林亞秋　羅璠

摘 要 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)在本科《細胞生物學(xué)》教學(xué)中占有重要的地位，為了提高學(xué)生的積極性并熟練掌握無菌操作步驟，教研室根據(jù)自身的特點，將小鼠脂肪細胞培養(yǎng)與分子鑒定結(jié)合起來，目的是使學(xué)生將細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)結(jié)合起來，對培養(yǎng)學(xué)生的綜合能力具有很好的效果，并為細胞生物學(xué)的實驗教學(xué)改革提供了新思路。

關(guān)鍵詞 動物細胞培養(yǎng) 實驗 教學(xué)設(shè)計

中圖分類號：Q2-4；G642 文獻標(biāo)識碼：A

細胞生物學(xué)是一門實驗性很強的學(xué)科，在生命科學(xué)專業(yè)的知識結(jié)構(gòu)體系中占有重要地位。它通過結(jié)構(gòu)和功能相結(jié)合，從細胞、亞細胞和分子等方面，用活的、動態(tài)的視點，來研究和探討生命活動的基本規(guī)律。細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)最重要的基本技術(shù)，在本科細胞生物學(xué)實驗課中占有舉足輕重的地位，是這門實驗課的精髓，通過該實驗可以幫助學(xué)生樹立嚴格無菌的觀念和一絲不茍的工作作風(fēng)。

目前細胞生物學(xué)實驗課內(nèi)容比較單一，主要是細胞的觀察、染色，標(biāo)本制備，細胞培養(yǎng)等，針對傳統(tǒng)細胞生物學(xué)實驗教學(xué)中存在的不足，結(jié)合本專業(yè)生物學(xué)實驗室的儀器設(shè)備及老師的科研項目，我們將原來的細胞培養(yǎng)實驗在教學(xué)設(shè)計中進行了改革，即在細胞培養(yǎng)實驗的基礎(chǔ)上增加分子水平對細胞鑒定的實驗項目，使學(xué)生全面掌握操作技術(shù)，突破傳統(tǒng)實驗教學(xué)中的缺點，為積極推進實驗教學(xué)改革提供參考。

1實驗方法

1.1小鼠脂肪細胞的獲得

首先使學(xué)生掌握目前動物細胞培養(yǎng)的前言進展及主要采用的方法。本實驗?zāi)康氖墙虝W(xué)生用組織塊和消化法兩種方法來獲得小鼠脂肪細胞，熟練掌握無菌的操作。

1.2培養(yǎng)的小鼠脂肪細胞的鑒定

通過此部分實驗使學(xué)生了解動物細胞培養(yǎng)不僅僅是只獲得即為成功，還需要對所獲得的細胞進行鑒定，才可進行后續(xù)研究。因此，此部分教會學(xué)生不僅用經(jīng)典的染色方法—油紅O染色法進行鑒定外，并利用分子生物學(xué)方法（即熒光定量PCR技術(shù)）檢測成熟脂肪細胞中脂肪細胞分化標(biāo)志基因的表達情況來進行進一步鑒定。

2實驗教學(xué)探討

2.1開設(shè)本實驗項目的意義

為了更好地適應(yīng)學(xué)科發(fā)展的需要，培養(yǎng)社會所需的創(chuàng)新型人才，根據(jù)生物技術(shù)專業(yè)的特點，選取重要的細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)實驗，并使實驗多元化，結(jié)合新的內(nèi)容來設(shè)計，將對學(xué)生動手動腦能力的提高有很大影響，這種創(chuàng)新性的實驗設(shè)計同樣被各大高校所重視。理論課在講述細胞培養(yǎng)的內(nèi)容時利用PPT進行動態(tài)的講解且配合大量的動畫，但還是比較抽象，學(xué)生難以理解。本實驗教學(xué)根據(jù)這些特點，緊密結(jié)合理論課內(nèi)容，在細胞培養(yǎng)的實驗基礎(chǔ)上，同時將細胞鑒定實驗（包括細胞總總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄等實驗過程）加入細胞培養(yǎng)實驗中，不但向?qū)W生介紹了細胞培養(yǎng)的基本方法，而且通過細胞鑒定向?qū)W生展示了細胞培養(yǎng)的效果，同時豐富了細胞生物學(xué)實驗課的內(nèi)容。該實驗不僅使學(xué)生們掌握了細胞培養(yǎng)和鑒定的方法，同時也使其對細胞培養(yǎng)具有了更加感性、直觀的認識。

2.2實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及解決方法

實驗過程中出現(xiàn)的最大問題就是無菌意識不強，學(xué)生在超凈工作臺中比較忙亂，一會忘記在酒精燈附近操作，一會槍頭碰到了其他部位。并且在解剖小鼠操作時剪刀經(jīng)常會粘到毛毛，造成了所取樣品的污染。在消化法時消化的時間掌握不好，造成消化不完全，得到的細胞較少等問題。最后將鋪滿組織塊的瓶子放在二氧化碳培養(yǎng)箱時瓶蓋忘記擰松半圈。

2.3以學(xué)生為主，老師為輔的實驗教學(xué)模式

我們設(shè)計的細胞培養(yǎng)實驗教學(xué)設(shè)計包含細胞培養(yǎng)和細胞鑒定兩部分內(nèi)容，細胞培養(yǎng)前期準(zhǔn)備工作頗多，并且這些準(zhǔn)備工作是保證實驗成功的關(guān)鍵。為了培養(yǎng)學(xué)生無菌意識，細胞培養(yǎng)所用器皿的清潔消毒、培養(yǎng)基的配制等，都是由學(xué)生利用課余時間在教師指導(dǎo)下親自動手完成的。這樣既培養(yǎng)了學(xué)生的基本操作技能，也增加了學(xué)生的動手機會。細胞培養(yǎng)實驗的設(shè)計同時具有連續(xù)性強和整體性強的特點，前一部分實驗結(jié)果往往會影響后續(xù)的實驗。因此對學(xué)生的要求有了進一步的提高，每個學(xué)生只有參與整個實驗過程，才能獲得最后的實驗結(jié)果。在實驗中要注意培養(yǎng)學(xué)生在實驗過程中的團隊協(xié)作精神，發(fā)揮每個學(xué)生的特長。

3結(jié)語

本實驗將細胞培養(yǎng)和細胞分子鑒定結(jié)合并應(yīng)用于實驗教學(xué)中，突破了原來細胞培養(yǎng)實驗后僅僅在顯微鏡觀察下觀察的局限，并培養(yǎng)了學(xué)生團結(jié)協(xié)作的精神，比如前期準(zhǔn)備不好，后期則無法成功，這極大地提高了學(xué)生對實驗的興趣。教師在理論授課時雖然強調(diào)了很多無菌操作的注意事項，但是通過實驗過程中觀察，學(xué)生依然會遇到很多問題。這就需要教師在學(xué)生實驗操作過程中實時糾正，嚴格把關(guān)，培養(yǎng)學(xué)生熟練掌握一套標(biāo)準(zhǔn)的無菌操作技術(shù)。然而，提高實驗課程的教學(xué)水平，保證課程的教學(xué)質(zhì)量是一個不斷提高的探索過程，尚有待于在教學(xué)實踐過程中不斷總結(jié)經(jīng)驗、實踐改進，只有這樣才能使細胞生物學(xué)實驗教學(xué)日臻完善。

參考文獻

[1] 翟中和，王喜衷，丁明孝.細胞生物學(xué)（第4版）[M].北京：高等教育出版社，2011.

[2] 王宏英，王偉，陳堅剛，李玉明，張榮慶，張貴友.細胞生物學(xué)實驗教學(xué)創(chuàng)新的探討[J].實驗技術(shù)與管理，2008，25（1）：126-128.

[3] 陳乃清，宋平，李曉迎，郝廣勤，余其興.改革細胞生物學(xué)實驗教學(xué)，提高學(xué)生綜合素質(zhì)[J].實驗技術(shù)與管理，2002，19（4）：8-11.

[4] 胡鑫，高梅，李紹軍，陳坤明，梅莉.細胞生物學(xué)實驗教學(xué)改革探索[J].中國細胞生物學(xué)學(xué)報，2013，35（1）：110-114.

[5] 李曉，陳知龍，潘傳英，曾文先.畜牧專業(yè)細胞生物學(xué)教學(xué)改革的探索與實踐[J].安徽農(nóng)學(xué)通報，2015，21（18）：148-149.