□袁萬(wàn)哲 李玉保 王建昌 張姍 陳萍 崔元 經(jīng)美 李佳暖 左奕 劉聚祥 孫繼國(guó)

（1河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，2河北省獸醫(yī)生物技術(shù)工程技術(shù)研究中心，3聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，4河北出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心)

雞心包積液-肝炎綜合征研究初報(bào)

□袁萬(wàn)哲1,2李玉保3王建昌4張姍1陳萍1崔元1經(jīng)美1李佳暖1左奕1劉聚祥1,2孫繼國(guó)1,2

（1河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，2河北省獸醫(yī)生物技術(shù)工程技術(shù)研究中心，3聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，4河北出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心)

2015年6月以來(lái)，我國(guó)河南、山東、河北、遼寧、安徽、吉林等部分地區(qū)，雞群發(fā)生了不明原因的以心包積液、肝臟腫大為特征的疾病，根據(jù)病變，暫將該病稱為雞心包積液-肝炎綜合征。該病主要發(fā)生于20～30日齡的肉雞，包括817、肉雜等，發(fā)病后4～8天為死亡高峰，病程8～15天，死亡率達(dá)20～30%。同時(shí)蛋雞20～70日齡以及200～300日齡也有發(fā)生，但死亡率低于肉雞。目前，該病的發(fā)病區(qū)域不斷擴(kuò)大，給我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

該病發(fā)生后，河北省蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系崗位專家劉聚祥教授迅速組織以袁萬(wàn)哲博士為首的團(tuán)隊(duì)成員開(kāi)展相關(guān)研究。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，初步確定該病為一種病毒性傳染病。將發(fā)病雞肝臟經(jīng)研磨、凍融并過(guò)濾除菌，通過(guò)尿囊腔接種于9日齡SPF雞胚，盲傳5代后，收集尿囊液，提取DNA后進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，該病毒可在雞胚中可以增殖，接種雞胚120小時(shí)后有部分死亡，感染雞胚肝臟可見(jiàn)腫大、出血等病變。通過(guò)提取尿囊液核酸進(jìn)行PCR檢測(cè)，成功利用一對(duì)禽腺病毒特異性引物擴(kuò)增得到目的大小的條帶，連接pMD18-T載體后轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，挑陽(yáng)性克隆測(cè)序。結(jié)果顯示，該目的片段大小為743bp，GenBank登錄號(hào)為KT932640。BLASTN結(jié)果顯示，該毒株與禽腺病毒4型親緣關(guān)系較近。

收集第5代尿囊液，采用腹腔注射方式接種20只1日齡SPF雞，并設(shè)定對(duì)照組，隔離飼養(yǎng)，攻毒后第3天開(kāi)始，攻毒組開(kāi)始死亡，死亡雞剖檢變化與自然發(fā)病雞一致，從發(fā)病死亡雞體內(nèi)也能分離到禽腺病毒。

綜上所述，通過(guò)病原分離鑒定及動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)，確定了雞心包積液-肝炎綜合征病原為禽腺病毒4型。該病于1987年最早發(fā)現(xiàn)于巴基斯坦卡拉奇市附件的安卡拉地區(qū)，故也稱為安卡拉病，我國(guó)之前尚未見(jiàn)該病發(fā)生與流行的報(bào)道。目前，部分雞場(chǎng)采用組織水苗預(yù)防具有一定效果。