李 偉, 金 益, 柏 熊, 王曉東, 邢正弘, 王校權(quán)

(1. 上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司, 上海 201203; 2. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心, 上海 201203; 3. 上海本莊生物科技有限公司, 上海 201403)

單籠與群居飼養(yǎng)對(duì)雌性食蟹猴生理指標(biāo)的影響

李 偉1,2, 金 益1,2, 柏 熊1,2, 王曉東1,2, 邢正弘1,2, 王校權(quán)3

(1. 上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司, 上海 201203; 2. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心, 上海 201203; 3. 上海本莊生物科技有限公司, 上海 201403)

目的 了解單籠與群居飼養(yǎng)雌性食蟹猴生理指標(biāo)的差異。方法 選取9只4～6歲雌性食蟹猴作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，前5個(gè)月單籠飼養(yǎng)，后5個(gè)月群居飼養(yǎng)。對(duì)體質(zhì)量、體溫、血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)等生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。采用重復(fù)測(cè)量方差分析比較兩階段指標(biāo)是否存在差異。結(jié)果 食蟹猴單籠階段的體質(zhì)量顯著低于群居階段(P＜0.05)。血常規(guī)中，單籠階段的白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(NEUT)、嗜中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)極顯著高于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的單核細(xì)胞計(jì)數(shù)(MONO)、單核細(xì)胞百分比(MONO%)極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)顯著低于群居階段(P＜0.05)。血液生化中，單籠階段的總膽紅素(TBIL)極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯(TG)顯著高于群居階段(P＜0.05)。單籠階段的尿常規(guī)中的蛋白質(zhì)陽(yáng)性率高于群居階段，組間相比差異顯著(P＜0.05)。其余指標(biāo)組間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 食蟹猴更適合群居飼養(yǎng)，如果長(zhǎng)期單籠飼養(yǎng)，可能對(duì)其體質(zhì)量及血液學(xué)和尿常規(guī)中某些指標(biāo)產(chǎn)生較大影響。

食蟹猴; 雌性; 生理指標(biāo); 血液學(xué); 尿常規(guī)

食蟹猴(Macaca fascicularis)具有許多與人類相似的生物學(xué)特性，并且飼養(yǎng)繁殖相對(duì)簡(jiǎn)單，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中。特別是在基因工程、生物制劑等藥物的毒理試驗(yàn)中，食蟹猴作為人類的“替身”，是不可缺少的試驗(yàn)支撐條件。此外，在一些人類重大傳染病的研究，如艾滋病以及肝炎的防治研究，食蟹猴作為非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物更是不可缺少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[1]。

本研究初步探討了單籠飼養(yǎng)與群養(yǎng)雌性食蟹猴對(duì)其生理指標(biāo)的影響，以便建立更為合理的飼養(yǎng)管理模式，在保證動(dòng)物福利的基礎(chǔ)上，為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究提供健康、可靠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4～6歲普通級(jí)雌性食蟹猴9只, 購(gòu)于海南金港生物技術(shù)股份有限公司[SCXK(瓊)2010-0001]，體質(zhì)量3～5 kg, 以1～9號(hào)不銹鋼彩色頸牌進(jìn)行編號(hào)識(shí)別。

1.2 飼養(yǎng)條件

群居飼養(yǎng)于環(huán)境開(kāi)放的, 有憩息架、秋千、巖洞等設(shè)施的露天陽(yáng)光棚, 其規(guī)格為10 m×4.2 m× 3.5 m, 單籠飼養(yǎng)于不銹鋼籠具內(nèi), 籠具規(guī)格65 cm× 70 cm×80 cm，籠具安置在環(huán)境開(kāi)放的露天陽(yáng)光棚里。溫度26 ℃左右，相對(duì)濕度40%～70%。飼喂全價(jià)猴專用飼料, 定時(shí)加喂水果, 飲水經(jīng)煮沸滅菌。單籠適應(yīng)性飼養(yǎng)2個(gè)月后開(kāi)始試驗(yàn)[SYXK(滬) 2009-0081], 前5個(gè)月單籠飼養(yǎng), 后5個(gè)月群居飼養(yǎng)。

1.3 檢測(cè)儀器

常用電子體重秤(感量0.1 kg), 華佗佳人PG-900電子體溫計(jì)，日本Sysmex xt-2000i全自動(dòng)血液分析儀，Thermo-legend RT+冷凍離心機(jī)，日立-7180型全自動(dòng)生化分析儀，Uritest 500B尿分析儀。

1.4 測(cè)定方法

本實(shí)驗(yàn)所有指標(biāo)均為隔夜禁食16 h后在每月中旬某日上午測(cè)量，單籠與群居階段各連續(xù)測(cè)量5個(gè)月數(shù)據(jù)。

1.4.1 體質(zhì)量的測(cè)定 用放置在堅(jiān)實(shí)的水平地面的電子體重秤進(jìn)行稱量, 先稱量人重量, 再將食蟹猴抓出, 人與猴一同站上電子體重秤，獲得人與猴的總重量，以總重量減去人重量得到食蟹猴的體質(zhì)量。

1.4.2 體溫的測(cè)定 在室溫下，把動(dòng)物用手固定后，動(dòng)物在相對(duì)比較安靜的情況下，用電子體溫計(jì)測(cè)直腸溫度(溫度計(jì)在直腸內(nèi)放置約60 s)，直至“℃”閃爍停止即記錄體溫[2]。

1.4.3 血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定 上肢靜脈采血1 mL, 全血用EDTA-K2抗凝，采集后的血液在碎冰中保存，全自動(dòng)血液分析儀測(cè)試如下項(xiàng)目: 紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板總數(shù)(PLT)、血小板平均體積（MPV）、血小板比容(PCT)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LYMPH)、單核細(xì)胞數(shù)(MONO)、嗜中性粒細(xì)胞數(shù)(NEUT)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)(EO)、嗜堿粒細(xì)胞數(shù)(BASO)、淋巴細(xì)胞百分率(LYMPH%)、單核細(xì)胞百分率(MONO%)、嗜中性粒細(xì)胞數(shù)百分率(NEUT%)、嗜酸粒細(xì)胞百分率(EO%)、嗜堿粒細(xì)胞百分率(BASO%)。

1.4.4 血生化指標(biāo)測(cè)定 用促凝劑真空采血管采集血液，采血量為1 mL，采集后的血液置于碎冰中保存。用Thermo-legend RT+冷凍離心機(jī)2 500 g，4 ℃，離心15 min，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定如下項(xiàng)目: 天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽固醇(CHOI)、總膽紅素(T-BIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、鈉離子(Na+)、鉀離子(K+)、鈣離子(Ca2+)、甘油三脂(TG)、磷(P)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)、膽堿酯酶(CHE)。

1.4.5 尿常規(guī)異常情況檢查 測(cè)定當(dāng)日清晨將潔凈干燥的托盤(pán)放置在猴籠下方，用一次性5 mL注射器收集猴尿液，放置于已編號(hào)的15 mL離心管中。尿分析儀及配套試紙測(cè)定如下指標(biāo)，判定異常標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)標(biāo)注: pH值、相對(duì)比重(SG)、隱血(BLD，≥10細(xì)胞/μL)、酮體(KET，≥0.5 mmol/L)、尿糖(GLU，≥0 mmol/L)、尿蛋白(PRO, ≥0.15 g/L)、尿膽紅素(BIL, ≥8.6 μmol/L)、尿膽原(URO，≥33 μmol/L)、亞硝酸鹽(NIT, 測(cè)定結(jié)果為“+”)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC，≥15細(xì)胞/μL)、維生素C (≥0.6 mmol/L)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 體質(zhì)量、體溫

群居飼養(yǎng)的體質(zhì)量均值明顯高于單籠飼養(yǎng)。體溫的組間差異不顯著(表1)。

表1 雌性食蟹猴體質(zhì)量、體溫測(cè)量值

2.2 血液指標(biāo)

血常規(guī)中，單籠階段的W B C、N E U T、NEUT%極顯著高于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的MONO、MONO%極顯著低于群居階段(P＜0.01);單籠階段的LYMPH%顯著低于群居階段(P＜0.05)。血液生化中，單籠階段的TBIL極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的AST、TG顯著高于群居階段(P＜0.05)(表2)。

2.3 尿常規(guī)異常情況

單籠階段的尿蛋白質(zhì)陽(yáng)性較多。其余指標(biāo)無(wú)顯著差異(表3)。

表2 雌性食蟹猴血常規(guī)、血生化變化值

表3 雌性食蟹猴尿常規(guī)測(cè)定值

3 討論

實(shí)驗(yàn)表明, 單籠飼養(yǎng)的食蟹猴體質(zhì)量持續(xù)下降,在單籠飼養(yǎng)的第5個(gè)月降到最低，均值為3.4 kg; 群居飼養(yǎng)后，體質(zhì)量立即回升，在群居飼養(yǎng)第1個(gè)月均值就上升到4 kg，其后略有升高后企穩(wěn)。經(jīng)驗(yàn)表明，成年食蟹猴的體質(zhì)量會(huì)隨著時(shí)間緩慢增加，但在半年內(nèi)變化幅度不大。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明飼養(yǎng)環(huán)境對(duì)其體質(zhì)量有影響，并且單籠飼養(yǎng)的5個(gè)月中體質(zhì)量變化的幅度比群居的明顯，這說(shuō)明單籠飼養(yǎng)造成的體質(zhì)量下降快，幅度大。

關(guān)于食蟹猴的血液生理和生化值已有較多報(bào)道，但大多沒(méi)有特別關(guān)注研究對(duì)象是單籠還是群居飼養(yǎng)[3-8]。本文探討了單籠飼養(yǎng)與群養(yǎng)對(duì)食蟹猴的血液生理和血液生化是否產(chǎn)生不同影響。結(jié)果表明，單籠飼養(yǎng)的食蟹猴血常規(guī)和血生化值與已報(bào)道的文獻(xiàn)值基本一致，群居的則存在某些不同。血常規(guī)中的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，單籠飼養(yǎng)階段的測(cè)量值比群居飼養(yǎng)的顯著升高。林健等對(duì)雌性SD大鼠進(jìn)行單籠與群居的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示單籠組白細(xì)胞、中性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于群養(yǎng)組，與本實(shí)驗(yàn)中雌性食蟹猴的表現(xiàn)一致，雖物種不同，但結(jié)果類似[9]。血生化中的AST、TG，單籠飼養(yǎng)階段的測(cè)量值比群居飼養(yǎng)的顯著升高。TBIL單籠飼養(yǎng)階段的測(cè)量值比群居飼養(yǎng)的顯著降低。尿常規(guī)中的蛋白質(zhì)單籠飼養(yǎng)階段的測(cè)量值比群居飼養(yǎng)的顯著升高，單籠飼養(yǎng)的尿蛋白陽(yáng)性較多，說(shuō)明長(zhǎng)期單籠飼養(yǎng)可能導(dǎo)致腎臟損傷，而群居后尿蛋白基本正常，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中該損傷是可修復(fù)的。從以上結(jié)果可以看出，食蟹猴在單籠和群居的不同飼養(yǎng)條件下，在體質(zhì)量和部分血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)的指標(biāo)上存在差異。這些差異應(yīng)當(dāng)引起關(guān)注。

本實(shí)驗(yàn)的群居階段通過(guò)使食蟹猴飼養(yǎng)房間內(nèi)增設(shè)憩息架、秋千、假山、巖洞等設(shè)施使環(huán)境更加豐富，使猴群生活的環(huán)境有更多的趣味，讓食蟹猴在其中生活展現(xiàn)更多的自然習(xí)性，滿足食蟹猴娛樂(lè)、躲避驚嚇和運(yùn)動(dòng)的需求。這樣既可以確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康，滿足其生活習(xí)性，也可以為科學(xué)實(shí)驗(yàn)提供更可靠、更穩(wěn)定、更接近正常反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但在實(shí)際操作中，日常的人工飼養(yǎng)繁殖可以采用群養(yǎng)，而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)卻因各種實(shí)驗(yàn)要求難以群養(yǎng)。因此，單籠飼養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡可能采用足夠大的籠具及其相關(guān)的福利設(shè)施(如，動(dòng)物玩具、采食器及方式、大自然的音樂(lè)、錄像等)提高食蟹猴的福利，減少因低福利對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育、生理生化指標(biāo)的影響[10]。

[1] 田朝陽(yáng), 楊守凱. 非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物在醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 19(6):74-77.

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Comparison on Effects of Single Caged and Social Group on Physiological Indexes of Female Macaca Fascicularis

LI Wei1,2, JIN Yi1,2, BAI Xiong1,2, WANG Xiao-dong1,2, XING Zheng-hong1,2, WANG Xiao-quan3
(1. Sino-British SIPPR/BK Laboratory Animal LTD., Co, Shanghai 201203, China; 2. Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203, China; 3. Shanghai Benzhuang Bioscience LTD., Co, Shnaghai 201403, China)

ObjectiveTo understand the differences on physiological indexes of single caged and social group female macaca fascicularis.MethodsNine female cynomolgus monkeys at the age of 4-6 years old were singly raised in cage at the first 5 months,and group raised in next 5 months.The body weight, body temperature, blood routine, urine routine, blood biochemistry were measured in single caged rearing and group breeding, repeated measures analysis of variance was used to compare whether there were differences between the two stages.ResultsBody weight in single caged stage was significantly lower than that in group phase (P＜0.05). In blood routine, white blood cell count (WBC), neutrophil count (NEUT), neutrophil percentage (NEUT%) in single caged stage were significantly higher than that in group stage (P＜0.01); monocyte count (MONO), the percentage of mononuclear cells (MONO%) in single caged stage were significantly lower than that in group stage (P＜0.01); lymphocyte percentage(LYMPH%) in single caged stage was significantly lower than that in group stage (P＜0.05). In blood biochemistry, total bilirubin(TBIL) in single caged stage was significantly lower than that in group stage (P＜0.01); aspartic acid amino transferase (AST), triglyceride (TG) in single caged stage were significantly higher than that in group stage (P＜0.05). The positive rate of urine protein in single caged stage is higher than that in the group stage(P＜0.05). Other indexes between the groups had no statistical difference.ConclusionThe macaca fascicularis was more suitable for the breeding of group, if the long-term single caged feeding, it could have a greater impact on body weight, hematology and urine routine of some indicators.

Macaca fascicularis; Female; Physiological index; Hematology; Urine routine

Q95-33

A

1674-5817(2016)05-0369-05

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.009

2016-02-18

上海市科委實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究專項(xiàng)(13140901200)

李 偉(1980-),男,助理研究員。

E-mail: tianshixz@126.com

邢正弘, E-mail: zhxing57@163.com