李朝駿， 顧志華

（同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院藥劑科，上海200433）

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HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定消積化蟲(chóng)散中6種成分

李朝駿， 顧志華*

（同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院藥劑科，上海200433）

摘要：目的 建立高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)（HPLC-DAD）法同時(shí)測(cè)定消積化蟲(chóng)散（白術(shù)、茯苓、使君子仁等）中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、去氫土莫酸、去氫茯苓酸和茯苓酸的含有量。方法 分析采用依利特C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-甲醇（1∶1）（A）-0.05％磷酸溶液（B），梯度洗脫；體積流量1.1 mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm（去氫土莫酸、去氫茯苓酸和茯苓酸）、220 nm（白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ）、276 nm（白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ）。

結(jié)果 6個(gè)成分均呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均加樣回收率（n =6）為96.8％～99.4％，RSD值為0.66％～1.48％。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，可用于消積化蟲(chóng)散的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：消積化蟲(chóng)散；白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ；白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ；去氫土莫酸；去氫茯苓酸；茯苓酸；HPLC-DAD

消積化蟲(chóng)散由白術(shù)（炒）、茯苓、使君子仁、牽牛子（炒）、陳皮、厚樸（姜制）、檳榔、山楂、甘草、六神曲（炒）10味藥材組成，具有消積化蟲(chóng)，開(kāi)胃增食的功效，臨床上多用于小兒厭食納呆、消化不良、食積蟲(chóng)積、脘腹脹痛等癥狀的治療［1］，現(xiàn)收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第9冊(cè)，白術(shù)（炒）和茯苓為其主要藥味。然而，原相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)該制劑的性狀、散劑通則進(jìn)行了規(guī)定，尚無(wú)對(duì)其中所含成分進(jìn)行定量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。為了更好控制該制劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)消積化蟲(chóng)散中白術(shù)（炒）、茯苓［2］所含白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、去氫土莫酸、去氫茯苓酸和茯苓酸的含有量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器和試藥

Agilent1200 HPLC色譜儀；電子天平（十萬(wàn)分之一，德國(guó)賽多利斯公司）。白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（批號(hào)111978-201501，含有量99.9％）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（批號(hào)111975-201501，含有量99.9％）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ（批號(hào)111976-201501，含有量99.9％）對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；去氫土莫酸（批號(hào)6754-16-1，含有量98.0％）對(duì)照品（成都瑞芬思生物科技有限公司）；去氫茯苓酸（77012-31-8，含有量98.0％）、茯苓酸（29070-92-6，含有量98.0％）對(duì)照品（四川省維克奇生物科技有限公司）。消積化蟲(chóng)散（每袋裝1.5 g，批號(hào)為140403、140404、140406）購(gòu)自重慶希爾安藥業(yè)有限公司。甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品貯備液 分別稱(chēng)取6種對(duì)照品適量，甲醇溶解稀釋?zhuān)瞥珊?.548 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、0.472 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、0.515 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、0.592 mg/mL去氫土莫酸、0.456 mg/mL去氫茯苓酸和0.751 mg/mL茯苓酸的對(duì)照品貯備液。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液 分別吸取“2.1.1”項(xiàng)下貯備液2.5、2.5、1.0、2.5、2.5、5.0 mL，置于同一50 mL量瓶中，甲醇稀釋?zhuān)瞥珊?.027 4 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、0.023 6 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、0.010 3 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、0.029 6 mg/mL去氫土莫酸、0.022 8 mg/mL去氫茯苓酸和0.075 1 mg/mL茯苓酸的混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品溶液 取消積化蟲(chóng)散適量，研磨成細(xì)粉，精密稱(chēng)取10.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流提取60 min，冷卻至室溫，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，振搖，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性對(duì)照品溶液 按照部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第9冊(cè)消積化蟲(chóng)散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的處方工藝，制備不含白術(shù)（炒）、茯苓的樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A為乙腈-甲醇（1∶1），B為0.05％磷酸溶液，梯度洗脫（程序見(jiàn)表1）［3-6］；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm［7-8］（0～36 min）、276 nm［9-10］（37～45 min）、210 nm［11-12］（46～80 min）；體積流量1.1 mL/min；柱溫25℃；進(jìn)樣量20 μL。

表1　梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution program s

3 方法學(xué)考察

3.1 系統(tǒng)適用性考察 分別取樣品、混合對(duì)照品、白術(shù)空白和茯苓空白溶液適量，注入液相色譜儀分析，見(jiàn)圖1。由圖可知，白術(shù)空白溶液色譜圖中，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的出峰位置處均無(wú)干擾；茯苓空白溶液色譜圖中，去氫土莫酸、去氫茯苓酸和茯苓酸的出峰位置處也均無(wú)干擾，6種成分可與其相鄰峰完全分離。

3.2 線(xiàn)性范圍考察 分別精密吸取對(duì)照品貯備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，甲醇稀釋成系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣20 μL測(cè)定，記錄峰面積。然后，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2，表明6種成分在各自范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系均良好。

表2　6種成分的線(xiàn)性關(guān)系Tab.2 Linear relationships of six constituents

3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一批號(hào)（140406）供試品溶液適量，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μL，測(cè)得峰面積RSD值分別為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ1.16％、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0.91％、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ1.56％、去氫土莫酸0.87％、去氫茯苓酸1.01％、茯苓酸0.38％，表明儀器精密度良好。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)140406）適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣20 μL分析。結(jié)果，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、去氫土莫酸、去氫茯苓酸和茯苓酸的平均含有量分別為0.144、0.111、0.049、0.153、0.108、0.384 mg/g，RSD分別為0.59％、1.05％、1.46％、0.61％、1.19％、0.44％，表明該方法重復(fù)性良好。

1.白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 2.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ 3.白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ 4.去氫土莫酸5.去氫茯苓酸 6.茯苓酸1.atracylenolideⅢ 2.atracylenolideⅠ 3.atracylenolideⅡ 4.dehydrotumulosic acid 5.dehydropachymic acid 6.pachymic acid圖1　HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（140406）供試品溶液適量，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，測(cè)得峰面積RSD值分別為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ1.15％、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0.86％、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ1.34％、去氫土莫酸0.91％、去氫茯苓酸1.39％、茯苓酸0.53％，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.6 回收率試驗(yàn) 取6份含有量已知的消積化蟲(chóng)散（批號(hào)140406，6種成分含有量分別為0.143、0.112、0.049、0.151、0.108、0.386 mg/g）適量，研磨成細(xì)粉，精密稱(chēng)取5.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液和甲醇各25 mL，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果Fig.3 Results of recovery tests

4 含有量測(cè)定

取3批樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　含有量測(cè)定結(jié)果（mg/g，n=3）Tab.4 Results of content determ ination（mg/g，n=3）

5 討論

5.1 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-0.05％磷酸溶液、乙腈-0.05％磷酸溶液、乙腈-0.1％磷酸溶液、乙腈-甲醇（1∶1）與0.05％磷酸溶液流動(dòng)相，以各色譜峰的出峰時(shí)間、峰形和分離度效果為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果，以乙腈-甲醇（1∶1）與0.05％磷酸溶液梯度洗脫時(shí)，各指標(biāo)最佳，故選擇乙腈-甲醇（1∶1）與0.05％磷酸溶液作為流動(dòng)相。

5.2 提取條件的選擇

5.2.1 提取溶劑 本實(shí)驗(yàn)以水、50％、75％和100％甲醇為提取溶劑，以提取效率為指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果，以甲醇為溶劑時(shí)，各成分提取效率最高，故選擇甲醇作為提取溶劑。

5.2.2 提取方式 本實(shí)驗(yàn)考察了加熱回流提取和超聲提取方式，以樣品中6種成分的提取效率為指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果，加熱回流提取的效果明顯優(yōu)于超聲提取，故選擇加熱回流提取。

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Simultaneous determ ination of six constituents in Xiaoji Huachong Powder by HPLC-DAD

LIChao-jun， GU Zhi-hua*
（DePartment of pharmacy，ShanghaiMuniciPal pulmonary HosPital Affiliated to Tongji University，Shanghai200433，China）

ABSTRACT：AIM To establish a high performance liquid chromatography-diotron array detection（HPLCDAD）method for simultaneously determining the contents of atracylenolideⅢ，atracylenolideⅠ，atracylenolideⅡ，dehydrotumulosic acid，dehydropachymic acid and pachymic acid in Xiaoji Huachong Powder（Atractylodes macrocePhala，poria cocos，Quisqualis indica kernel，etc.）.METHODS The analysiswas performed on a Hypersil C18column with its temperature maintained at 25℃，mobile phase comprising of acetonitrile-methanol（1∶1）（A）-0.05％phosphoric acid solution（B）in a gradient elution manner，flow rate of1.1 mL/min，and detection wavelengths of 210 nm for dehydrotumulosic acid，dehydropachymic acid and pachymic acid，220 nm for atracylenolideⅠand atracylenolideⅢ，and 276 nm for atracylenolideⅡ.RESULTS Six constituents showed good linear relationships，whose average recoveries（n =6）were 96.8％-99.4％with the RSDs of0.66％-1.48％. CONCLUSION This simple，accurate and rapid method is suggested for the quality control of Xiaoji Huachong Powder.

KEY WORDS：Xiaoji Huachong Powder；atracylenolideⅢ；atracylenolideⅠ；atracylenolideⅡ；dehydrotumulosic acid；dehydropachymic acid；pachymic acid；HPLC-DAD

*通信作者：顧志華（1984—），男，藥師，從事中成藥質(zhì)量研究。Tel：13761787515，E-mail：86874904@qq.com

作者簡(jiǎn)介：李朝駿（1982—），男，藥師，從事藥事管理及藥物質(zhì)量研究。Tel：13818291243，E-mail：lichaojun-82@sina.com

收稿日期：2015-11-12

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.015

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）05-1040-04