鄂維建，趙玲莉，李玉玲

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，青海西寧810001）

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外周血中CD19+CD5+B細(xì)胞和白細(xì)胞介素-10對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者病情的影響

鄂維建，趙玲莉，李玉玲

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，青海西寧810001）

摘要：目的探討外周血中CD19+CD5+B細(xì)胞和白細(xì)胞介素-10（IL-10）對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者病情發(fā)生、發(fā)展的影響，為其臨床研究提供參考依據(jù)。方法選擇65例穩(wěn)定期SLE患者及65例活動(dòng)期SLE患者，同時(shí)選擇70例健康人群作為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IL-10水平。比較3組的差異，并分析上述指標(biāo)與SLE活動(dòng)度評(píng)分（SLEDAI）及補(bǔ)體的相關(guān)性。結(jié)果活動(dòng)組及穩(wěn)定組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4均低于對(duì)照組，IL-10、紅細(xì)胞沉降率（ESR）高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），活動(dòng)組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4低于穩(wěn)定組，SLEDAI評(píng)分、IL-10、ESR高于穩(wěn)定組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，IL-10與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05）。隨著SLEDAI評(píng)分的增加，CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量呈下降趨勢(shì)，而IL-10水平呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論SLE患者外周血CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量降低，而IL-10水平升高，隨著病情活動(dòng)程度的增加，外周血CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10水平變化更明顯，可以作為評(píng)價(jià)SLE活動(dòng)性的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：B細(xì)胞；白細(xì)胞介素-10；系統(tǒng)性紅斑狼瘡

臨床上，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）主要表現(xiàn)為多系統(tǒng)或器官病變和血清中出現(xiàn)多種自身抗體，是一種原因尚未明確的自身免疫性疾?。?］。研究發(fā)現(xiàn)，SLE的發(fā)生、發(fā)展與B細(xì)胞的異常增殖及活化相關(guān)，其中以CD19+CD5+B細(xì)胞影響最大［2］。其不僅可以通過多種自然抗體參與免疫應(yīng)答并維持免疫平衡，而且通過分泌白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）抑制炎癥反應(yīng)的進(jìn)展。在該背景下，本研究探討外周血中CD19+CD5+B細(xì)胞和IL-10對(duì)SLE患者病情發(fā)生、發(fā)展的影響，為臨床研究提供參考依據(jù)。

1　資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月-2015年8月200例65例穩(wěn)定期SLE患者及65例活動(dòng)期SLE患者。其中，穩(wěn)定組男性33例，女性32例；年齡22～67歲，平均（48.32±5.11）歲?；顒?dòng)組男性34例，女性31例；年齡20～68歲，平均（48.41±5.21）歲。同時(shí)選擇70例健康人群作為對(duì)照組。其中，男性36例，女性34例，年齡20～67歲，平均年齡（48.36±4.78）歲。3組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①活動(dòng)期患者均有不同程度的發(fā)燒、脫發(fā)、關(guān)節(jié)疼痛與腫脹、蛋白尿、低蛋白血癥、浮腫等臨床表現(xiàn)，部分患者存在心包炎、心內(nèi)膜炎等癥狀；②穩(wěn)定期患者無新近出現(xiàn)或近期加重的臨床癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有心肺、肝腎功能不全，感染性疾病、腫瘤性疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、急性風(fēng)濕熱、原發(fā)性腎小球疾病等。所有患者簽署知情同意書。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

記錄患者信息，空腹抽取靜脈血，3 000 r/min離心5 min，采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)Becton Dickinson公司）檢測(cè)外周血中CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IL-10水平（試劑盒購(gòu)自上?？邓?fàn)柼┥锟萍加邢薰荆?，采用散射比濁法測(cè)定補(bǔ)體C3、C4水平（試劑盒購(gòu)自杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司），正常值：C3：0.79～1.52 g/L，C4：0.16～0.38 g/L；采用魏氏法測(cè)定紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR），正常值≤20 mm/1 h。系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)度評(píng)分（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）對(duì)SLE病情的判斷：0～4分為基本無活動(dòng)；5～9分為輕度活動(dòng)；10～14分為中度活動(dòng)；≥15分為重度活動(dòng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，數(shù)據(jù)資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，兩組間的比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組資料比較用方差分析，如方差分析齊，則用LSD-t檢驗(yàn)法進(jìn)行兩兩比較；趨勢(shì)檢驗(yàn)用Linear-by-Linear Association線性相關(guān)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 3組受試者SLE相關(guān)指標(biāo)比較

3組受試者SLEDAI評(píng)分、CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、IL-10、白蛋白、C3、C4及ESR比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩兩比較時(shí)，活動(dòng)組及穩(wěn)定組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4低于對(duì)照組，IL-10、ESR高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），活動(dòng)組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4均低于穩(wěn)定組，SLEDAI評(píng)分、IL-10、ESR高于穩(wěn)定組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　3組受試者SLE相關(guān)指標(biāo)比較（±s）

表1　3組受試者SLE相關(guān)指標(biāo)比較（±s）

組別　SLEDAI評(píng)分　CD19+CD5+B細(xì)胞/％　IL-10/ （mmo/L）　　白蛋白/ （g/L）　C3/ （g/L）　C4/ （g/L）　ESR/ （20 mm/1 h）穩(wěn)定組（n=65）　7.83±10.23　 6.62±1.55　 15.82±2.53　 36.80±0.23　 0.80±0.23　 0.18±0.04　 24.38±4.43活動(dòng)組（n=65）　13.91±17.43　 4.68±1.43　 18.03±2.44　 29.47±4.13　 0.47±0.13　 0.08±0.04　 41.03±4.24對(duì)照組（n=70）　-　14.45±1.44　 8.81±1.51　 50.92±5.31　 0.92±0.31　 0.32±0.05　 14.45±4.44 F值　4.233　3.981　5.845　2.805　1.994　2.232　4.853 P值　0.000　0.000　0.000　0.001　0.045　0.009　0.000

續(xù)表1

2.2 CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10與其他指標(biāo)的相關(guān)性

CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，IL-10與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05）；與其他指標(biāo)無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表2　其他指標(biāo)與CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10的相關(guān)性

2.3 CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10趨勢(shì)分析

隨著SLEDAI評(píng)分的增高，CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量呈降低趨勢(shì)，而IL-10水平呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3　CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10趨勢(shì)分析（±s）

表3　CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10趨勢(shì)分析（±s）

組別　　例數(shù)　CD19+CD5+B細(xì)胞/％　IL-10/（mmo/L）無活動(dòng)　65　7.62±1.82　16.42±2.34輕度活動(dòng)　32　6.51±1.87　17.32±1.73中度活動(dòng)　18　4.41±1.83　18.02±2.23重度活動(dòng)　15　3.81±1.51　20.92±1.81 F值　6.763　5.176 P值　0.000　0.000

3　討論

目前，SLE的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但已證實(shí)其發(fā)生、發(fā)展過程與調(diào)節(jié)性B細(xì)胞存在相關(guān)性［3］。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞通過免疫抑制作用參與自身免疫性疾病的發(fā)生過程，是一種不依賴免疫球蛋白，且具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)的亞群，其中CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)目前公認(rèn)的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞［4］。有研究指出，多種自身免疫性疾病，特別是SLE患者存在調(diào)節(jié)性B細(xì)胞缺陷［5］。

本研究分析發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)組及穩(wěn)定組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4均低于對(duì)照組，且活動(dòng)組CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量、白蛋白、C3、C4均低于對(duì)照組?？梢奡LE患者CD19+CD5+B細(xì)胞明顯減少，在活動(dòng)期患者中更明顯，與楊金華等［6］的研究結(jié)果一致，該研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者與健康對(duì)照組外周血CD19+CD5+B細(xì)胞百分率分別為（5.7±2.1）％和（19.1±2.9）％，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.431，P=0.005）；SLE患者低活動(dòng)組與高活動(dòng)組分別為（6.5±1.9）％和（5.1±2.2）％，兩者與健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.819，P=0.001和t=16.234，P=0.001）。分析認(rèn)為SLE患者存在調(diào)節(jié)性B細(xì)胞缺陷，進(jìn)而引起CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量減少，使其抑制免疫應(yīng)答、維持免疫功能的作用降低，最終導(dǎo)致SLE的發(fā)生［7］，因此可以認(rèn)為CD19+CD5+B細(xì)胞參與SLE的發(fā)生過程。進(jìn)一步相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，隨著SLEDAI評(píng)分的增加，CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量呈降低趨勢(shì)?？梢奀D19+CD5+B細(xì)胞不僅參與SLE的發(fā)生，且與SLE疾病進(jìn)展及活動(dòng)度密切相關(guān)。

IL-10是一種Th2和部分調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌的多源性細(xì)胞因子，可以抑制巨噬細(xì)胞的抗原提呈作用，進(jìn)而刺激B細(xì)胞增殖、分化及抗體生成，通過上述過程可以參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生［8-9］；另外部分調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亦可產(chǎn)生IL-10，但該類IL-10具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用，通過抑制免疫反應(yīng)保護(hù)機(jī)體免受損傷［10-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)組及穩(wěn)定組IL-10高于對(duì)照組，且活動(dòng)組IL-10高于對(duì)照組；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)IL-10與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)，隨著SLEDAI評(píng)分增加，IL-10水平呈上升趨勢(shì)?？梢奍L-10水平與SLE疾病發(fā)生及活動(dòng)度相關(guān)。

本研究進(jìn)一步分析未發(fā)現(xiàn)CD19+CD5+B細(xì)胞與IL-10水平存在相關(guān)性。分析認(rèn)為SLE患者中隨著CD19+CD5+B細(xì)胞數(shù)量降低，其分泌的具有調(diào)節(jié)功能的IL-10濃度隨之下降，因此免疫調(diào)節(jié)能力降低［12］；而SLE患者升高的IL-10水平可能與炎癥反應(yīng)引起的組織破壞等相關(guān)，使參與炎癥反應(yīng)的IL-10水平升高。

綜上所述，本研究顯示，SLE患者，外周血CD19+CD5+B細(xì)胞降低，而IL-10水平升高，上述表現(xiàn)在活動(dòng)期患者中更明顯，隨著病情活動(dòng)程度的增加，外周血CD19+CD5+B細(xì)胞及IL-10水平變化更明顯，其可以作為評(píng)價(jià)SLE活動(dòng)性的指標(biāo)。

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（童穎丹編輯）

Expression and significance of CD19+CD5+B cells and IL-10 in patients with systemic lupus erythematosus

Wei-jian E，Ling-li Zhao，Yu-ling Li
（Clinical Laboratory，the Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining，Qinghai 810001，China）

Abstract:Objective To study the expressions of CD19+CD5+B cells and interleukin 10（IL-10）and their clinical significance in patients with systemic lupus erythematosus（SLE）. Methods In this study 65 SLE-stable patients，65 SLE-active patients and 70 healthy control people were included. CD19+CD5+B cell subsets were detected with flow cytometry. IL-10 level in serum was detected with enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. The correlations of CD19+CD5+B cell count and serum IL-10 level with SLE disease activity index（SLEDAI）score and complement were analyzed. Results The CD19+CD5+B cell count，albumin，C3 and C4 in the SLE-active group and SLE-stable group were significantly lower than those in the control group（P＜0.05）. The IL-10 and ESR in the SLE-active and stable groups were higher than those in the control group，the differences were statistically significant（P＜0.05）. The CD19+CD5+B cell count，albumin，C3 and C4 in the SLE-active group were significantly lower than those in the SLE-stable group（P＜0.05）. The SLEDAI score，IL-10 and ESR in the SLE-active group were higher than those in the SLE-stable group，the differences were statistically significant（P＜0.05）. The CD19+CD5+B cell count was negatively related with the SLEDAI score，but IL-10 was positively related with the SLEDAI score（P＜0.05）. As the SLEDAI score increased，CD19+CD5+B cell count showed a lowering trend，and IL-10 showed an uptrend.Conclusions CD19+CD5+B cells and IL-10 may participate in the occurrence and development of SLE. The changes of CD19+CD5+B cells and IL-10 in the peripheral blood might contribute to the pathogenesis and correlate with the disease activity of SLE，which can be used as evaluation indexes of SLE activity.

Keywords:B cell；interleukin 10；systemic lupus erythematosus

中圖分類號(hào)：R593.24

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.11.012

文章編號(hào)：1005-8982（2016）11-0059-04

收稿日期：2015-11-16