道日娜

(內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 阿拉善 450306)

蒙藥地格達(dá)屬的指紋圖譜比較研究

道日娜

(內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 阿拉善 450306)

目的：建立地格達(dá)屬藥材的HPLC指紋圖譜，為其藥材質(zhì)量評價提供依據(jù)。方法：以龍膽苦苷為參照物，采用高效液相色譜法，對4種地格達(dá)進(jìn)行了指紋圖譜分析。采用CenturySILC18-EPS5μm250×4.6mm的色譜柱，流動相：甲醇：乙腈：水(0.1%磷酸)進(jìn)行梯度洗脫，流速：0.8mL,檢測波長：270nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μL。結(jié)果：該方法精密度高，重現(xiàn)性好，共分離了12個指紋峰。結(jié)論：不同地格達(dá)藥材的內(nèi)在質(zhì)量存在差異，該方法可用于地格達(dá)屬藥材的質(zhì)量控制。

蒙藥地格達(dá)屬藥材;指紋圖譜;高效液相;質(zhì)量控制

蒙藥材扁蕾(哈日-特木日-地格達(dá))為龍膽科植物扁蕾Gentianopsis barbata (Froel.)Ma的干燥全草。扁蕾分布于我國東北、華北、西部地區(qū)。春、夏季采收,除去雜質(zhì)陰干。味苦，性寒、鈍、糙、輕、燥。具有平息“協(xié)日”,清熱,愈傷之功效。蒙醫(yī)多用于治療 “協(xié)日”引起的頭痛,“協(xié)日”熱,中暑,黃疸,肝熱,傷熱等癥。

蒙藥花錨(希依日一地格達(dá))為龍膽科植物花錨Halenia corniculata(L.)Cornaz.的干燥全草?；ㄥ^分布于我國東北、華北及陜西等地。夏、秋季采收，晾干。味苦，性寒。具有平息協(xié)日、清熱、愈傷的功能。用于目黃，口苦，高燒，頭痛，尿黃，協(xié)日熱，傷熱，脈熱等癥[3]。

蒙藥肋柱花(哈畢日干·地格達(dá))為龍膽科植物肋柱花Lo-matogonium rotatum( L. ) Fries ex Nym的全草。肋柱花分布于我國東北、華北、西北至西南等地。夏、秋季采收，曬干。味苦,性寒。具有平息“協(xié)日”,清熱,健胃,愈傷等功能。用于瘟疫,流感,傷寒,中暑頭痛,肝膽熱,黃疸,胃“協(xié)日”,傷熱等[4]。

蒙藥濕生扁蕾(那木格音-哈日-特木日-地格達(dá))為龍膽科植物濕生扁蕾Gentianopsis paludosa(Hook.f.)Ma的全草。濕生扁蕾分布于我國華北、西北及四川、云南、西藏等地。夏季采收，洗凈，晾干。味苦，性寒。具有平息“協(xié)日”,清熱清瘟熱，利膽，止瀉等功效。用于黃疸型肝，肝膽病引起的發(fā)熱，感冒，小兒腹瀉等。

4個品種的地格達(dá)類蒙藥材在臨床上廣泛代替應(yīng)用,其質(zhì)量的好壞直接關(guān)系著人們的健康,但是目前市場上對地格達(dá)屬的質(zhì)量控制還缺少科學(xué)的依據(jù),難以鑒別真?zhèn)?。由于蒙藥的藥效不是來自任何單一活性成分，而是多種活性成分的協(xié)同綜合作用。因此，僅采用單一化學(xué)成分的定性定量來評價蒙藥質(zhì)量已不能滿足對蒙藥質(zhì)量控制的要求。由于指紋圖譜能夠從宏觀和整體上表征蒙藥材的特征，目前已成為國際上公認(rèn)的控制天然藥物質(zhì)量的有效手段。為了臨床療效的穩(wěn)定及其藥品質(zhì)量,采用了高效液相色譜法對蒙藥地格達(dá)屬藥材的指紋圖譜進(jìn)行了研究，為地格達(dá)屬藥材的鑒別和質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(出廠編號：C20974335270CS型號規(guī)格：LC-10AT/SPD-10A中國、生產(chǎn)廠家：島津—蘇州)，SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，電子天平(上海天平儀器廠)，KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

甲醇、乙腈、磷酸(分析純和色譜純)，純凈水，龍膽苦苷對照品。樣品共收集了10個批次樣品。

表1 地格達(dá)屬藥材收集情況

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件色譜條件： 采用CenturySILC18-EPS5um250×4.6mm的色譜柱，流動相為甲醇：乙腈：水(0.1%磷酸)進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8mL,檢測波長為270nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL。

表2 流動相梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取對照品龍膽苦苷2mg置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成對照品儲備液，使用時稀釋成所需濃度。

2.3 供試品溶液的制備：精密稱取扁蕾，花錨，濕生扁蕾，肋柱花各2g，用40mL甲醇回流提取4h，提取水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10mL，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

3 方法學(xué)與考察

3.1 精密度試驗(yàn)：取扁蕾供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，檢測指紋圖譜。結(jié)果表明各色譜峰的相對保留時間的RSD為0.33%～1.03%，符合指紋圖譜的要求。

3.2 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取扁蕾按供試品溶液的制備方法分別制備6分供試品溶液，檢測指紋圖譜。結(jié)果各色譜峰的相對保留時間的RSD為0.36%～2.1%，符合指紋圖譜的要求。

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取扁蕾供試品溶液，分別于0，3，6，9，12，15h進(jìn)行檢測，結(jié)果表明各色譜峰的RSD為0.37%～0.83%，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，符合指紋圖譜的要求。

4 指紋圖譜的建立及分析

4.1 指紋圖譜的建立：確定12個特征峰構(gòu)成扁蕾的指紋圖譜。其中保留時間為27.890min的色譜峰為龍膽苦苷的峰。見圖。

4.2 不同地格達(dá)藥材的色譜指紋圖譜測定：共收集了不同批次和地格達(dá)的藥材10批，其中扁蕾1批，濕生扁蕾3批，花錨3批，肋柱花3批。按照上述確定的供試品制備方法及色譜條件，測定了所有10批樣品的色譜圖。結(jié)果(見圖)

4.3 直觀比較： 對10批不同采集時間和列別的地格達(dá)藥材的HPLD色譜圖的分析，發(fā)現(xiàn)不同列別的地格達(dá)藥材之間的HPLC色譜圖相差很大，而且與采集時間也不存在必然的聯(lián)系。

4.4 相似度評價： 計算10批藥材中各色譜峰的相對保留時間,共確定了12個共有指紋峰,各指紋峰的相對保留時間RSD值均小于2.1%,其中5號峰為龍膽苦苷峰.通過對已檢測的10批藥材指紋圖譜分析,選擇共有峰面積較大的圖譜作為對照圖譜,并用相關(guān)系數(shù)的計算與夾角余弦計算法計算10批藥材的指紋圖譜的相似度

表3 相似度評價結(jié)果

5 結(jié)論

從本實(shí)驗(yàn)看出10批地格達(dá)藥材HPLC指紋圖譜存在一定差異,從相似度評價結(jié)果表明，不同地格達(dá)的相似度計算結(jié)果均在0.89以上，采集時間的差異不明顯。但從測定的10批地格達(dá)藥材共有峰的峰面積比值來看，不同地格達(dá)所含成分的含量差異較大，在地格達(dá)藥材質(zhì)量控制方面需進(jìn)一步深入研究，使之更能有效地反映藥材的品質(zhì)，為蒙藥采的質(zhì)量控制提供有效的信息。

2016年8月17日收稿

Study on chromatography fingerprint comparison of Mongolian medicine of Digeda

Dorina

Purpose：Establishing the chromatography fingerprint of medicinal materials of Digeda to provide a basis for evaluation of its quality. Method: With Gentiopicroside as reference, using high performance liquid chromatography, to ground up to be the fingerprint analysis.Chromatographic conditions as follows: CenturySILC18-EPS5um250x4.6mm chromatography columns,: CH3OH:C2H3N:H2O as elution solvents;go on gradient,a flow rate of 0.8ml/min, an ultraviolet detector at 270nm, temperature of 30℃ , Enter sample quantity of 10ul.Results：The method of high precision, reproducibility, and separation of a total of 12 fingerprint peaks. Conclusion： Inherent quality differences of different herbs, the method can be used to reach an herbal medicine quality control. Key words: Mongolian medicine of herbal medicine; chromatographic fingerprint; high performance liquid chromatography; quality control.

R291.2

B

1006-6810(2016)12-0056-03