張 娟， 陳建武， 張棟梁， 余 州， 宋雅娟， 陳 琳， 王映梅， 宋保強(qiáng)

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實(shí)驗(yàn)研究

一種新型兔肌皮瓣帶蒂移植模型

張 娟， 陳建武， 張棟梁， 余 州， 宋雅娟， 陳 琳， 王映梅， 宋保強(qiáng)

目的 通過在兔腹部復(fù)制缺損創(chuàng)面并于創(chuàng)基放置硅膠墊片，用背闊肌肌皮瓣帶蒂移植進(jìn)行修復(fù)，構(gòu)建一種新型的肌皮瓣帶蒂移植模型。方法 采用新西蘭大耳白兔20只，在兔腹部設(shè)計(jì)軟組織缺損創(chuàng)面約6.0 cm×8.0 cm，創(chuàng)基覆蓋硅膠墊片，背闊肌肌皮瓣帶蒂轉(zhuǎn)移修復(fù)腹部創(chuàng)面。按移植術(shù)后時(shí)間的不同進(jìn)行分組，每組5只。觀察肌皮瓣的大體存活情況、肌纖維的組織病理學(xué)改變及肌瓣中微血管密度的改變。結(jié)果 大體觀察各組肌皮瓣均存活良好，無皮瓣壞死，取材時(shí)見肌肉外觀紅潤。HE及Masson染色結(jié)果顯示各組肌纖維形態(tài)良好。各組間微血管計(jì)數(shù)6周>5周>4周>3周，各組內(nèi)微血管計(jì)數(shù)近端>中段>遠(yuǎn)端，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 以胸背血管為蒂的兔背闊肌肌皮瓣移植修復(fù)腹部創(chuàng)面是一種理想的肌皮瓣移植模型，適用于藥物、細(xì)胞及血運(yùn)重建等實(shí)驗(yàn)研究。

肌皮瓣帶蒂移植; 動物模型; 血運(yùn)重建

肌皮瓣移植是整形外科常用的修復(fù)手段之一，其具有血運(yùn)豐富，抗感染能力強(qiáng)，攜帶的組織量多，帶運(yùn)動神經(jīng)的肌皮瓣可用于功能重建[1]等優(yōu)點(diǎn)，常用于修復(fù)各種軟組織缺損，特別是深而大的缺損以及局部血液循環(huán)差而較難愈合的創(chuàng)面，如慢性潰瘍、放射性潰瘍、壓瘡、慢性骨髓炎等感染創(chuàng)面[2-4]。既往有關(guān)肌皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究多采用鼠或豬腹直肌、股薄肌肌皮瓣移植模型[5-7]，且多用于原位移植或異體移植。近年來也有研究采用豬腹壁下動脈穿支肌皮瓣移植模型[8]。自2015年6月，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科構(gòu)建了兔背闊肌肌皮瓣帶蒂移植模型，具有解剖位置恒定、移植組織量大、實(shí)驗(yàn)動物易獲取等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

隨機(jī)選取清潔級雄性新西蘭大耳白兔20只(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，體質(zhì)量2.2～2.5 kg，同等條件單籠飼養(yǎng)。按肌皮瓣移植術(shù)后時(shí)間將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為4組，3周組、4周組、5周組、6周組，每組5只。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉，3～5 ml/kg，Na2S脫毛(范圍左側(cè)胸部至后正中線、腹部)。

1.2.1 剝離帶蒂背闊肌肌皮瓣 將實(shí)驗(yàn)動物取俯臥位，于左側(cè)背闊肌遠(yuǎn)端設(shè)計(jì)肌皮瓣面積約6.0 cm×8.0 cm，利多卡因局部浸潤麻醉后，沿標(biāo)記線依次切開皮膚、皮下筋膜及肌肉組織，保留蒂部周圍約2.0 cm組織；向上掀起皮瓣，沿血管走行解剖胸背血管(動、靜脈)至腋窩后壁，盡可能去除血管周圍組織，形成背闊肌島狀肌皮瓣，蒂長3.0～4.0 cm，檢查肌皮瓣血運(yùn)是否良好。

1.2.2 構(gòu)建腹部創(chuàng)面 將實(shí)驗(yàn)動物取仰臥位，于腹部亞甲藍(lán)標(biāo)記受區(qū)創(chuàng)面約7.0 cm×9.0 cm，局部注射利多卡因浸潤麻醉，然后依次切開皮膚、皮下組織，去除皮膚、皮下淺筋膜及肌肉組織，形成創(chuàng)面。于創(chuàng)面基底部覆蓋一面積與創(chuàng)面大小相同的硅膠墊片，縫合固定于創(chuàng)基，創(chuàng)緣皮內(nèi)縫合固定于創(chuàng)基。

1.2.3 移植背闊肌肌皮瓣 于腋窩頂部皮下肌肉層表面剝離至創(chuàng)面，形成一隧道與腋窩相通，將帶蒂肌皮瓣沿隧道轉(zhuǎn)移至腹部創(chuàng)面，注意勿將血管蒂扭轉(zhuǎn)，檢查肌皮瓣血運(yùn)是否良好，5-0絲線全層縫合皮膚、肌肉；供區(qū)4-0絲線分層間斷縫合。術(shù)后于肌肉注射青霉素鈉80萬 U，1次/d，持續(xù)用藥1周。

1.3 術(shù)后監(jiān)測

采用一般臨床監(jiān)測法，對移植肌皮瓣顏色、組織腫脹程度、毛細(xì)血管充盈反應(yīng)等進(jìn)行監(jiān)測并記錄。

1.4 組織病理學(xué)檢查

術(shù)后3、4、5、6周，采用空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)動物，于移植肌皮瓣近、中、遠(yuǎn)端進(jìn)行取材，取材的深度為硅膠墊片上所有組織，即移植肌皮瓣全層，行HE染色、Masson染色、免疫組化CD31抗體染色。

1.5 微血管計(jì)數(shù)

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

術(shù)后當(dāng)日部分肌皮瓣出現(xiàn)靜脈淤血現(xiàn)象，皮瓣淤紫，毛細(xì)血管充盈反應(yīng)加快，肌皮瓣稍腫脹；術(shù)后1 d淤血現(xiàn)象明顯減輕，充血反應(yīng)正常，腫脹明顯減輕；術(shù)后2 d肌皮瓣與周圍組織顏色大體相同。至取材時(shí)各組肌皮瓣均存活良好，表面未見變黑、水皰等，無肌皮瓣壞死現(xiàn)象，毛發(fā)生長良好，部分肌皮瓣萎縮明顯，其面積明顯低于術(shù)前。

2.2 HE染色

取材時(shí)肉眼觀移植肌皮瓣腹面與硅膠墊片間有纖維隔膜形成，肌肉組織形態(tài)可。HE染色各組均可見紅染的肌肉組織，且近端組肌纖維的形態(tài)更優(yōu)于遠(yuǎn)端。3周組見大量炎細(xì)胞浸潤，肌纖維大小基本一致，細(xì)胞核呈長橢圓形，位于細(xì)胞周邊部，橫紋清晰可見，纖維間結(jié)締組織增生；4周組見炎癥明顯減輕，肌纖維大小基本一致，纖維間結(jié)締組織增生；5周組肌纖維粗細(xì)較一致，血管結(jié)構(gòu)正常，未見炎細(xì)胞浸潤，肌纖維間見脂肪空泡；6周組見肌纖維形態(tài)可，粗細(xì)一致，纖維間未見炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管管腔形成。

2.3 Masson染色

各組均可見著色呈紅色或藍(lán)色的肌肉組織，且近端組較遠(yuǎn)端組偏紅。3周組肌纖維破碎不清，橫紋隱約可見，大部分肌纖維顏色變淺，肌纖維間脂肪組織代償增生，可見不典型肌巨細(xì)胞，近端肌纖維呈紅色，中段肌纖維呈藍(lán)紫色偏藍(lán)色，遠(yuǎn)端肌纖維呈藍(lán)紫色，藍(lán)色著色更深；4周組肌纖維形態(tài)優(yōu)于3周組，肌纖維著偏紅色，遠(yuǎn)端肌纖維呈藍(lán)紫色；5周組肌纖維形態(tài)優(yōu)于4周組，肌纖維著色偏紅色；6周組近端肌纖維呈紅色，中段肌纖維部分呈藍(lán)紫色，遠(yuǎn)端肌纖維呈藍(lán)紫色偏紅色(圖1)。

2.4 微血管計(jì)數(shù)

各組組化結(jié)果均可見著棕黃色的管狀血管結(jié)構(gòu)，多位于皮下、肌纖維間結(jié)締組織中，但各組間血管分布情況明顯不同。 3周組微血管計(jì)數(shù)近、中、遠(yuǎn)端分別為6.00±1.67、4.20±0.40、3.00±0.60；4周組分別為7.80±0.74、4.80±0.75、3.80±0.40；5周組分別為11.20±0.75、7.80±0.76、5.20±0.74；6周組分別為13.40±1.36、10.60±0.49、8.20±0.75，各組間微血管計(jì)數(shù)6周>5周>4周>3周，各組內(nèi)近端>中段>遠(yuǎn)端，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。說明肌皮瓣移植術(shù)后，血運(yùn)重建由周圍向中間逐漸生長直至完成。

圖1 背闊肌肌皮瓣帶蒂移植術(shù)后(Masson ×400，從左至右依次為肌皮瓣近、中、遠(yuǎn)端) a. 3周組 b. 4周組 c. 5周組 d. 6周組

Fig 1 Masson staining after pedicled latissimus dorsi musculocutaeous flap transplantation (Masson ×400, there are proximal, middle and distal from left to right). a. group at 3 weeks. b. group at 4 weeks c. group at 5 weeks. d. group at 6 weeks.

圖2 背闊肌肌皮瓣帶蒂移植微血管計(jì)數(shù)

Fig 2 Micro vessel density of transferred pedicled latissimus dorsi musculocutaneous flap.

3 討論

肌皮瓣是一種復(fù)合組織瓣，即利用身體某塊肌肉或一部分肌肉，連同其淺層的皮膚和皮下組織一并切取轉(zhuǎn)移移植[9]。其具有血運(yùn)豐富，抗感染能力強(qiáng)，攜帶的組織量多，可用于填補(bǔ)大而深的缺損創(chuàng)面，以及帶運(yùn)動神經(jīng)的肌皮瓣可用于功能重建[1]等優(yōu)點(diǎn)，常用于修復(fù)各種軟組織缺損，特別是深而大的缺損以及局部血液循環(huán)差而較難愈合的創(chuàng)面，如慢性潰瘍、放射性潰瘍、壓瘡、慢性骨髓炎等感染創(chuàng)面[2-4]。這些創(chuàng)面往往存在創(chuàng)基血運(yùn)不良、創(chuàng)面感染嚴(yán)重等情況。我們所建立的模型通過在腹部創(chuàng)基覆蓋硅膠墊片，限制基底部的血運(yùn)重建，模擬一個(gè)創(chuàng)基血運(yùn)不良的微環(huán)境，符合臨床上肌皮瓣移植創(chuàng)基條件，研究條件更貼近臨床實(shí)際。

背闊肌肌皮瓣是人體可供游離移植或帶蒂移植范圍最廣的皮瓣之一，其血管蒂的解剖位置恒定，可移植的組織量大，是整形外科較常選用的移植皮瓣之一[10-13]。既往有關(guān)肌皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究，多采用鼠、豬腹直肌、股薄肌肌皮瓣移植模型[5-7]。Gundeslioglu等[14]采用大鼠背部肌皮瓣模型用于肌皮瓣斷蒂的研究，其設(shè)計(jì)肌皮瓣面積為1.5 cm×2.5 cm；Leto等[5]采用豬股薄肌肌皮瓣移植模型用于復(fù)合組織移植的研究，其設(shè)計(jì)皮瓣面積為12.0 cm×15.0 cm。近年來也有采用豬腹壁下動脈穿支肌皮瓣移植模型[8]。鼠模型容易獲得，但移植皮瓣面積相對較??；豬模型移植皮瓣面積大，但費(fèi)用相對較高。我們以新西蘭大耳白兔為模型動物，既避免了鼠模型移植面積過小，又避免了豬模型實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)較高的情況。

肌皮瓣移植術(shù)后早期主要依靠蒂部血管供血，直至與周圍組織和基底部間血運(yùn)完全建立[14]。臨床上肌皮瓣移植術(shù)后，斷蒂時(shí)間一般為3～5周[15]。為了驗(yàn)證該模型的可行性，我們將實(shí)驗(yàn)動物按移植時(shí)間不同分組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，肌皮瓣帶蒂移植修復(fù)創(chuàng)基覆蓋硅膠墊片創(chuàng)面是可行的。該模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：供血血管胸背血管解剖位置恒定，容易制備；背闊肌肌皮瓣可供移植的組織量大，面積約8.0 cm×6.0 cm；實(shí)驗(yàn)動物容易獲取，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)；符合臨床實(shí)際所需，背闊肌肌皮瓣的使用率高，且有效模擬臨床實(shí)際。

綜上所述，以胸背血管為蒂的兔帶蒂背闊肌肌皮瓣移植模型具有解剖位置恒定、容易制備、符合臨床實(shí)際等優(yōu)點(diǎn)，是一種良好的肌皮瓣移植模型，可用于藥物、細(xì)胞及血運(yùn)重建等實(shí)驗(yàn)研究。

[1] Park CW, Kim YH, Hwang KT, et al. Reconstruction of a severely crushed leg with interpositional vessel grafts and latissimus dorsi flap[J]. Arch Plast Surg, 2012,39(4):417-421.

[2] 裴 蓓. L形腹直肌肌皮瓣再造乳房的臨床價(jià)值[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2016,29(3):351-352,353.

[3] 薛兵建. 橫形股薄肌肌皮瓣在乳房再造中的應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J]. 組織工程與重建外科雜志, 2015,11(6):396-399.

[4] 藍(lán)小林, 張相民, 羅克勍. 胸大肌肌皮瓣修復(fù)頭頸部術(shù)后組織缺損[J]. 當(dāng)代醫(yī)學(xué), 2015,21(3):374.

[5] Leto BA, Leonard DA, Torabi R, et al. The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research[J]. Microsurgery, 2013,33(1):51-55.

[6] Villamaria CY, Rasmussen TE, Spencer JR, et al. Microvascular porcine model for the optimization of vascularized composite tissue transplantation[J]. J Surg Res, 2012,178(1):452-459.

[7] Sitzman TJ, Hanson SE, King TW, et al. Detection of flap venous and arterial occlusion using interstitial glucose monitoring in a rodent model[J]. Plast Reconstr Surg, 2010,126(1):71-79.

[8] Minqiang X, Jie L, Dali M, et al. Hemodynamic effect of different kinds of venous augmentation in a pig transmidline flap model of DIEP flap[J]. J Reconstr Microsurg, 2013,29(6): 379-386.

[9] Tobalem M, Wettstein R, Pittet-Cuenod B, et al. Local shockwave-induced capillary recruitment improves survival of musculocutaneous flaps[J]. J Surg Res, 2013,184(2):1196-1204.

[10] van Huizum MA, Hage JJ, Rutgers EJ, et al. Immediate breast reconstruction with a myocutaneous latissimus dorsi flap and implant following skin-sparing salvage mastectomy after irradiation as part of breast-conserving therapy[J]. J Plast Reconstr Aesthet Surg, 2016,69(8):1080-1086.

[11] 陳福平, 李 林, 吳 敏, 等. 攜帶小穿支皮瓣的背闊肌肌瓣移植與鈦網(wǎng)聯(lián)合應(yīng)用修復(fù)巨大頭皮、顱骨雙重缺損[J]. 中國美容整形外科雜志, 2015,26(1):37-39.

[12] 宋振濤, 張 博, 陳冬梅. 擴(kuò)張后背闊肌肌皮瓣修復(fù)乳房瘢痕攣縮[J]. 中國美容整形外科雜志, 2014,25(4):219-220.

[13] 盛 輝, 田恒進(jìn), 靖樹林, 等. 改良背闊肌肌皮瓣游離修復(fù)軟組織缺損的臨床應(yīng)用[J]. 中國美容整形外科雜志, 2014,25(11):651-653.

[14] Gundeslioglu AO, Selimoglu N, Toy H, et al. Neo-vascularisation of musculocutaneous and muscle flaps after division of the major vascular supply: an experimental study[J]. J Plast Reconstr Aesthet Surg, 2013,66(7):978-986.

[15] Enajat M, Rozen WM, Whitaker IS, et al. How long are fasciocutaneous flaps dependant on their vascular pedicle: a unique case of SIEA flap survival[J]. J Plast Reconstr Aesthet Surg, 2010,63(4):e347-e350.

Establishment of a new animal model with pedicled musculocutaneous flap

ZHANGJuan,CHENJian-wu,ZHANGDong-liang,YUZhou,SONGYa-juan,CHENLin,WANGYing-mei,SONGBao-qiang.

(InstituteofPlasticSurgery,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi′an710032,China)

SONGBao-qiang,Email:songbq1@163.com

Objective To reconstruct a new type of musculocutaneous flap pedicle graft by replanting the defect in the abdomen of rabbits and placing silicone gaskets in the wound. Methods Twenty New Zealand rabbits were chosen randomly as experimental animals. A 6.0 cm×8.0 cm abdominal wound area was designed in rabbit abdomen and covered with silicon gasket in the surface of the wound to simulate poor blood circulation, and the latissimus dorsi muscle flap pedicled to repair the abdominal wound. The animals were randomly divided into 4 groups according to the transplantation time, 5 rabbits in each group. Musculocutaneous flap survival rate, histopathological changes of muscle fibers and micro vessel density changes in the musculocutaneous flap were evaluated. Results All musculocutaneous flaps in all four groups survived well. There was no flap necrosis and the muscular tissue appeared ruddy. HE and Masson staining show that the morphology of the muscle fiber is sound. The micro vessel density was different between groups (6 w>5 w>4 w>3 w) and in each group (proxim-al>middle>distal), the difference was statistically significant. Conclusion Thoracodorsal artery pedicled rabbit latissimus dorsi musculocutaneous flap transplantation was a feasible model for musculocutaneous flap transplantation. This model will be especially suitable in the experimental study of drugs, cells and neovascularization.

Pedicled latissimus dorsi musculocutaneous flap transplantation; Animal model; Revascularization

710032 陜西 西安,第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院 (整形外科：張 娟，陳建武，張棟梁，余 州，宋雅娟，陳 琳，宋保強(qiáng)； 病理科：王映梅) 第一作者：張 娟(1987-)，女，四川人，主治醫(yī)師，碩士研究生. 通信作者：宋保強(qiáng)，710032，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院 整形外科，電子信箱：songbq1@163.com

10.3969/j.issn.1673-7040.2016.12.014

R

A

1673-7040(2016)12-0748-04

2016-07-14)