李　晶，吳　清，李渤南（.煙臺綠葉動物保健品有限公司，山東煙臺64003；.煙臺市畜牧獸醫(yī)工作站，山東煙臺6400）

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復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液的解熱鎮(zhèn)痛藥效試驗(yàn)

李晶1，吳清1，李渤南2
（1.煙臺綠葉動物保健品有限公司，山東煙臺264003；2.煙臺市畜牧獸醫(yī)工作站，山東煙臺264001）

摘要：為了考察復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液的解熱鎮(zhèn)痛效果，方法一：選取基礎(chǔ)體溫正常的健康新西蘭兔，除空白對照組外，其余各組均靜脈注射60 EU/kg體重的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行致熱，致熱成功后開始給藥，觀察藥物對發(fā)熱新西蘭兔的解熱效果；方法二：選取正常小鼠，各組于給藥后30 min腹腔注射0.5%的冰醋酸溶液0.2 mL，注射后立即觀察1 5min內(nèi)小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，計(jì)算扭體反應(yīng)的抑制率。結(jié)果表明：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液起效快，作用時間長，對細(xì)菌內(nèi)毒素所致新西蘭兔發(fā)熱的解熱效果和對醋酸所致小鼠的鎮(zhèn)痛效果，均優(yōu)于對乙酰氨基酚注射液。

關(guān)鍵詞：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液；解熱；鎮(zhèn)痛

復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液（Compound Dielofe?nae Sodium injection），是由雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚組成的復(fù)方制劑，為強(qiáng)效的獸用解熱鎮(zhèn)痛藥物。其中，雙氯芬酸鈉為苯基乙酸衍生物，通過抑制體內(nèi)環(huán)氧化酶途徑而抑制花生四烯酸的合成，從而起到解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用；特點(diǎn)為藥效強(qiáng)、不良反應(yīng)輕、劑量小、個體差異小。對乙酰氨基酚是臨床上最常用的解熱鎮(zhèn)痛藥之一，其特點(diǎn)是解熱作用強(qiáng)大，適用于緩解發(fā)熱和輕度至中度疼痛癥狀，但該品服用劑量較大，若長期或超劑量服用，有引發(fā)肝腎損害的危險。兩藥具有協(xié)同作用，可以減少臨床用藥劑量，降低不良反應(yīng)并增強(qiáng)療效[1-4]。

解熱鎮(zhèn)痛藥的藥理藥效學(xué)研究中，用于制造動物發(fā)熱模型的方法很多，其中新西蘭兔靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素致熱法升溫快、持續(xù)時間短，適于觀察藥物的解熱作用[5]；“扭體反應(yīng)”是給小鼠腹腔注射醋酸溶液等所引起的一種刺激腹膜的持久性疼痛，且間歇發(fā)作的運(yùn)動反應(yīng)，表現(xiàn)為腹部收縮、內(nèi)凹、腹前壁緊貼籠底、臀部歪扭和后肢伸張，呈一種特殊姿勢，常用作篩選鎮(zhèn)痛藥的方法[1-3]。

1　材料

1.1試驗(yàn)儀器電子計(jì)重秤，上海三積分電子有限公司；漩渦混合儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)，METTLER TOLEDO；ZRY-2D智能熱原儀，天津市天大天發(fā)科技有限公司；注射器等。

1.2試驗(yàn)試劑細(xì)菌內(nèi)毒素生物指示劑，規(guī)格：5 000 EU/支，批號：20120504，湛江安度斯生物有限公司；氯化鈉，規(guī)格：500 g，批號：20130528，天津市天大化工實(shí)驗(yàn)廠；氫氧化鈉，規(guī)格：500 g，批號：20131218，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫鉀，規(guī)格：500 g，批號：F20130608，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；冰醋酸，規(guī)格：500 mL，批號：20140831，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3試驗(yàn)藥品受試藥物：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液，規(guī)格：5 mL：雙氯芬酸鈉0.125 g+對乙酰氨基酚0.75 g，批號：140114，由煙臺綠葉動物保健品有限公司提供。對照藥物：對乙酰氨基酚注射液，規(guī)格：10 mL：1 g，批號：130114，江西金康佳生化藥業(yè)有限公司；雙氯芬酸鈉注射液，規(guī)格：100 mL：5 g，批號：140115，由煙臺綠葉動物保健品有限公司生產(chǎn)。

1.4實(shí)驗(yàn)動物健康新西蘭兔，普通級，體重2.0～3.0 kg，雌雄不限，購自青島康大生物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）2012 0005；昆明系小鼠，潔凈級，雌雄各半，體重20 g左右，購自山東綠葉制藥有限公司實(shí)驗(yàn)動物中心，《實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證》許可證號：SCXK（魯）2014 0002。

2　方法

2.1家兔解熱試驗(yàn)試驗(yàn)前3 d，將新西蘭兔置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中模擬實(shí)驗(yàn)操作（包括捉拿、固定、安放智能熱原儀的測溫探頭等），以使其適應(yīng)試驗(yàn)條件，每天用智能熱原儀檢測體溫，取3 d體溫平均值作為基礎(chǔ)體溫，選取基礎(chǔ)體溫在38.5℃～39.5℃的新西蘭兔進(jìn)行正式試驗(yàn)。

表1　試驗(yàn)分組及處理　（±S，n=6）

表1　試驗(yàn)分組及處理?。ā繱，n=6）

注：（1）各組新西蘭兔隨機(jī)分配，體重差異不顯著（P>0.05），平均基礎(chǔ)體溫差異不顯著（P>0.05）；（2）1：空白對照組，2：模型對照組，3：對乙酰氨基酚注射液對照組，4：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液組

組別　動物數(shù)　平均體重　平均基礎(chǔ)　是否　給藥　給藥（只）?。╧g）　體溫（℃）　攻毒　劑量　方式1　6　2.60±0.14 38.94±0.35　否　--　肌肉注射，2　6　2.58±0.15 39.00±0.20　是　--　0.5 mL/kg 3　6　2.60±0.11 38.94±0.22　12.5 mg/kg 4　6　2.62±0.20 38.91±0.28　1.25 mg/kg+7.5 mg/kg

第4天開始正式試驗(yàn)，選取30只體溫正常的健康新西蘭兔隨機(jī)分為4組（具體分組情況見表1）。除空白對照組外，其余各組均靜脈注射60 EU/kg體重的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行攻毒致熱。注射細(xì)菌內(nèi)毒素致熱造模成功后開始給藥。具體分組及給藥方式見表1。分別記錄各組新西蘭兔給藥前及給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h的體溫，以每組新西蘭兔在各時間點(diǎn)的平均體溫繪制體溫變化曲線，統(tǒng)計(jì)各組間的差異。

2.2小鼠鎮(zhèn)痛試驗(yàn)取健康昆明系小鼠60只，體重20 g左右，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，各組小鼠于給藥后30 min，腹腔注射0.5%冰醋酸溶液0.2 mL，立即計(jì)時，觀察15 min內(nèi)小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，計(jì)算扭體反應(yīng)的抑制率[3-7]。具體分組及給藥方式見表2。

表2　試驗(yàn)分組及處理（±S，n=10）

表2　試驗(yàn)分組及處理（±S，n=10）

注：（1）各組小鼠隨機(jī)分配，體重差異不顯著（P>0.05）；（2）1：空白對照組；2：雙氯芬酸鈉注射液對照組；3：對乙酰氨基酚注射液對照組；4：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液低劑量組；5：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液中劑量組；6：復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液高劑量組

1　10 20.40±0.31　--　一次性肌肉注射，2　10 20.38±0.36 10 mg/kg雙氯芬酸鈉　給藥體積為3　10 20.43±0.31 50 mg/kg對乙酰氨基酚　0.1 mL/只4　10 20.37±0.30 2.5 mg雙氯芬酸鈉+15 mg對乙酰氨基酚/kg 5　10 20.43±0.24 5 mg雙氯芬酸鈉+30 mg對乙酰氨基酚/kg 6　10 20.39±0.32 10 mg雙氯芬酸鈉+60 mg對乙酰氨基酚/kg動物數(shù)平均組別　給藥劑量（mg/kg）　給藥方式（只）體重（g）

2.3數(shù)據(jù)處理：采用SP-SS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，以X±S表示。

3　結(jié)果與討論

3.1家兔解熱試驗(yàn)各組新西蘭兔在給藥前后的體溫變化趨勢見圖1：在給藥后0.25 h，對乙酰氨基酚注射液組新西蘭兔的平均體溫較模型對照組的低，且差異顯著（P<0.05）；在給藥后0.5 h，差異極顯著（P<0.01）；表明對乙酰氨基酚注射液給藥后0.5 h對新西蘭兔發(fā)熱起到了明顯的抑制作用，且在給藥后0.75 h體溫降至正常體溫范圍。在給藥后0.25 h，復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液組新西蘭兔的平均體溫較模型對照組的低，且差異極顯著（P<0.01），表明復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液給藥后0.25 h對新西蘭兔發(fā)熱起到了明顯的抑制作用，且在給藥后0.5 h體溫降至正常體溫范圍。復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液組新西蘭兔的平均體溫較對乙酰氨基酚注射液組的低，且差異極顯著（P< 0.01），表明復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液比對乙酰氨基酚注射液解熱效果更佳。

3.2小鼠鎮(zhèn)痛試驗(yàn)各組小鼠扭體反應(yīng)結(jié)果見表3：各給藥組小鼠扭體反應(yīng)平均次數(shù)均較空白對照組的少，且差異極顯著（P<0.01），表明對乙酰氨基酚注射液以及復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液在冰醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)上均具有不同程度的鎮(zhèn)痛作用；雙氯芬酸鈉注射液組小鼠扭體反應(yīng)平均次數(shù)比對乙酰氨基酚注射液對照組的少，且差異顯著（P<0.05），表明臨床有效劑量的雙氯芬酸鈉注射液在冰醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)上的治療效果優(yōu)于對乙酰氨基酚注射液；中、高劑量復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液組小鼠扭體反應(yīng)平均次數(shù)均顯著低于雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚注射液對照組，但復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組間無顯著差異。

圖1　各組新西蘭兔給藥前后體溫變化曲線

4　討論

對乙酰氨基酚（Paracetamol）是臨床上最常用的解熱鎮(zhèn)痛藥之一，其特點(diǎn)是解熱作用與阿司匹林相似，而鎮(zhèn)痛作用較弱，抗炎作用微，但該品服用劑量較大，若長期或超劑量服用，有引發(fā)肝腎損害的危險。雙氯芬酸（Diclofenac）是瑞士CibaGeigy公司開發(fā)的消炎鎮(zhèn)痛藥，國內(nèi)于1985年上市，由于其服用劑量小、療效好、不良反應(yīng)小、長期服用無蓄積性等；但該藥存在胃腸道不適等不良反應(yīng)，也偶可使肝功能異常、白細(xì)胞減少。長期以來，探討上述兩種藥物的協(xié)同作用，通過復(fù)方減少其臨床用藥劑量、降低不良反應(yīng)并增強(qiáng)療效，一直是藥理學(xué)家多年來努力研究的課題。

1978年Mcneilab公司通過動物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，合并使用雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚后鎮(zhèn)痛效果增加，由此初步發(fā)現(xiàn)它們在藥理上的協(xié)同作用。1993年日本學(xué)者測定了雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚各自的ED50值，從量效關(guān)系上進(jìn)一步明確了這種協(xié)同作用。1996年英格蘭Derriford醫(yī)院進(jìn)行了一項(xiàng)雙盲、隨機(jī)、平行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與單獨(dú)使用對乙酰氨基酚相比，兩藥并用時嗎啡用量即使減少1/3甚至近40%仍有足夠的鎮(zhèn)痛作用[1]。經(jīng)本試驗(yàn)驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)，復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液的解熱鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于雙氯芬酸鈉注射液和對乙酰氨基酚注射液，表明雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚合用時能通過復(fù)方制劑來減少用藥劑量并增強(qiáng)鎮(zhèn)痛效果，兩者具有協(xié)同作用。

表3　小鼠扭體反應(yīng)結(jié)果?。ā繱，n=10）

表3　小鼠扭體反應(yīng)結(jié)果?。ā繱，n=10）

注：（1）各給藥組與空白對照組比較，肩注a：P<0.01；（2）各給藥組與雙氯芬酸鈉注射液對照組比較，肩注b：P<0.05，c：P<0.01；（3）復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液各劑量組與對乙酰氨基酚注射液對照組比較，肩注d：P<0.01

復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液組別　空白對照組雙氯芬酸鈉注射液對照組對乙酰氨基酚注射液對照組低劑量組中劑量組高劑量組扭體反應(yīng)次數(shù)　46.9±12.5　24.1±7.5a　32.7±8.8ab　26.5±7.1a17.1±6.7abd13.0±5.0acd扭體反應(yīng)抑制率/ %　--　48.6　30.3　43.5　63.5　72.3

5　結(jié)論

雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚合用時能通過復(fù)方制劑來減少用藥劑量并增強(qiáng)療效，兩者具有協(xié)同作用；復(fù)方雙氯芬酸鈉注射液的解熱鎮(zhèn)痛效果顯著，中劑量（5 mg雙氯芬酸鈉+30 mg對乙酰氨基酚）為合理有效劑量，可作為臨床使用劑量的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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Theantipyretic analgesic action of the Compound diclofenac sodium injection

LI Jing1，WU Qing1，LI Bo-nan2
（1.Yantai luye animal health products，Yantai 264003，China；2.Yantai Aninal Husbandry and Veterinary workstation，Yantai 264001，China）

Abstract：Objective：To investigate the compound diclofenac sodium injection of antipyretic analgesic effect.Method one：Se?lect the healthy New Zealand rabbits，and in addition to the blank control group，the rest of the groups were injected intravenously with 60 eu/kg of bacterial endotoxin.Then observe the antipyretic effect of drug on the hot New Zealand rabbit .Method 2：Select normal mice.For 30 min after celiac injection of 0.2 mL of 0.5% glacial acetic acid solution then we observed the effects within 15 min after injection in mice body torsion reaction times immediately，and calculated the inhibition rate of body torsion reaction.The results showed that the compound diclofenac sodium injection worked fast and maintained a long time.The antipyretic analgesic ef?fect is better than the acetaminophen injection.

Key words：compound diclofenac sodium injection；Antipyretic；analgesic

中圖分類號：R 944.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：0529-6005（2016）05-0099-03

收稿日期：2016-02-26

基金項(xiàng)目：煙臺市科技發(fā)展計(jì)劃（2014NC15）

作者簡介：李晶（1986-），女，碩士，從事新獸藥研發(fā)工作，E-mail：13625357865@163.com

通訊作者：吳清，E-mail：wuqing@luyeah.com

Corresponding author：WU Qing