何寶佳，錢　麗，魏　蔚

(皖南醫(yī)學(xué)院， 安徽 蕪湖 241000)

?

紅景天不同工藝炮制品中紅景天苷和酪醇含量比較*1

何寶佳，錢麗，魏蔚

(皖南醫(yī)學(xué)院， 安徽 蕪湖 241000)

摘要:本文探討了不同炮制方法對(duì)紅景天中紅景天苷和酪醇含量的影響.方法：以紅景天苷和酪醇含量為指標(biāo)，對(duì)紅景天的不同工藝炮制品進(jìn)行比較；用HPLC法測(cè)定紅景天苷和酪醇的含量.實(shí)驗(yàn)條件：色譜柱：VP-ODS，250L*4.6，7092187；流動(dòng)相為乙腈-水(8：92)；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：224nm;柱溫：25℃；進(jìn)樣量10μL.結(jié)論：紅景天經(jīng)過(guò)不同方法的炮制后，紅景天苷和酪醇含量均有不同程度的升高，尤以紅景天苷含量增加更為顯著，且炮制方法不同，含量有所差別，說(shuō)明不同炮制方法對(duì)紅景天活性成分含量有影響，為實(shí)際應(yīng)用提供很好的理論指導(dǎo).

關(guān)鍵詞:紅景天；紅景天苷；酪醇；炮制；HPLC

飲片炮制工藝是我國(guó)中醫(yī)藥寶庫(kù)的重要組成部分，飲片入藥、生熟異治是中醫(yī)用藥的特色和優(yōu)勢(shì)所在[1].而中藥炮制的研究平臺(tái)的組成核心就是傳統(tǒng)中藥飲片炮制原理、炮制規(guī)范化和飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)方法研究的技術(shù)平臺(tái)[2]，只有對(duì)中藥炮制前后的理化性質(zhì)和藥理的變化有充分的了解，同時(shí)知曉這些變化所具備的臨床意義，才能對(duì)炮制方法作出比較科學(xué)的評(píng)價(jià)，進(jìn)而改進(jìn)炮制工藝[3].然而，到目前為止，絕大多數(shù)的中藥炮制原理仍不清楚.因此，在中醫(yī)藥學(xué)的理論指導(dǎo)下，利用現(xiàn)代知識(shí)技術(shù)可以對(duì)中藥炮制原理進(jìn)行研究，推動(dòng)中醫(yī)炮制理論的發(fā)展，并提高中藥的臨床使用價(jià)值.

紅景天是景天科多年生草木或灌木植物[4]，生長(zhǎng)在海拔800～2500m高寒無(wú)污染地帶.由于其生長(zhǎng)環(huán)境惡劣，如缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、受紫外線照射、晝夜溫差大，因而具有很強(qiáng)的生命力和特殊的適應(yīng)性,為亞洲地區(qū)常用傳統(tǒng)藥材，能夠補(bǔ)氣清肺，益智養(yǎng)心，具有刺激神經(jīng)系統(tǒng)、增加工作效率、消除疲勞和預(yù)防高山癥等作用,亦有很好的美容效果，可做護(hù)膚品，也可食用.民間常用來(lái)煎水或泡酒，以消除勞累或抵抗山區(qū)寒冷.同時(shí)還具有防病健體和滋補(bǔ)益壽等作用.

隨著人體逐漸衰老，人的免疫力不斷下降，紅景天的適應(yīng)原樣作用能提升肌體對(duì)有害刺激的非特異性抵抗力，加強(qiáng)肌體的適應(yīng)性.同時(shí)，紅景天能迅速提高血紅蛋白與氧的結(jié)合能力，提高血氧飽和度，降低機(jī)體的耗氧量，增加運(yùn)動(dòng)耐力，恢復(fù)運(yùn)動(dòng)后疲勞，具有極大的抗氧化作用.研究指出，氧化作用在很多疾病的發(fā)展過(guò)程扮演著十分重要的角色，例如癌癥、心血管病、糖尿病、神經(jīng)退化及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等.總之，紅景天作為近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的適應(yīng)原樣補(bǔ)益藥，在國(guó)外已進(jìn)行了較為深入的研究，前蘇聯(lián)保健部藥理委員會(huì)將紅景天列為人參型興奮劑及“適應(yīng)原”樣藥，臨床應(yīng)用于抗疲勞、提高體力和腦力勞動(dòng)功能、神經(jīng)官能癥、張力減退綜合征、糖尿病和貧血等病癥.目前，國(guó)內(nèi)對(duì)紅景天的研究還遠(yuǎn)不及對(duì)人參、刺五加等研究得那么透徹、深入，對(duì)其有效成分的研究也僅限于紅景天苷及其苷元的研究.張立海[5]等研究指出,不同來(lái)源以及不同炮制方法的女貞子中紅景天苷含量存在差異,本研究以紅景天苷和酪醇含量為指標(biāo)，通過(guò)反相高效液相色譜法對(duì)紅景天加黃酒的不同工藝炮制品進(jìn)行比較[6]，為探討紅景天炮制機(jī)理，優(yōu)化紅景天炮制工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1儀器設(shè)備與試劑

1.1儀器

UV-2501PC紫外分光光度計(jì)(日本島津)；高效液相色譜儀：系統(tǒng)控制器(CBM-20Alite)、泵A(LC-20AT)、柱溫箱(CTO-10ASvp)、PDA檢測(cè)器(SPD-M20A);分析天平(感量：0.0001g)；超聲波清洗器(KQ5200E，昆山市超聲儀器有限公司)；真空壓力泵(DP-01).

1.2試劑及材料

紅景天藥材飲片(1kg)購(gòu)自蕪湖市張恒春大藥房，產(chǎn)地為新疆，批號(hào)為130401，生產(chǎn)日期為2013年4月；紅景天苷(大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為20140326)；酪醇對(duì)照品(大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為A1015AS)；高效液相用乙腈、甲醇(均為色譜純)；黃酒；怡寶礦泉水.

1.3樣品的制備

生品：取紅景天原材料烘干樣品.

紅景天酒燉品：取凈紅景天干燥樣品50g置100mL燒杯中，加入黃酒、水拌勻，密封悶潤(rùn)，轉(zhuǎn)移至不銹鋼盒中，放入鍋屜，用蒸汽加熱燉制，取出放涼，烘箱中50℃烘干，取出放涼，塑料袋密封，分別得到1-9號(hào)酒蒸品，具體操作方法如表1：

表1　樣品炮制工藝

2測(cè)定方法及結(jié)果

2.1水分含量測(cè)定

取各樣品粉末25g，按《中國(guó)藥典》酒蒸品2005年版一部附錄IXH水分測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果生品為7.37%、酒蒸品1為8.34%、酒蒸品2為8.48%、酒蒸品3為8.85%、酒蒸品4為7.92%、酒蒸品5為8.44%、酒蒸品6為8.65%、酒蒸品7為8.68%、酒蒸品8為8.98%、酒蒸品9為8.46%.

2.2紅景天苷和酪醇含量測(cè)定

(1)對(duì)照品溶液的制備.精密稱量紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品5.000mg和酪醇標(biāo)準(zhǔn)品5.000mg分別至10mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，待冷至室溫后，定容至刻度，搖勻，分別得0.5mg/mL的紅景天苷對(duì)照品溶液和0.5mg/mL酪醇對(duì)照品溶液，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即為對(duì)照品溶液；分別精密吸取紅景天苷和酪醇對(duì)照品溶液各5mL，混勻，即得紅景天苷與酪醇對(duì)照品混合液.

(2)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇.分別吸取紅景天苷對(duì)照品溶液和酪醇對(duì)照品溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紅景天苷在224.2nm處有最大吸收，酪醇在224.6nm處有最大吸收，由此確定224nm為檢測(cè)波長(zhǎng).

(3)色譜條件.色譜柱：VP-ODS，250L*4.6，7092187 ;流動(dòng)相為甲醇-水(8：92)；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：224nm;柱溫：25℃進(jìn)樣量10μL.

(4)線性關(guān)系考察.精密吸取紅景天苷和酪醇對(duì)照品混合液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積.以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，紅景天苷的線性范圍為0.25～2.5μg，回歸方程是Y=924156X-21798，r=0.9998，如圖1所示；酪醇的線性范圍為0.25～2.5μg 回歸方程是Y=2*106X+431.05，r=0.9996，如圖2所示.

圖1　紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

(5)供試品溶液的制備.精密稱取各樣品粉末約1.0g，置于50mL容量瓶中，加少量甲醇溶解，超聲處理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45nm微孔濾膜過(guò)濾后即得(每1mL相當(dāng)于原藥材0.02g).

圖2　酪醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

(6)精密度實(shí)驗(yàn).取酒蒸品2供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,計(jì)算紅景天苷的RSD=1.49%,酪醇的RSD=1.55%,表明儀器精密度良好.

(7)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).取酒蒸品2供試品溶液,在室溫下自然放置,分別在0h、2h、4h、6h、8h、12h進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明，紅景天苷的RSD=1.34%,酪醇的RSD=1.32%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定.

(8)重復(fù)性實(shí)驗(yàn).取酒蒸品3,平分6份,按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定,結(jié)果表明，紅景天苷的RSD=1.56%,酪醇的RSD=1.89%,表明測(cè)定方法重復(fù)性良好.

(9)加樣回收率實(shí)驗(yàn).取酒蒸品2,共6份,各約0. 2 g,精密稱定,分別精密加入紅景天苷和酪醇對(duì)照品混合溶液各0. 75 mL,再精密加入30%乙醇至4mL,按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2、表3.

表2　紅景天苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3　酪醇加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

(10)樣品測(cè)定.取各供試品溶液，用0.45nm濾膜過(guò)濾，分別取濾液20μL注入高效液相色譜儀，即含有原材料0.4μg/20μL(每1μL相當(dāng)于原藥材0.02μg)，測(cè)定峰面積，色譜圖見(jiàn)圖3-6，

圖3　紅景天苷和酪醇混合液HPLC圖

圖4　紅景天生品HPLC圖

圖5　炮制品4的HPLC圖

圖6　炮制品5的HPLC圖

按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中紅景天苷和酪醇的含量見(jiàn)表4和表5.

表4　紅景天苷及酪醇含量測(cè)定結(jié)果

3結(jié)論

以紅景天苷和酪醇含量為指標(biāo),對(duì)紅景天不同工藝炮制品進(jìn)行比較.測(cè)定了紅景天生品及炮制品中紅景天苷和酪醇的含量，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行比較，由結(jié)果可知，紅景天經(jīng)不同方法炮制后的紅景天苷和酪醇含量均有不同程度的變化，紅景天苷含量由多到少的順序?yàn)椋壕普羝?，酒蒸品5，酒蒸品8，生品，酒蒸品4，酒蒸品3，酒蒸品1，酒蒸品7，酒蒸品9，酒蒸品6，通過(guò)與生品的對(duì)比，酒蒸品2、酒蒸品5、酒蒸品8的紅景天苷含量升高，其中酒蒸品2升高最為明顯，其紅景天苷含量達(dá)到了0.566018%,即加黃酒用量20%+水用量10%、悶潤(rùn)2h、燉制8h的炮制品中紅景天苷含量最高；酒蒸品1、3、4、6、7、9中測(cè)得的紅景天苷含量比生品要低；酪醇的含量由多到少的順序?yàn)? 酒蒸品8，酒蒸品4，酒蒸品5，酒蒸品3，酒蒸品9，酒蒸品7，酒蒸品2，酒蒸品1，酒蒸品6，生品，經(jīng)過(guò)黃酒炮制后的酪醇含量均升高，且酒蒸品8的酪醇含量最高，酪醇含量達(dá)到了0.782044%，即加黃酒用量30%+水用量10%、悶潤(rùn)1h、燉制10h的炮制品中酪醇含量最高.

在實(shí)際運(yùn)用中可根據(jù)需要來(lái)選擇不同的炮制工藝,若重點(diǎn)在于紅景天苷的含量,則選用酒蒸品2的炮制方法來(lái)制作炮制品,即加黃酒用量20%+水用量10%、悶潤(rùn)2h、燉制8h加工而成;若需要酪醇含量較高,則選用酒蒸品8的炮制方法來(lái)制作, 即加黃酒用量30%+水用量10%、悶潤(rùn)1h、燉制10h加工而成；綜合來(lái)看,選用酒蒸品8的炮制工藝可以同時(shí)得到相對(duì)較高含量的紅景天苷和酪醇.

參考文獻(xiàn)：

[1]周瑩.制定飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)飲片生產(chǎn)規(guī)范[J].中藥研究與信息，2001,3(1):23-24.

[2]肖永慶，張村，李麗.中藥炮制學(xué)科學(xué)展望[J].中華中醫(yī)藥雜志,2009(10).

[3]楊家駒.古今中藥炮制經(jīng)驗(yàn)[M].長(zhǎng)沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社, 1991: 144.

[4]魏志莉.紅景天的生理特點(diǎn)及保健功能[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2011(12).

[5]張立海，宋友華，孫春華等.反相高效液相色譜法測(cè)定女貞子中紅景天苷的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2001,36(11):760-761.

[6]胡海英，楊麗嘉，胡海云，李繼成.不同產(chǎn)地紅景天藥材中紅景天苷含量的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(19).

(責(zé)任編輯:王海波)

Comparison between Rhodioloside Content and Tyrosol Content in Different Processed Products of Rhodiola rosea

HE Bao-jia,QIAN Li,WEI Wei

(WannanMedicalCollege,Wuhu,Anhui241000,China)

Abstract:This paper discusses the effect of different processing methods to Rhodioloside content and Tyrosol content in the Rhodiola rosea. Methods: With Rhodioloside content and Tyrosol content as an index, comparing the different processed products of Rhodiola rosea; using HPLC method to determine the Rhodioloside content and Tyrosol content. Experimental conditions: The chromatographic column: VP- ODS, 250L*4.6, 7092187; Mobile phase is Acetonitrile-water(8：92); the flow rate is 1.0 mL/min; determine wavelength is 224 nm; column temperature is 25 ℃, sample size is 10μL. Conclusion: After different methods of processing, the Rhodioloside content and Tyrosol content have varying degrees of increase, especially the Rhodioloside content increased more significantly, with different processing methods, the contents are different, so the different processing methods have influence on the active ingredient content of the Rhodiola rosea, which provide a good theoretical guidance for practical applications.

Key words:Rhodiola rosea; Rhodioloside; Tyrosol; processing; HPLC

DOI:10.13877/j.cnki.cn22-1284.2016.04.015

*收稿日期：2015-11-10

基金項(xiàng)目：皖南醫(yī)學(xué)院中青年科研基金項(xiàng)目“紅景天炮制前后主要有效活性成分變化規(guī)律研究及急性毒理研究”(WK201418)；皖南醫(yī)學(xué)院中青年科研基金項(xiàng)目“敗醬草中總黃酮微波萃取工藝正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化及其體外抗氧化活性研究”(WK201411)；安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目“石墨烯-Nafion復(fù)合膜修飾玻碳電極測(cè)定氧氟沙星”(AH201410368120)；2015年安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目“紅景天炮制前后主要有效成分變化規(guī)律研究及急性毒理研究”( 201510368111)；2015年安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目“敗醬草中總黃酮微博萃取工藝正交試驗(yàn)優(yōu)化及其體外抗氧化活性研究”( 201510368117)

作者簡(jiǎn)介：何寶佳，女，吉林長(zhǎng)春人，皖南醫(yī)學(xué)院教師.

通訊作者：魏蔚，吉林長(zhǎng)春人，皖南醫(yī)學(xué)院教師.

中圖分類號(hào)：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1008-7974(2016)02-0046-04