甘亞宗

摘要：對一例犬細(xì)小病毒病從臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室診斷以及防治措施等方面進(jìn)行了介紹。

關(guān)鍵詞：犬細(xì)小病毒??；診斷；防治

中圖分類號：S858.292 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2016）05-0019-01

犬細(xì)小病毒病是犬的一種具有高度接觸性傳染的烈性傳染病，臨床上以急性出血性腸炎和心肌炎為特征。該病一年四季皆可發(fā)生，以發(fā)病急、病程短、傳染性強(qiáng)、死亡率高為其特點(diǎn)，是危害我國養(yǎng)犬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一[1]。

1 發(fā)病過程及臨床癥狀

2015年12月，一只3月齡幼犬出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、精神萎靡，糞便有明顯血腥味，初步診斷為犬細(xì)小病毒病，對病犬進(jìn)行隔離，進(jìn)一步采用實(shí)驗(yàn)室檢查確診。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

（1）材料：病犬糞便。

（2）主要儀器及試劑：PCR儀、凝膠成像分析儀、電泳儀等；SDS、蛋白酶K、苯酚、氯仿、無水乙醇、dNTPs、TaqDNA聚合酶（購自TaKaRa公司）。

（3）方法[2]。①CPV引物：上游引物，5′- GTACATTTAAATATGCCAGA -3′；下游引物，5′- ATTAATGTTCTATCCCATTG -3′。②病毒總DNA 的抽提：取1 g糞便，加入1 mL PBS液溶解，靜置10 min，12 000 r/min 離心10 min；取上清液500 μL，加入50 μL 的SDS（10%），20 μL蛋白酶K（20 mg/mL），混勻，50 ℃水浴2 h，每20 min 搖勻一次。加入500 μL苯酚混勻，靜置10 min，12 000 r/min離心10 min；取上清，加入等體積苯酚∶氯仿（1∶1），冰浴5 min，4 ℃ 12 000 r/min 離心5 min；取等體積氯仿冰浴5 min，4 ℃ 12 000 r/min離心5 min；取上清加入2.0～2.5 倍的無水乙醇及1/10體積的3 mol/L 的NaAc 混勻，置-20 ℃ 30 min或過夜，同上離心15 min；棄上清，加1 000 μL 75%乙醇，洗滌1 次。晾干EP 管中的DNA，加入30 μL的雙蒸水溶解，-20 ℃保存?zhèn)溆谩＂跴CR 反應(yīng)體系與條件。PCR 反應(yīng)體系：10×PCR Buffer 2.5 μL，dNTPs （2.5 mmol/L）2.0 μL，MgCl2 （25 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（25 pmol/L）各0.5 μL，DNA 模板5.0 μL，TaqDNA聚合酶（5 U/μL）0.2 μL，加H2O 至25 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，45 ℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35 個循環(huán)；末次72 ℃再延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后取7 μLPCR產(chǎn)物在1%的瓊脂糖凝膠上電泳，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察。

（4）結(jié)果判定。采用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖1。利用犬二聯(lián)弱毒苗作為陽性對照，結(jié)果顯示陽性對照（標(biāo)記1）與所檢病料（標(biāo)記3）均擴(kuò)增出470 bp條帶，與預(yù)期的目的條帶大小一致，陰性對照（標(biāo)記2）無任何條帶（圖1）。

3 治療

（1）特異抗體治療：給病犬注射抗犬細(xì)小病毒高免血清。

（2）對癥支持治療：0.9%氯化鈉+VC注射液+VB6注射液+地塞米松注射液（劑量參照說明書）靜脈注射，另5%糖鹽水+氯化鉀注射液+頭孢（劑量參照說明書）靜脈注射。

（3）輔助治療措施：給病犬注射干擾素和黃芪多糖。

經(jīng)過3 d的治療，病犬由每天大便4次減少為2次，糞便也逐漸成型。

4 討論

犬細(xì)小病毒病在臨床多發(fā)，一般情況下，犬細(xì)小病毒病的治療周期為5～7 d，個別犬治療3 d其臨床癥狀基本穩(wěn)定，也有個別病例需要更長時間，在剛開始治療的過程中，部分犬臨床癥狀會逐漸明顯，此時一定要堅(jiān)持用藥，同時也要結(jié)合臨床化驗(yàn)檢查結(jié)果判定有無其他異常，如繼發(fā)感染其他寄生蟲病、病毒病、腸套疊等疾病。

犬細(xì)小病毒病的治療原則主要是對癥支持治療，加上抗犬細(xì)小病毒血清或單克隆抗體等，再配合使用其他藥物，如黃芪多糖、干擾素等廣譜抗病毒和提高機(jī)體抵抗力的藥物來提高治愈率。

在治療的過程中，早期嘔吐頻繁，一般建議要禁食禁水，因?yàn)槿?xì)小病毒對腸腺隱窩的侵害可引起腸絨毛萎縮，造成胃腸黏膜脫落，此時進(jìn)食進(jìn)水會使動物嘔吐加重，造成體液丟失和電解質(zhì)紊亂；同時也會刺激腸胃蠕動、產(chǎn)生胃酸，造成新的損傷；犬患細(xì)小病毒病時，劇烈的嘔吐腹瀉會造成大量體液丟失、電解質(zhì)紊亂和酸堿平衡失調(diào)，治療時糾正酸堿平衡、補(bǔ)充電解質(zhì)和體液會對該病的治療效果產(chǎn)生較大的影響。

參考文獻(xiàn)：

[1] 郭 偉，商曉桂，單同領(lǐng)，等.犬細(xì)小病毒上海分離株全基因的克隆及進(jìn)化樹分析[J].中國動物傳染病學(xué)報(bào)，2009，17（3）：27-32.

[2] 劉雪燕，黃 韌，劉忠華，等.貓腎F81傳代細(xì)胞中犬細(xì)小病毒原位PCR檢測方法[J].中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào)，2001，9（3）：146-149.