韋會平 趙牧 田金鳳 李勇 劉文權(quán) 王丹 何妍羲

摘要：【目的】了解四川攀西干熱河谷地區(qū)芒果葉中芒果苷含量的變化規(guī)律，為該地區(qū)優(yōu)質(zhì)芒果種植基地的芒果葉開發(fā)利用及芒果苷產(chǎn)品研發(fā)提供參考依據(jù)?！痉椒ā坎捎酶咝б合嗌V（HPLC）標(biāo)準(zhǔn)曲線法，按《中華人民共和國藥典（一部）》要求對采集的各芒果葉樣品進(jìn)行精密測定，分析比較不同產(chǎn)地、品種、老嫩程度、生長季節(jié)和儲藏期芒果葉中芒果苷含量的差異。【結(jié)果】四川攀西地區(qū)芒果葉中芒果苷含量分別比海南三亞和廣西百色地區(qū)高0.8和1.7倍；品種對芒果葉中芒果苷含量有極顯著影響（P<0.01，下同），以乳芒最高（6.35%），其次為金白花（4.63%）和攀育2號（4.61%），最低為紅蘋（1.41%）；葉片越嫩，其芒果苷含量越高，嫩葉中芒果苷含量分別是成熟葉、老葉和黃落葉的1.5、2.2和6.2倍；初花期和盛果期葉片中芒果苷含量極顯著高于休眠期和營養(yǎng)生長期；在儲藏的前3個月，芒果葉中芒果苷含量無顯著變化（P>0.05），從第6個月開始極顯著下降，儲藏1年左右的芒果葉中芒果苷含量下降約53%?！窘Y(jié)論】產(chǎn)地、品種、季節(jié)、老嫩程度和儲藏期均對芒果葉中芒果苷含量有顯著影響，可選擇攀西地區(qū)的乳芒、金白花、攀育2號等品種初花期至盛果期的嫩葉或成熟葉作為芒果苷提取的優(yōu)質(zhì)原料。

關(guān)鍵詞： 芒果葉；芒果苷；含量變化；攀西地區(qū)

中圖分類號： S646.19 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2016）12-2134-05

Abstract：【Objective】The present study was conducted to investigate the variation rules of mangiferin of mango leaves in dry-hot valley area in Panxi region， Sichuan province， in order to provide references for exploitation of mango leaves and development of mangiferin products in mango planting areas in Panxi region. 【Method】Using high performance liquid chromatography（HPLC） standard curve method， collected mango leaf samples were determined accurately according to standards in Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China（Part One）. Mangiferin contents in mangos of different producing areas， varieties， maturities， growth seasons and storage periods were analyzed. 【Result】The mangiferin content in mango leaves in Panxi region was 0.8 times more than that in Sanya and 1.7 times more than that in Baise. Variety made significant difference（P<0.01， the same below） in mangiferin content in mango leaves. Mangiferin content in Milk Mans was the highest（6.35%）， followed by White Gold（4.63%） and PY2（4.61%）； it was the lowest in Red Apple（1.41%）. The older the mango leaves became， the less mangiferin content was detected. Mangiferin content in tender leaves was as 1.5 times as that in mature leaves， 2.2 times in old leaves and 6.2 times in defoliation. Mangiferin contents at flowering period and fruiting period were significantly higher than those at dormancy period and nutrient growing period. In the first three months of storage， there was no significant changes（P>0.05） in mangiferin contents. From the sixth month of storage， the mangiferin contents started to decline and decreased by 53% after one year of storage. 【Conclusion】Producing area， variety， maturity， growth season and storage period can influence mangiferin contents in mango leaves significantly. Tender leaves and mature leaves of Milk Mans， White Gold and PY2 at flowering period and fruiting period in Panxi region are quality materials for mangiferin extraction.

Key words： mango leaves； mangiferin； content variation； Panxi region

0 引言

【研究意義】四川省攀枝花市和西昌市低山區(qū)（合稱攀西地區(qū)）地處南亞熱帶干熱河谷氣候帶，該地區(qū)種植的芒果具有纖維少、味甜芳香、質(zhì)地膩滑、營養(yǎng)豐富的優(yōu)良品質(zhì)，占據(jù)國內(nèi)晚熟芒果市場，被國家列為今后重點(diǎn)扶持發(fā)展的優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品商品生產(chǎn)基地。芒果葉中富含芒果苷（鄒登峰等，2010；胥秀英等，2011），芒果苷具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、降血糖、降尿酸、護(hù)肝利膽、祛痰止咳、抗炎鎮(zhèn)痛等多種藥理作用（Pardo-Andreu et al.，2006；黃瀟和彭志剛，2007；鄧家剛等，2008；Lee et al.，2009；Hou et al.，2010；Viswanadh et al.，2010），是我國藥典中規(guī)定的多種傳統(tǒng)中藥材和中成藥的質(zhì)量指標(biāo)控制成分。因此，了解攀西干熱河谷地區(qū)芒果葉中芒果苷含量變化規(guī)律，對充分利用攀西干熱河谷地區(qū)豐富的芒果葉資源及研發(fā)芒果苷產(chǎn)品具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前已有不少學(xué)者對芒果葉中的芒果苷含量進(jìn)行對比研究，且研究對象主要為廣西芒果品種。李學(xué)堅和鄧家剛（2007）比較廣西田陽縣芒果樹不同部位的芒果苷含量，結(jié)果表明，以嫩芽和葉片中含量最高（>1%），而莖、皮、根和果實中含量均在1%以下。鄒登峰等（2010）對廣西百色和南寧地區(qū)8個品種芒果葉中芒果苷含量進(jìn)行測定分析，結(jié)果表明，芒果葉中芒果苷含量均在1%以上，但不同品種芒果葉中芒果苷含量存在極顯著差異。胥秀英等（2011）對芒果果實不同部位的芒果苷含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明果皮及果肉中芒果苷含量均低于0.03%。謝宇奇等（2014）采用紫外—可見吸收光譜法測定廣西百色11個芒果品種葉片中的芒果苷含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芒果苷含量范圍為11.493～16.675 μg/mL，品種間差異不明顯。楊克沙等（2014）利用高效液相色譜法測定云南16個芒果品種的葉、果皮和果肉中芒果苷含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芒果葉中芒果苷含量最高，芒果肉中含量最低，以元江虎豹牙芒果葉中芒果苷含量最高。【本研究切入點(diǎn)】攀西干熱河谷地區(qū)種植的芒果多為晚熟品種，而我國廣西、海南等地區(qū)多種植早熟芒果品種。目前，尚無有關(guān)攀西干熱河谷氣候條件下晚熟芒果的芒果苷含量變化規(guī)律的研究報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】對不同產(chǎn)地、品種、老嫩程度、生長季節(jié)和儲藏期的芒果葉中芒果苷含量進(jìn)行系統(tǒng)比較分析，掌握攀西干熱河谷氣候條件下芒果葉中芒果苷含量及其變化規(guī)律，為芒果苷產(chǎn)品研發(fā)及芒果葉的綜合開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試材料為不同產(chǎn)地、品種、老嫩程度、生長季節(jié)和儲藏期的芒果葉。芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號100268- 200401，純度98.2%）購自中國藥品生物制品檢定所；高效液相色譜（HPLC）流動相用乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為國產(chǎn)分析純。主要儀器設(shè)備：Agilent 1200高效液相色譜儀、Agilent 1200高效液相色譜儀工作站（美國Agilent公司），XS205DU電子天平（梅特勒—托利多儀器有限公司），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上?，槴\實驗設(shè)備有限公司），F(xiàn)S-6D流水式粉碎機(jī)（廣州雷邁機(jī)械設(shè)備有限公司），SYU-3-100D超聲波提取器（鄭州生元儀器有限公司）。

1. 2 試驗設(shè)計

1. 2. 1 不同產(chǎn)地芒果葉的芒果苷含量比較 分別從四川省攀枝花市東區(qū)新九鄉(xiāng)、廣西百色市田東縣平馬鎮(zhèn)和海南省三亞市崖城鎮(zhèn)3個產(chǎn)地采集凱特芒果初花期枝條中部的成熟葉片，測定比較不同產(chǎn)地芒果葉中芒果苷含量。

1. 2. 2 不同品種芒果葉的芒果苷含量比較 從攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院芒果種植園中分別采集乳芒、吉祿、鷹嘴芒、熱研16號、攀育2號、紅蘋、金白花、貴妃、海頓、馬亞、凱特、熱農(nóng)10號和椰香13個品種芒果的初花期枝條中部成熟葉片，測定比較不同品種芒果葉中芒果苷含量。

1. 2. 3 不同老嫩程度芒果葉的芒果苷含量比較 從攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院芒果種植園中分別采集凱特芒果樹初花期的地上黃落葉（簡稱黃落葉）、枝條下部老葉片（簡稱老葉）、枝條中部成熟葉（簡稱成熟葉）和枝條頂端嫩葉（簡稱嫩葉），測定比較不同老嫩程度芒果葉中芒果苷含量。

1. 2. 4 不同生長季節(jié)芒果葉的芒果苷含量比較 從攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院芒果種植園中分別采集凱特芒果樹休眠期、營養(yǎng)生長期、初花期和盛果期4個生長期的成熟葉，測定比較不同生長季節(jié)芒果葉中芒果苷含量。

1. 2. 5 不同儲藏期芒果葉的芒果苷含量比較 從攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院芒果種植園中采集凱特芒果樹初花期成熟葉，自然曬干，室溫遮光自然堆放儲存于室內(nèi)，分別在剛采集及儲存后的第3、6、9和12個月測定芒果葉中芒果苷含量。

1. 3 芒果苷含量測定

按照《中華人民共和國藥典（一部）》方法（國家藥典委員會，2015），采用HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定芒果葉中芒果苷含量。

1. 3. 1 樣品處理 將各芒果葉樣品于60 ℃烘干，過60目篩；精密稱取約0.l g樣品置于具塞錐形瓶中，加入25 mL 30%乙醇，精密稱定重量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz）30 min，冷即后再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液進(jìn)行測定。

1. 3. 2 色譜條件 Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15/85，v/v）；檢測波長258 nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣量20 μL。

1. 3. 3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 用芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品配制質(zhì)量濃度分別為0.039、0.078、0.156、0.312和0.624 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按1.3.2條件繪制芒果苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 3. 4 重復(fù)性檢驗 取已準(zhǔn)確測定含量的芒果葉供試樣品溶液，每隔24 h按上述方法測定1次，連續(xù)測定5次，進(jìn)行重復(fù)性檢驗。

1. 3. 5 加樣回收率測定 在已準(zhǔn)確測定含量的芒果葉樣品溶液中分別加入一定量對照品，測定加樣回收率。

1. 4 統(tǒng)計分析

每個樣品的含量測定進(jìn)行3次重復(fù)，根據(jù)每個樣品溶液中芒果苷含量和樣品量的比值計算芒果葉中芒果苷的含量，并用SPSS 19.0（LSD法）對各樣品中芒果苷含量進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 測定方法的考察及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按1.3方法測定芒果葉樣品中芒果苷含量，所得芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品和供試樣品的色譜峰見圖1。芒果苷色譜峰和相鄰色譜峰的分離度可達(dá)1.5以上，理論板數(shù)在6000以上，符合藥典測定要求（國家藥典委員會， 2015）。繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=28203x+277.07（R2=0.9991），線性范圍0.039～0.624 mg/mL，表明線性關(guān)系良好，測定方法可靠。

2. 2 重復(fù)性檢驗結(jié)果

重復(fù)性檢測結(jié)果表明，5次重復(fù)測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.93%，小于2.00%，表明HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線法重復(fù)性良好。

2. 3 加樣回收試驗結(jié)果

由表1可知，以HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定芒果葉中芒果苷含量的回收率為98.5%～103.0%，平均回收率為100.7%，總體準(zhǔn)確度較高。

2. 4 產(chǎn)地對芒果葉中芒果苷含量的影響

3個產(chǎn)地的凱特芒初花期成熟葉片中芒果苷含量對比測定結(jié)果見表2，不同產(chǎn)地間芒果苷含量有極顯著差異（P<0.01，下同），其中攀枝花地區(qū)芒果葉中芒果苷含量分別比三亞和百色地區(qū)高0.8和1.7倍。

2. 5 品種對芒果葉中芒果苷含量的影響

13個芒果品種初花期成熟葉片中芒果苷含量對比測定結(jié)果見表3，不同品種間芒果苷含量存在極顯著差異。其中，乳芒芒果葉的芒果苷含量最高（6.35%），其次為金白花（4.63%）和攀育2號（4.61%），含量最低的是紅蘋（1.41%）。在攀西地區(qū)栽培面積最大的凱特芒芒果葉中芒果苷含量僅為2.24%，在13個品種中排第十。

2. 6 老嫩程度對芒果葉中芒果苷含量的影響

凱特芒初花期不同老嫩程度葉片中芒果苷含量測定結(jié)果見表4，不同老嫩程度芒果葉中芒果苷含量有極顯著差異，葉片越嫩其芒果苷含量越高。嫩葉中芒果苷含量分別是成熟葉、老葉和黃落葉的1.5、2.2和6.2倍。

2. 7 生長季節(jié)對芒果葉中芒果苷含量的影響

凱特芒不同生長季節(jié)成熟葉片中芒果苷含量測定結(jié)果見表5，不同生長季節(jié)芒果葉中芒果苷含量有一定差異，其中初花期和盛果期的葉片中芒果苷含量無顯著差異（P>0.05，下同），但二者極顯著高于休眠期和營養(yǎng)生長期。

2. 8 儲藏期對芒果葉中芒果苷含量的影響

凱特芒不同儲藏期成熟葉片中芒果苷含量測定結(jié)果見表6，在儲藏的前3個月，葉片中芒果苷含量無顯著變化，但從第6個月開始芒果苷含量極顯著下降，儲藏1年左右的芒果葉中芒果苷含量下降約53%。

3 討論

本研究結(jié)果表明，攀枝花芒果葉的芒果苷含量遠(yuǎn)高于三亞的芒果葉，而三亞芒果葉的芒果苷含量遠(yuǎn)高于百色的芒果葉。根據(jù)氣象資料，攀西干熱河谷區(qū)全年日照時數(shù)長達(dá)2500 h以上，位居全國第二（僅低于拉薩地區(qū)），且年均太陽輻射總量（日照強(qiáng)度）在6000 MJ以上，全年最高晝夜溫差達(dá)13 ℃以上。一般來說，日照越強(qiáng)，晝夜溫差越大，就越有利于植物中次生代謝產(chǎn)物的積累。因此，攀西地區(qū)芒果葉中芒果苷含量遠(yuǎn)高于其他地區(qū)，很可能與當(dāng)?shù)爻渥愕娜照蘸洼^大的晝夜溫差有關(guān)。

李學(xué)堅和鄧家剛（2007）、鄒登峰等（2010）對廣西地區(qū)不同品種芒果葉中芒果苷含量進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)不同品種芒果葉的芒果苷含量間存在顯著差異，本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果基本相同，攀西地區(qū)不同品種芒果葉中芒果苷含量有較大差異。乳芒芒果葉的芒果苷含量最高（6.35%），但乳芒為攀西地區(qū)傳統(tǒng)種植老品種，果實品質(zhì)欠佳，近年來在逐步淘汰，目前在該地區(qū)種植面積不足67 ha。攀西地區(qū)種植面積最大的芒果品種是凱特芒，已達(dá)2萬多ha，但凱特芒葉片中芒果苷含量并不高（2.24%）。攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院新選育的攀育2號和大力推廣的金白花芒果葉的芒果苷含量均較高，其葉片具有較高的藥用價值。乳芒等傳統(tǒng)芒果老品種的葉片中芒果苷含量極高，具有獨(dú)特的藥用價值，值得進(jìn)一步保留和研究。

葉片老嫩程度對芒果葉中芒果苷含量有極顯著影響，嫩葉中芒果苷含量遠(yuǎn)高于老葉和黃落葉。因此，用于芒果苷提取的芒果葉最好選用每年芒果園修枝剪下的嫩葉和成熟葉。此外，也可在休眠季前后采集芒果樹枝條下部的老葉作為芒果苷提取的原料。而黃落葉芒果苷含量低，利用價值小。

生長季節(jié)對芒果葉中芒果苷含量也有顯著影響，初花期和盛果期葉片中芒果苷含量極顯著高于休眠期和營養(yǎng)生長期。但從總體上看，生長季節(jié)對芒果苷含量影響有限，仍可選擇在盛果期后至休眠期芒果葉作為芒果苷提取的原料。

儲藏時間對芒果葉中芒果苷含量也有顯著影響。在儲藏的前3個月，芒果苷含量變化小，但從第6個月開始芒果苷含量顯著下降。因此，用于提取芒果苷的芒果葉在采集后3個月內(nèi)使用為宜。

目前，市面上的芒果苷主要從中藥材知母中提取。知母中芒果苷含量一般在0.70%以上，最高也未超過1.50%（吳薛明等，2011；鄧海鳴等，2013）。而芒果葉中芒果苷含量高于知母，即使休眠期的老芒果葉的芒果苷含量大多也在1.50%以上，且芒果葉的價格遠(yuǎn)低于知母藥材，故從芒果葉中獲取芒果苷是最低廉高效的途徑。

4 結(jié)論

產(chǎn)地、品種、季節(jié)、老嫩程度和儲藏期均對芒果葉中芒果苷含量有顯著影響，攀西地區(qū)芒果葉中芒果苷含量遠(yuǎn)高于我國其他地區(qū)，可選擇該地區(qū)的乳芒、金白花、攀育2號等品種初花期至盛果期的嫩葉或成熟葉作為芒果苷提取的優(yōu)質(zhì)原料。

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（責(zé)任編輯 羅 麗）