。

從輸血安全出發(fā)，為避免誤檢、漏檢，筆者認(rèn)為凡是手工血型鑒定時一定要嚴(yán)格執(zhí)行臨床輸血技術(shù)規(guī)范，ABO正、反定型?？ㄊ蕉ㄑ蜁r，因血型卡中沒有O細(xì)胞孔，應(yīng)同時進(jìn)行抗體篩選。在交叉配血時，應(yīng)警惕除冷抗體外是否存在ABO以外IgM性質(zhì)的血型抗體。通過此次血型鑒定，臨床輸血科實驗室配備抗-H血清試劑以備疑難血型鑒定之需，筆者認(rèn)為是非常有必要的，不僅有利于ABO亞型鑒定[8，9]，也有利于發(fā)現(xiàn)罕見的類孟買血型。

該患者經(jīng)血清學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為類孟買血型后，只有ABO同型的類孟買血液才能交叉配合并輸注，特向省血液中心成功預(yù)約到冰凍庫內(nèi)的A類孟買型血液，確保了手術(shù)的成功。但由于類孟買血型十分罕見，很難找到相同類孟買血型供者，筆者認(rèn)為對于擇期手術(shù)類孟買血型患者如果無法找到相同H抗原缺乏血型血液時，應(yīng)根據(jù)患者的臨床狀況盡量采用貯存式及稀釋式自體輸血。此類患者在無法找到相同H抗原缺乏血型之血液時又需緊急輸血，應(yīng)根據(jù)患者抗-A、抗-B、抗-H的實際情況，選擇37℃與患者血清反應(yīng)最弱的ABO血型同型血液進(jìn)行輸血治療[10]。

參考文獻(xiàn)

[1]Daniels G. Human Blood Groups [M]. 2nd ed. Oxford：Blackwell Science，2002：42-57.

[2]Yan L，Zhu F，Xu X，et al. Molecular basis for para-Bombay phenotypes in Chinese persons，including a novel nonfunctional FUT1 allele[J]. Transfusion，2005，45：725-730.

[3]洪小珍，許先國，朱發(fā)明，等.罕見類孟買型ABhm的鑒定[J].中國輸血雜志，2005，18(1)：8-10.

[4]陳忠，張莉尼.孟買型與類孟買型—附國內(nèi)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中國輸血雜志，1991，4(3)：154.

[5]Chang JG，Yang TY，Liu TP，et al. Molecular analysis of secretor typeα(1，2)-fuscoyltransferase gene mutations in the Chinese and Thai populations[J]. Transfusion，1999，39(9)：1013.

[6]Yip SP，Chee KY，Chan PY，et al. Molecular genetic analysis of para-Bombay phenotypes in Chinese：a novel non-functional FUT1 allele is identified[J]. Vox Sang，2002，83：258-262.

[7]Kaneko M，Nishihara S，Shinya N，et al. Wide variety of point mutations in the H Gene of Bombay and para-Bombay individuals that inactivate H enzyme[J]. Blood，1997，90：839-849.

[8]葛云萍.患者血型初檢錯誤原因分析及對策[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2013，31(3)：274.

[9]周炳能. 29例ABO血型正反定型不一致原因探討[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2010，28(2)：189-190.

[10]孫云，閆芳，范道旺，等. 1例類孟買血型的鑒定和家系調(diào)查及輸血[J].中國輸血雜志，2006，19(6)：491-493.

中圖分類號：R457.1+1，R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0391-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.044

(收稿日期2016-03-09；修回日期2016-04-17)