彭　芳， 徐　榮， 高曉霞，2， 劉同寧， 劉　源， 陳　君*

（1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京100193；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250014；3.永寧縣本草蓯蓉種植基地，寧夏銀川750100）

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蒸制處理改進(jìn)肉蓯蓉產(chǎn)地加工的質(zhì)量

彭芳1， 徐榮1， 高曉霞1，2， 劉同寧3， 劉源3， 陳君1*

（1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京100193；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250014；3.永寧縣本草蓯蓉種植基地，寧夏銀川750100）

摘要：目的 探討蒸制處理對(duì)肉蓯蓉Cistanche deserticol Y.C.Ma產(chǎn)地加工外觀性狀和內(nèi)在品質(zhì)的影響。方法 肉蓯蓉均分為曬干組和蒸制組，紫外分光光度計(jì)、HPLC和酶標(biāo)儀對(duì)兩組的粉末色度、有效成分含有量、DPPH自由基清除能力和Fe3 +還原能力進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 蒸制組的外觀性狀比曬干組更柔軟順直，粉末顏色更鮮亮。除肉蓯蓉苷A外，蒸制組苯乙醇苷類（松果菊苷，毛蕊花糖苷，異毛蕊花糖苷和2' -乙酰基毛蕊花糖苷）、多糖、可溶性糖以及醇溶性浸出物的含有量均顯著高于曬干組（p<0.05），而且抗氧化活性也顯著高于后者（p<0.01）。結(jié)論 蒸制處理可適應(yīng)肉蓯蓉的大規(guī)模產(chǎn)地加工。

關(guān)鍵詞：肉蓯蓉；產(chǎn)地加工；質(zhì)量；蒸制

肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma俗稱沙漠人參，以干燥帶鱗葉肉質(zhì)莖入藥，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤燥通腸等功效。經(jīng)過十多年探索，國內(nèi)已初步形成以西北為中心的肉蓯蓉種植區(qū)域，在內(nèi)蒙古、新疆、寧夏和甘肅等省區(qū)建立了多個(gè)有一定規(guī)模的種植基地［1］，目前產(chǎn)地加工成為各基地面臨的首要問題，故亟需開展相關(guān)研究。有專利報(bào)道，蒸制可顯著提高肉蓯蓉鮮切片中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含有量［2-4］。為明確蒸制處理對(duì)產(chǎn)地加工肉蓯蓉藥材質(zhì)量的影響，本實(shí)驗(yàn)以寧夏肉蓯蓉種植基地收獲的新鮮肉蓯蓉為對(duì)象，比較曬干與蒸制樣品外觀性狀、成分含有量和抗氧化活性的差異，為該植物產(chǎn)地加工提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料 新鮮肉蓯蓉肉質(zhì)莖于2013年春季采自寧夏肉蓯蓉基地，經(jīng)藥用植物研究所陳君教授鑒定為肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma。

1.2 儀器 2695-2996高效液相色譜儀（美國Waters公司）；AB135-S電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），KQ250DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UV-2550紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；U-3010分光光度計(jì)，配有積分球及色度分析軟件（日本日立公司）；MQX200酶標(biāo)儀（美國伯騰公司）；TD5離心機(jī)（赫西儀器裝備有限公司）；HH-S8數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠）；IKA MS3渦旋混勻器（德國艾卡公司）；THZ-D臺(tái)式恒溫振蕩器（太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；DHG-9143BS-Ⅲ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（無錫市蘇嘉試驗(yàn)設(shè)備廠）。

1.3 試劑 松果菊苷（111670-200503）、毛蕊花糖苷（111530-200706）對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院）；肉蓯蓉苷A、異毛蕊花糖苷和2' -乙?；锘ㄌ擒眨吣洗髮W(xué)馬志國博士課題組提取、鑒定并饋贈(zèng)，含有量大于98％）。DPPH（美國阿法埃莎公司）；水溶性維生素E（日本梯希愛公司）；總抗氧化能力（T-AOC）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。甲醇為分析純（北京化工廠）；甲酸為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甲醇為色譜純（加拿大賽默飛世爾公司）；其他試劑均為分析純；液相用水為超純水（美國默克密理博公司儀器制備）。

2 方法

2.1 樣品加工 選取完整、無明顯蟲蛀的肉蓯蓉，統(tǒng)一用自來水沖去泥沙，將表面多余水分自然吹干。隨機(jī)取10株，均勻縱切成兩部分，一部分直接曬干（曬干組），另一部分蒸制30 min后曬干（蒸制組），觀察兩組的形態(tài)和顏色。然后，用萬能粉碎機(jī)粉碎，過65目篩，粉末待測(cè)。

2.2 測(cè)定方法

2.2.1 肉蓯蓉粉末色度測(cè)定

2.2.1.1 供試品制備 取粉末約3 g，裝入測(cè)色皿中，蓋上蓋玻片，封口膜封口。

2.2.1.2 色度測(cè)定 參考熊吟等［5］方法，以CIE （L*a*b*）顏色空間來定量描述其顏色值。其中，L*軸表示明度，越大越感覺白，越小越感覺黑；a*軸表示紅綠方向，+a*為紅方向，-a*為綠方向；b*軸表示黃藍(lán)方向，+b*為黃方向，-b*為藍(lán)方向。

2.2.2 苯乙醇苷類測(cè)定

2.2.2.1 供試品溶液制備 稱取本品粉末0.5 g，置于錐形瓶中，加入60％甲醇25 mL，40℃下超聲處理（200 W、40 kHz）30 min，放冷后補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液制備 稱取松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷和2' -乙酰基毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，加60％甲醇配成質(zhì)量濃度分別為1.02、0.52、0.83、0.54、1.02 mg/mL的對(duì)照品貯備液。分別取2.00、1.00、2.50、1.00、2.00 mL置于10 mL量瓶中，加60％甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.3 色譜條件 參考Ma等［6］方法并進(jìn)行優(yōu)化。Merck Purospher STAR RP-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫30℃；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)波長330 nm；體積流量1 mL/min；流動(dòng)相A為甲醇，B為0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫（0～10 min，72％B；10～30 min，72％～62％B；30～45 min，62％B）。色譜圖見圖1。

2.2.3 可溶性糖和多糖測(cè)定

2.2.3.1 供試品溶液制備 參考高俊鳳等［7-8］方法并進(jìn)行優(yōu)化。精密稱取粉末0.5 g，加入80％乙醇25 mL，80℃超聲處理（150 W、40 kHz）30 min，趁熱過濾，重復(fù)提取1次，濾渣揮干乙醇待用。濾液合并，定容至50 mL量瓶中，吸取1 mL置于10 mL離心管中，沸水浴中揮干乙醇，加入蒸餾水5 mL，渦旋振蕩溶解，4 600×g離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，蒸餾水定容，取2 mL作為可溶性糖含有量測(cè)定的樣品液。濾渣加水25 mL，80℃超聲處理（150 W、40 kHz）30 min，重復(fù)提取1次。濾液合并，定容至50 mL量瓶中，吸取5 mL到50 mL量瓶中，蒸餾水定容，取2 mL溶液作為多糖含有量測(cè)定的供試品溶液。

2.2.3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取葡萄糖10.44 mg，加蒸餾水溶解并定容至100 mL棕色量瓶中。吸取0.30、0.50、0.70、0.90、1.10、1.30、1.50 mL分別置于干燥10 mL玻璃試管中，加蒸餾水至2 mL，即得。

1.松果菊苷 2.肉蓯蓉苷A 3.花蕊花糖苷 4.異毛蕊花糖苷 5.2'-乙?；锘ㄌ擒?.echinacoside 2.cistanoside A 3.acteoside 4.isoacteoside 5.2'-acetylaceoside圖1　HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s

2.2.3.3 紫外光譜測(cè)定 參考王麗楠等［9］方法，采用硫酸苯酚法測(cè)定。

2.2.4 醇溶性浸出物、灰分和水分的測(cè)定 按照《中國藥典》2015版一部各項(xiàng)下方法測(cè)定［10］。

2.2.5 DPPH自由基清除能力測(cè)定 取“2.2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液，參考Coupy等［11］方法并進(jìn)行優(yōu)化。將1 mL 2×10-4mol/L DPPH甲醇溶液與1 mL樣品待測(cè)液混合，搖勻，室溫下暗室反應(yīng)90 min。酶標(biāo)儀測(cè)定517 nm波長處的吸收度，以不同質(zhì)量濃度的水溶性維生素E甲醇溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y=0.64x+1.94，R2=0.994。其中，x表示不同質(zhì)量濃度的水溶性維生素E甲醇溶液，y表示對(duì)應(yīng)的DPPH自由基清除率，結(jié)果以水溶性維生素E（μmol）/樣品干重（g）表示。

2.2.6 Fe3 +還原能力測(cè)定 取“2.2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液，以總抗氧化能力（T-AOC）測(cè)定試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以不同質(zhì)量濃度的水溶性維生素E甲醇溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y=0.06x+0.52，R2=0.998。其中，x表示不同質(zhì)量濃度的水溶性維生素E甲醇溶液，y表示對(duì)應(yīng)的Fe3 +還原率，結(jié)果以水溶性維生素E（μmol）/樣品干重（g）表示。

2.3 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，Excel 2007制表。

3 結(jié)果與分析

3.1 外觀性狀 外觀指標(biāo)觀察結(jié)果（表1）顯示，蒸制組的肉蓯蓉比曬干組更加柔軟順直，其藥材外觀和粉末顏色都更加鮮亮，而且粉末明度值L*明顯大于后者，但紅綠值a*小于后者，其中L*值越大，粉末越明亮，與肉眼直接觀察結(jié)果相符。外觀性狀是肉蓯蓉傳統(tǒng)質(zhì)量評(píng)價(jià)中的重要指標(biāo)，色度測(cè)定可使其顏色性狀指標(biāo)得到量化，克服顏色識(shí)別的主觀個(gè)體差異和不敏感性等問題。傳統(tǒng)認(rèn)為，肉蓯蓉以色黝黑、質(zhì)柔潤者為佳［12］，可見蒸制處理有助于提高其外觀品質(zhì)。

表1　外觀性狀比較（±s，n=10）Tab.1 Comparison of appearance characters（±s，n=10）

表1　外觀性狀比較（±s，n=10）Tab.1 Comparison of appearance characters（±s，n=10）

外觀指標(biāo)　　蒸制組　　曬干組整體外觀　　微柔軟，順直　　堅(jiān)硬，微彎曲整體顏色　　黝黑發(fā)亮　　暗棕色粉末顏色　　鮮褐色　　灰褐色粉末L*　65.61±4.22　63.52±4.64粉末a*　5.02±1.22　6.12±1.79粉末b*23.02±2.29　23.12±2.42

3.2 化學(xué)成分含有量 配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果（圖2）顯示，蒸制組的多糖、可溶性糖以及醇溶性浸出物含有量均顯著高于曬干組（p<0.05），但灰分和含水量略低于后者。蒸制組的5種苯乙醇苷類（肉蓯蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷和2' -乙酰基毛蕊花糖苷）含有量都高于曬干組，而且除肉蓯蓉苷A外都有顯著性差異（p< 0.05），具體見表2，可見四者含有量均提高了1倍左右，這與雷麗等［3］報(bào)道一致。

注：*表示在0.05水平（雙側(cè)）上有顯著差異，**表示在0.01水平（雙側(cè)）上有顯著差異圖2　含有量比較（n=10）Fig.2 Comparison of contents（n=10）

表2　苯乙醇苷類成分含有量比較Tab.2 Comparison of the contents of phenylethanoid glycosides

3.3 抗氧化活性影響 DPPH和總抗氧化能力（T-AOC）法測(cè)定結(jié)果（表3）顯示，蒸制組的DPPH自由基清除和Fe3 +還原能力均顯著高于曬干組（p<0.01）?；趦煞N方法的測(cè)定結(jié)果一致，可認(rèn)為蒸制處理可顯著提高肉蓯蓉水溶性成分的抗氧化活性。

表3　抗氧化活性比較（±s，n=10）Tab.3 Comaprison of antioxidant activities（±s，n=10）

表3　抗氧化活性比較（±s，n=10）Tab.3 Comaprison of antioxidant activities（±s，n=10）

注：**表示在0.01水平（雙側(cè)）上有顯著差異

指標(biāo)　　蒸制組/（μmol·g-1）　　曬干組/（μmol·g-1）　　配對(duì)t檢驗(yàn)p值DPPH自由基清除能力　289.32±54.88　235.85±57.14　0.005**Fe3 +還原能力　127.74±30.60　95.75±25.85　0.002**

3.4 粉末色度與成分含有量相關(guān)性 由表4可知，明度值L*與松果菊苷含有量呈非常顯著的正相關(guān)（p<0.01），黃藍(lán)值b*與多糖、醇溶性浸出物亦然（p<0.01）。因此，肉蓯蓉藥材粉末越明亮，其松果菊苷含有量越高；粉末越黃，其多糖和醇溶性浸出物含有量越高，可見肉蓯蓉藥材的顏色主要與其所含的松果菊苷、多糖和醇溶性浸出物含有量有關(guān)。

表4　相關(guān)性分析（n=20）Tab.4 Correlation analysis（n=20）

4 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)表明，先經(jīng)過蒸制處理的肉蓯蓉藥材外觀條形更順直，質(zhì)地更柔軟，顏色更黑亮，而且顯著增加了所含成分苯乙醇苷、多糖、可溶性糖和醇溶性浸出物的含有量，同時(shí)體外抗氧化活性也明顯提高。苯乙醇苷和多糖是肉蓯蓉發(fā)揮藥效的主要活性成分［13］，其中前者主要有抗氧化［14］、神經(jīng)保護(hù)［15-16］和肝保護(hù)［17］作用，而后者主要有調(diào)節(jié)免疫［18］和抗氧化［19］作用。由于抗氧化活性是肉蓯蓉發(fā)揮許多藥理作用（免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護(hù)等）的基礎(chǔ)，故認(rèn)為蒸制處理可提高肉蓯蓉藥材的外觀性狀和內(nèi)在品質(zhì)，但縱切后的樣品并不完全等于實(shí)際產(chǎn)地加工中的整株樣品，故又對(duì)分等級(jí)的新鮮整株肉蓯蓉進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)蒸制樣品的外觀性狀和內(nèi)在品質(zhì)均優(yōu)于曬干樣品。而且，蒸制處理產(chǎn)生的高溫蒸氣具有殺菌作用，可降低肉蓯蓉干燥過程中的霉變率，提高產(chǎn)地加工效率，適宜大規(guī)模采收后新鮮肉蓯蓉的產(chǎn)地加工處理。

藥材粉末色度與活性成分含有量的高低密切相關(guān)［5，20］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉粉末越明亮，其松果菊苷含有量越高；粉末越黃，其多糖和醇溶性浸出物含有量越高，可為快速預(yù)測(cè)肉蓯蓉活性成分含有量提供可借鑒的思路和方法，也為深入研究該藥材外觀性狀與內(nèi)在成分含有量的關(guān)系提供初步依據(jù)。

有文獻(xiàn)報(bào)道，松果菊苷和毛蕊花糖苷含有量不僅在肉蓯蓉屬不同種之間有明顯差異，在同種的不同個(gè)體［21］和部位［9，22 -23］之間亦然，而且在肉蓯蓉不同批次指紋圖譜中的相似度相對(duì)較低［24］。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，外觀性狀差異不顯著的10株肉蓯蓉中，松果菊苷含有量在0.18％～1.58％之間，相差近8倍。然而，肉蓯蓉出土采挖時(shí)間不一致，而且單株個(gè)體大（鮮品達(dá)1～2 kg/株），為大樣本量取樣帶來諸多不便，為最大限度消除肉蓯蓉個(gè)體間質(zhì)量差異所造成的干擾，故本實(shí)驗(yàn)采取整株縱切法來考察加工方式對(duì)肉蓯蓉藥材質(zhì)量的影響。因此，在對(duì)個(gè)體差異大的肉蓯蓉藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)，需要探索更加適宜的取樣方法以保證評(píng)價(jià)結(jié)果的客觀公正。

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Im provement of the quality of post-harvest processing of Cistanche deserticola by steam ing

PENG Fang1， XU Rong1， GAO Xiao-xia1，2， LIU Tong-ning3， LIU Yuan3， CHEN Jun1*
（1.Institute of Medicinal p lant DeveloPment，Chinese Academy of Medical Sciences and peKing Union Medical College，Beijing 100193，China；2.College of pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China；3.Yongning County p lantation Base of Cistanches Herba，Yinchuan 750100，China）

ABSTRACT：AIM To explore the effects of steaming on appearance characters and internal qualities of post-harvest processing of Cistanche deserticola Y.C.Ma.METHODS C.deserticola was equally divided into sun drying group and steaming group.The colorimetric values，contents of active constituents，DPPH free radical scavenging activities and ferric reducing antioxidant powers of the two groups were determined by ultraviolet spectrophotometer，HPLC and enzymemark instrument.RESULTS The appearance characters of steaming group were softer and straighter than those of steaming group，and the powder color was brighter.Except for cistanoside A，the contents of phenylethanoid glycosides（acteoside，echinacoside，isoacteoside and 2' -acetylacteoside），polysaccharides，soluble saccharides and ethanol-soluble extract in the steaming group were significantly higher than those in the sun drying group（p<0.05），and the antioxidant activity was significantly stronger（p<0.01）.CONCLUSION Steaming can be adopted in the large-scale post-harvest processing of Cistanche deserticola Y.C.Ma.

KEY WORDS：Cistanche deserticola Y.C.Ma；post-harvest processing；quality；steaming

*通信作者：陳 君（1963—），女，博士，教授，研究方向?yàn)樗幱弥参锉Ｗo(hù)及中藥材規(guī)范化生產(chǎn)。Tel：（010）57833352，E-mail：jchen@implad.ac.cn

作者簡介：彭 芳（1986—），女，博士生，研究方向?yàn)橹兴幉囊?guī)范化生產(chǎn)。Tel：（010）57833361，E-mail：prefer1134@163.com

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAI05B03）；國家自然科學(xué)基金（U1403224，81102748）；寧夏回族自治區(qū)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（YKX-12）

收稿日期：2015-12-10

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.027

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）05-1093-05