陳 為

不同處理方法對冷凝集標(biāo)本血細(xì)胞分析的影響

陳 為

目的 探討不同處理方法對冷凝集標(biāo)本血細(xì)胞分析的影響。方法 分別采用手心揉搓并顛倒混勻2 min(方法1)，37℃水浴30 min(方法2)，血漿置換3次(方法3)，顯微鏡手工計(jì)數(shù)（方法4）處理10例冷凝集標(biāo)本，比較各種糾正方法對紅細(xì)胞各參數(shù)結(jié)果的影響。結(jié)果 以方法4檢測結(jié)果為參比，方法1對RBC、HCT、MCH、MCHC的檢測造成嚴(yán)重干擾，RBC和HCT結(jié)果明顯降低，MCH和MCHC結(jié)果明顯增高；方法2(37℃水浴30 min從水浴箱取出后要進(jìn)行保溫)各參數(shù)檢測結(jié)果與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；方法3(置換血漿3次法)RBC、HCT、MCH、Hb和MCHC與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但PLT明顯降低(P＜0.05)。結(jié)論 血常規(guī)檢驗(yàn)中冷凝集標(biāo)本推薦采用37℃水浴30 min后保溫立即檢測，大部分冷凝集標(biāo)本通過該法均能獲得滿意的效果；對于極少數(shù)較為嚴(yán)重的冷凝集標(biāo)本，可采用血漿置換3次處理后再檢測，但血漿置換易導(dǎo)致血小板的嚴(yán)重丟失，因此，PLT值采用水浴法的檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確。

冷凝集；血常規(guī)；水浴；血漿置換

在血細(xì)胞分析儀的使用過程中，許多因素對檢測結(jié)果有干擾，血標(biāo)本冷凝集就是其中之一。在實(shí)際工作中，發(fā)現(xiàn)冷凝集的血常規(guī)標(biāo)本對血細(xì)胞分析儀的檢測參數(shù)有較大的干擾，導(dǎo)致多項(xiàng)參數(shù)的檢測結(jié)果與實(shí)際不符，特別是對紅細(xì)胞系統(tǒng)的各個(gè)參數(shù)干擾較大。目前，對于肉眼可見的冷凝集標(biāo)本多采用37℃水浴后再檢測的辦法進(jìn)行處理，取得了一定的效果，但是對于冷凝集標(biāo)本需要在37℃水浴中放置多長時(shí)間，水浴后是否延遲保溫及水浴后的結(jié)果是否滿意等問題還沒有統(tǒng)一的答案。而且對于如何發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)冷凝集標(biāo)本，特別是對一些肉眼難以覺察的冷凝集如何從檢驗(yàn)結(jié)果中去發(fā)現(xiàn)并消除干擾，也沒有統(tǒng)一的認(rèn)識[1-2]。因此，本研究通過對10例冷凝集標(biāo)本進(jìn)行不同方法的處理并對結(jié)果進(jìn)行了分析,報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取遼寧省北鎮(zhèn)市人民醫(yī)院門診及住院患者10例的血常規(guī)檢查標(biāo)本，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝劑真空采血管?；颊吣挲g12～65歲，其中男6例，女4例，包括支原體肺炎2例，免疫性溶血性貧血3例，上呼吸道感染3例，乙肝1例，傳染性單核細(xì)胞增多癥1例。10例血常規(guī)檢查標(biāo)本中，同1個(gè)標(biāo)本全部經(jīng)過四種方法處理進(jìn)行數(shù)據(jù)比對。

1.2 儀器與試劑 法國ABX-60全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑、質(zhì)控物，0.9%生理鹽水，100μL德國Eppendorf移液器和吸頭，水平離心機(jī)，Olympus顯微鏡，儀器使用前已校準(zhǔn)，每日測定3個(gè)水平配套質(zhì)控物，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。

1.3 冷凝集標(biāo)本的判斷 肉眼觀察見試管壁有細(xì)沙樣凝集，剛推制的血膜上有許多細(xì)小顆粒；對于肉眼難于識別的標(biāo)本，可以從檢測結(jié)果和儀器的報(bào)警信息中得到提示，如出現(xiàn)“RBCAgglut?(紅細(xì)胞凝集?)”和“Turb/Hb?(混濁/血紅蛋白干擾?)”等報(bào)警信息，嗜堿通道的右側(cè)出現(xiàn)長的拖尾現(xiàn)象；其檢測結(jié)果中平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)結(jié)果異常增高，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)和紅細(xì)胞比容(HCT)明顯減低，血紅蛋白(Hb)與RBC比例明顯異常(健康人Hb與RBC的比值約為30∶1)[3-4]，當(dāng)檢測結(jié)果顯示Hb與RBC比例明顯不符，MCH、MCHC結(jié)果異常增高時(shí)，應(yīng)考慮有冷凝集的影響。以上情況都提示存在血標(biāo)本冷凝集現(xiàn)象，血涂片見紅細(xì)胞有聚集現(xiàn)象可予以確認(rèn)。

1.4 處理方法 每份標(biāo)本均采用以下4種方法分別處理后再行檢測。方法1：手心揉搓并顛倒混勻2 min，立即上機(jī)檢測；方法2：37℃水浴30 min從水浴箱取出后并保溫；方法3：血漿置換3次法，該法參照相關(guān)[5]血小板血漿的制備方法，將EDTA-K2抗凝血標(biāo)本以160×g離心6 min，用移液器插至上清液與交界面上3 min處，緩緩將上層血漿取出棄掉，并記錄丟棄的量，再加入等量37℃生理鹽水，然后再加入37℃生理鹽水3～5 mL，以160×g離心6 min洗滌標(biāo)本3次后，緩緩棄掉等體積多加入的生理鹽水，標(biāo)本再顛倒混勻8～10次后上機(jī)測定；方法4：顯微鏡手工計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、RBC血小板計(jì)數(shù)(PLT)、Hb，嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》的要求操作,MCH按照MCH＝Hb/RBC計(jì)算得出。以方法4作為標(biāo)準(zhǔn)方法，其他方法檢測結(jié)果與該法進(jìn)行比較。

1.5 處理有效的判斷 處理后異常增高的MCH、MCHC恢復(fù)正常，RBC和Hb的比值趨于合理，散點(diǎn)圖正常，報(bào)警消失；血涂片未見紅細(xì)胞聚集現(xiàn)象。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[4]采用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料進(jìn)行配對t檢驗(yàn)。方法4未測定的MCV、HCT、MCHC按照CLIA′88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

以方法4檢測結(jié)果為參比，方法1對RBC、HCT、MCH、MCHC的檢測造成嚴(yán)重干擾，RBC和HCT結(jié)果明顯降低，MCH和MCHC結(jié)果明顯增高；方法2(37℃水浴30 min從水浴箱取出后要進(jìn)行保溫)各參數(shù)檢測結(jié)果與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；方法3(置換血漿3次法)RBC、HCT、MCH、Hb和MCHC與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但PLT明顯降低(P＜0.05)。見表1、表2。

表1 冷凝集標(biāo)本檢測的結(jié)果(n=10)

表2 4種方法對各項(xiàng)參數(shù)檢測結(jié)果的影響（s）

表2 4種方法對各項(xiàng)參數(shù)檢測結(jié)果的影響（s）

注：與方法4比較，aP＜0.05；b為超出了CLIA′88的要求；—表示未檢測

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3 討論

血液冷凝集綜合征是一種自身免疫性疾病，當(dāng)血液溫度低于某一特定溫度時(shí)，循環(huán)中自身抗體就會(huì)與紅細(xì)胞抗原相結(jié)合。這一特定溫度稱為領(lǐng)凝集閾值溫度，其范圍為4℃～35℃。領(lǐng)凝集閾溫度很少高于30℃，通常低于25℃，無癥狀的患者尤其如此[4]。部分正常人或嬰兒可以存在有低滴度的領(lǐng)凝集抗體，一般在1∶16以下，在30℃以上一般不發(fā)生凝集反應(yīng)，但較高滴度的領(lǐng)凝集抗體就會(huì)導(dǎo)致冷凝集綜合征[5-6]。

4種不同方法處理后，檢測結(jié)果與方法4比較，冷凝集血對血液分析儀的PLT、Hb影響不大[7]。從表1可以看出，方法1對RBC、HCT、MCH、MCHC的檢測造成嚴(yán)重干擾，RBC和HCT結(jié)果明顯降低，MCH和MCHC結(jié)果明顯增高；方法2(37℃水浴30 min從水浴箱取出后要進(jìn)行保溫)各參數(shù)檢測結(jié)果與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；方法3(置換血漿3次法)RBC、HCT、MCH、Hb和MCHC與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但PLT明顯降低(P＜0.05)。方法1對RBC、HCT、MCH、MCHC的檢測造成嚴(yán)重干擾，RBC和HCT結(jié)果明顯降低，MCH和MCHC結(jié)果明顯增高；方法2(37℃水浴30 min從水浴箱取出后要進(jìn)行保溫)各參數(shù)檢測結(jié)果與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；方法3(置換血漿3次法)RBC、HCT、MCH、Hb和MCHC與方法4之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但PLT明顯降低(P＜0.05)，這是由于置換過程PLT丟失造成的。冷凝集標(biāo)本不經(jīng)處理直接檢驗(yàn)(方法1)，紅細(xì)胞系統(tǒng)各個(gè)檢測參數(shù)的結(jié)果顯示：MCH、MCHC、明顯增高，RBC和HCT明顯減低，Hb與RBC比值明顯不符合正常的比值。見表1。PLT和Hb與實(shí)際相符。具有冷凝集的血常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本經(jīng)過4種方法檢測后，經(jīng)對比后發(fā)現(xiàn)PLT、Hb結(jié)果與實(shí)際相符，其他多項(xiàng)檢測結(jié)果與實(shí)際不符，尤其是RBC、HCT、MCH、MCHC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

在日常工作中，尤其是冬天室溫較低的時(shí)候，經(jīng)常會(huì)碰到冷凝集導(dǎo)致血常規(guī)紅細(xì)胞各參數(shù)結(jié)果異常的情況，正確識別和糾正冷凝集標(biāo)本的異常檢測結(jié)果，對于臨床準(zhǔn)確評估患者病情非常重要。本研究中作者對各種冷凝集標(biāo)本處理方案進(jìn)行了比對，發(fā)現(xiàn)冷凝集對Hn、PLT影響不大，綜合評價(jià)本研究中的各種糾正方案，對于一般的冷凝集標(biāo)本，首先推薦37℃水浴30 min后盡快檢測并注意保溫，保溫方法：標(biāo)本從水浴箱取出后，將其握在掌心顛倒混勻，開蓋后立即吸樣檢測，如水浴箱離儀器較遠(yuǎn)，可采用放于小燒杯中水浴的方法，標(biāo)本取出時(shí)連同燒杯一起取出，以減少在較冷環(huán)境中的放置時(shí)間，對于采用上面方法不能解決的，標(biāo)本涂片觀察發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞仍存在凝集，提示可能該標(biāo)本冷凝集素效價(jià)較高，可采用3次血漿置換法(方法3)處理，以獲得更加真實(shí)的檢測結(jié)果。血漿置換法對紅細(xì)胞參數(shù)雖能很好地糾正，卻會(huì)導(dǎo)致血小板的丟失，且置換次數(shù)越多丟失現(xiàn)象越嚴(yán)重。這可能與血漿置換過程中吸棄血漿時(shí)血小板被吸掉有關(guān)，因?yàn)檠弘x心后，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細(xì)胞層和紅細(xì)胞層，且離心力較低時(shí)，上層血漿富含血小板。由于血漿置換法主要影響PLT，因此，PLT值可采用水浴后的檢測結(jié)果，也可采用手工計(jì)數(shù)或者方法1的PLT結(jié)果報(bào)告[8]，通過以上的處理均能得到滿意的效果。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.16.009

遼寧 121300 遼寧省北鎮(zhèn)市人民醫(yī)院（陳為）