陜西省渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科(渭南 714000)　張　博　張　穎　牛力春　尚鐵燕　雷　紅

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MIF及HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義*

陜西省渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科(渭南 714000)張博張穎△▲牛力春△尚鐵燕雷紅

摘要目的：探討MIF和HIF-1α在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素的相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)80例上皮性卵巢癌組織中MIF和HIF-1α的表達(dá)情況，分析MIF和HIF-1α表達(dá)在上皮性卵巢癌組織中的臨床意義。結(jié)果：MIF在卵巢癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為68.8%，HIF-1α在卵巢癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為77.5%。MIF和HIF-1α表達(dá)均與卵巢癌手術(shù)分期、細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)，與卵巢癌患者年齡和病理類型無關(guān)(P>0.05)。卵巢癌組織中MIF和HIF-1α兩者表達(dá)之間為正相關(guān)(R=0.605,P<0.05)。結(jié)論：MIF和HIF-1α表達(dá)之間具有協(xié)同作用,與卵巢癌病程發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

主題詞 卵巢腫瘤 巨噬細(xì)胞游走抑制因子缺氧誘導(dǎo)因子1,α亞單位 免疫組織化學(xué)

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)是一個(gè)功能強(qiáng)大的多功能蛋白,可由活化的T淋巴細(xì)胞分泌，并抑制巨噬細(xì)胞遷移,還可促進(jìn)多種炎性因子分泌從而參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答調(diào)控[1-2]。近年來研究表明,MIF作為細(xì)胞因子可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、血管形成、增加侵襲能力、抑制抑癌基因p53活性等多種機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展；還有研究表明，MIF高表達(dá)與乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌等多種腫瘤的不良預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[3-4]。有文獻(xiàn)報(bào)道缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)可上調(diào)MIF基因表達(dá)水平，而MIF過表達(dá)可促進(jìn)HIF-1α基因的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性，從而正向反饋促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在低氧環(huán)境下的新生血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等[1-3]。因此，MIF和HIF-1α在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮極其重要的作用。本研究通過RT-PCR及免疫組化技術(shù)探討MIF和HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況及其相關(guān)性，為進(jìn)一步深入理解卵巢癌發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

對(duì)象與方法

1對(duì)象收集三二三醫(yī)院及渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科于2010年1月至2014年12月期間收治的卵巢腫瘤患者80例,年齡31～79歲,平均48.75歲。病理類型包括漿液性囊腺癌38例,粘液性囊腺癌26例,子宮內(nèi)膜樣癌11例,其他類型5例；細(xì)胞學(xué)分級(jí)高分化癌18例,中分化癌32例,低分化癌40例。按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2012年新的手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)分為I期8例、Ⅱ期12例、Ⅲ期46例、Ⅳ期14例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初診卵巢腫瘤患者,未經(jīng)任何治療；②手術(shù)病理組織HE染色確診為上皮性卵巢癌；③臨床病理資料完整。

2實(shí)驗(yàn)試劑小鼠抗人HIF-1α單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司，兔抗人MIF單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，SP法免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋公司。

3實(shí)驗(yàn)方法卵巢癌病理組織蠟塊常規(guī)4 μm切片,分別做HE染色、MIF和HIF-1α免疫組織化學(xué)染色，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以乳腺癌組織作為MIF和HIF-1α的陽(yáng)性對(duì)照。免疫組化操作嚴(yán)格按照SP法免疫組織化學(xué)試劑盒說明書進(jìn)行。

4結(jié)果判讀首先由病理醫(yī)生根據(jù)HE染色結(jié)果進(jìn)行病理診斷復(fù)核,然后MIF和HIF-1α的免疫組化結(jié)果由兩名病理醫(yī)生分別獨(dú)立閱片進(jìn)行結(jié)果判讀。細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)見棕色或棕褐色顆粒為免疫組化結(jié)果陽(yáng)性。顯微鏡高倍視野下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，按照每個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例進(jìn)行評(píng)分,陽(yáng)性細(xì)胞<5%記為0，5%～25%為1，26%～50%為2，51%～75%為3,>50%為4,評(píng)分為1～4分為陽(yáng)性。

結(jié)果

1卵巢癌病理組織中MIF和HIF-1α的表達(dá)情況見附圖。MIF在卵巢癌組織中為細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽(yáng)性率為68.8%(55/80)，HIF-1α在卵巢癌組織中主

要為細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，也可見細(xì)胞核表達(dá)，陽(yáng)性率為77.5%(62/80)。

附圖　MIF和HIF-1α在卵巢癌組織中表達(dá)情況(SP×400)

2MIF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌臨床病理因素的相關(guān)性見表1。中晚期(Ⅲ+Ⅳ)卵巢癌患者中MIF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于早期(Ⅰ+Ⅱ)卵巢癌患者(P<0.05)。卵巢癌組織中MIF和HIF-1α在高分化、中分化和低分化分組中陽(yáng)性表達(dá)率分別為50.0%，84.4%，72.5%和55.6%，78.1%和92.5%，隨著細(xì)胞分化程度的降低，MIF和HIF-1α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。卵巢癌患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的MIF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率高于淋巴結(jié)陰性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。但卵巢癌組織中MIF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)均與年齡、病理類型無關(guān)(P>0.05)。

表1　MIF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系[n(%)]

注：*P<0.05，**P<0.01，#P<0.001

3MIF和HIF-1α蛋白在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性見表2。80例卵巢癌組織中，MIF和HIF-1α蛋白表達(dá)均陽(yáng)性為52例，MIF和HIF-1α蛋白表達(dá)均陰性為15例，采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析MIF和HIF-1α蛋白在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性結(jié)果表明，兩者表達(dá)之間為正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R=0.605，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=29.326，P=0.000)。

表2　卵巢癌組織中MIF和HIF-1α表達(dá)之間的相關(guān)性

討論

MIF是一種多效能的蛋白,同時(shí)具有炎性因子和細(xì)胞因子的功能。MIF作為炎性因子,由活化的T淋巴細(xì)胞分泌,通過抑制巨噬細(xì)胞遷移和促進(jìn)多種炎性因子分泌,廣泛參與機(jī)體的病理生理過程,在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要調(diào)控作用。作為細(xì)胞因子,MIF在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化等方面扮演重要角色[3-4]。因此有學(xué)者提出MIF通過誘導(dǎo)炎性因子改變組織微環(huán)境從而促進(jìn)細(xì)胞惡變發(fā)生和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。這一學(xué)說已經(jīng)得到初步證實(shí)?，F(xiàn)有的研究表明MIF可能通過以下幾種途徑在腫瘤細(xì)胞發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色：①M(fèi)IF通過激活MAPK/ERK和PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖；②MIF可上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管形成；③MIF能增加多種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)表達(dá)，通過促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解增加腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力；④MIF通過抑制抑癌基因p53功能發(fā)揮抵抗凋亡作用；⑤MIF通過誘導(dǎo)NFκB等炎癥因子參與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[5-8]。本研究用免疫組化檢測(cè)了卵巢癌中MIF蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明MIF在卵巢癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為68.8%。卵巢癌組織中FIGO分期較晚、細(xì)胞分化程度差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的患者中MIF表達(dá)陽(yáng)性率較高(P<0.05)，但MIF表達(dá)與年齡、病理類型無關(guān)(P>0.05)。這一結(jié)果提示，隨著卵巢癌病程的進(jìn)展，MIF表達(dá)水平也逐漸增加，MIF可能在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

由于實(shí)體瘤組織處于乏氧狀態(tài)，因此HIF-1α在腫瘤細(xì)胞的適應(yīng)性生存過程中發(fā)揮非常重要的調(diào)控作用。HIF-1α主要通過以下途徑促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展：①通過促進(jìn)VEGF轉(zhuǎn)錄水平和增加VEGF mRNA穩(wěn)定性上調(diào)VEGF的表達(dá)水平，從而促進(jìn)腫瘤組織新生血管形成，有利于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和浸潤(rùn)；②HIF-1α通過上調(diào)糖酵解中關(guān)鍵酶表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞糖酵解，為腫瘤細(xì)胞提供能量支持；③HIF-1α通過降低E-cadherin和β-catenin表達(dá)，降低細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間粘附性，從而有利于腫瘤細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)[9-10]。本研究免疫組化結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO分期較晚、細(xì)胞分化程度差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的卵巢癌患者中HIF-1α蛋白表達(dá)水平較高，提示HIF-1α表達(dá)上調(diào)參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展，并與腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。

本研究用Spearman相關(guān)分析進(jìn)一步探索了卵巢癌組織中MIF和HIF-1α表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果表明MIF和HIF-1α兩者表達(dá)之間為正相關(guān)(R=0.605，P<0.05)，提示MIF和HIF-1α表達(dá)在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。文獻(xiàn)報(bào)道,HIF-1α可上調(diào)MIF基因表達(dá)水平，而MIF過表達(dá)可促進(jìn)HIF-1α基因的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性[1-3]。因此我們推測(cè),腫瘤組織中乏氧環(huán)境誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)，HIF-1α高表達(dá)進(jìn)一步促進(jìn)MIF表達(dá)水平增加。MIF上調(diào)一方面發(fā)揮炎性因子作用，通過誘導(dǎo)炎性因子改變組織微環(huán)境，為腫瘤細(xì)胞創(chuàng)造生存條件；另一方面,發(fā)揮細(xì)胞因子作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移等。同時(shí),MIF又可正反饋調(diào)控HIF-1α表達(dá),從而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮極其重要的作用。

綜上所述,MIF和HIF-1α表達(dá)之間具有協(xié)同作用，與卵巢癌病程發(fā)生發(fā)展相關(guān)，但其具體機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

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(收稿：2015-12-04)

Expression and significance of MIF and HIF-1α in the epithelial ovarian carcinoma

Department of Gynecology and Obstetrics,Weinan Central Hospital(Weinan 714000)

Zhang BoZhang YingNiu Lichunet al

ABSTRACTObjective：To determine the expression of MIF和HIF-1α in the epithelial ovarian carcinoma and explore the correlation between the MIF and HIF-1α and clinicopathologic features. Methods:Using immunohistochemistry SP method to detected the expression of MIF and HIF-1α in 80 cases diagnosed with epithelial ovarian carcinoma in obstetrics and gynecology department.Results:The positive expression rate of MIF and HIF-1α were 68.8% and 77.5% separately. The expression of MIF and HIF-1α were closely related with FIGO stage, differentiation degree and lymph node metastasis(P<0.05). There was a positive correlation between the positive rates of MIF and the positive rates of HIF-1α(R=0.605，P<0.05). Conclusion:MIF and HIF-1α maybe play an important role during tumor progress, invasion and metastasis of epithelial ovarian carcinoma.

KEY WORDSOvarian neoplasmsMacrophage migration-inhibitory factors Hypoxia-inducible factor 1, alpha subunit Immunohistochemistry

【中圖分類號(hào)】R737.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.06.040

*國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81302243)

陜西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2014JM4157)

解放軍第三二三醫(yī)院培育課題(2012323B14)

△解放軍第三二三醫(yī)院婦產(chǎn)科

▲通訊作者

·臨床病理·