王小新，劉　沖，趙　璐，周曉英(新疆烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院南門二部藥劑科，烏魯木齊　8000;新疆師范大學化學化工學院，烏魯木齊　80054;新疆醫(yī)科大學藥學院，烏魯木齊　800)

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對葉大戟總多酚超聲提取工藝的研究

王小新1，劉沖2，趙璐3，周曉英3
(1新疆烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院南門二部藥劑科，烏魯木齊830001;2新疆師范大學化學化工學院，烏魯木齊830054;3新疆醫(yī)科大學藥學院，烏魯木齊830011)

摘要:目的研究優(yōu)選對葉大戟總多酚乙醇超聲提取的工藝。方法采用單因素考察及正交試驗設(shè)計，以沒食子酸的含量為考察指標優(yōu)選對葉大戟總多酚提取工藝。結(jié)果對葉大戟總多酚超聲提取工藝選擇為70%的乙醇，藥液比1∶40，超聲時間30 min，超聲溫度40℃。結(jié)論此方法提取對葉大戟中總多酚效率高、結(jié)果穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞:超聲提取;對葉大戟;總多酚;正交試驗

Study on ultrasonic extraction procedure of total polyphenols in Euphorbia sororia A．

WANG Xiaoxin1，LIU Chong2，ZHAO Lu3，ZHOU Xiaoying3
(1Department of Pharmacy，Branch of Nanmen，Xinjiang TCM Hospital of Urumqi，Urumqi830001，China;2School of Chemistry and Chemical Engineering，Xinjiang Normal University，Urumqi830054，China;3School of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi830011，China)

Abstrac:Objective To optimize the ethanol ultrasonic extraction process for total polyphenols from Euphorbia sororia A．M ethods By using single－factor test and orthogonal test design，put the content of gallic acid as investigation index to optimize the extraction process for total polyphenols from Euphorbia sororia A．Results The ultrasonic optimum condition for the extraction of total polyphenols from Euphorbia sororia A was 30 min at 40℃with the amount of70%ethanol，and 1:40 of solid－liquid ratio．Conclusion The ultrasonic optimum condition was efficient and stable．

Keywords:ultrasonic extraction;Euphorbia sororia A．;total polyphenols;orthogonal test

維藥對葉大戟(Euphorbia sororia A．)為大戟科大戟屬一年生草本植物，以全草入藥，主要分布于我國新疆和田和中亞地區(qū)，在維吾爾醫(yī)中是一味常用藥材，具有利水消腫、降壓清腦、瀉下雜蟲的功效，多用于大便秘結(jié)、尿頻、高血壓頭痛、肝硬化、水腫以及疥瘡腫痛等病癥［1］。對葉大戟中主要含有多酚、黃酮類化合物，以山柰酚3-O-吡喃葡萄糖苷、莨菪亭、β-谷甾醇為代表的多酚類成分是對葉大戟抗菌、降血脂、抗衰老和抗病毒的主要有效成分［2－3］。為了充分提取對葉大戟中的有效成分，采用單因素考察及正交試驗設(shè)計［4－7］，本研究對對葉大戟中的總多酚提取工藝進行了研究，確定了適合對葉大戟中總多酚提取的工藝，報道如下。

1　儀器與材料

1．1實驗儀器U-3310型紫外可見分光光度儀(日本株式會社日立高新技術(shù)那珂事業(yè)所); KQ2200DE型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司);Anke TDL-40B離心機(上海安亭科學儀器廠);DG160C型中藥粉碎機(浙江省瑞安市春海藥材器械廠);FA1004N電子天平(上海菁海儀器有限公司)。

1．2實驗材料沒食子酸標準品(成都市科龍化工試劑廠，批號:20130415);對葉大戟藥材(新疆奇康哈博維藥有限公司，批號:130816)，F(xiàn)olin-Cioealteu試劑(磷鉬鎢酸試液自制)，無水乙醇、碳酸鈉均為分析純，水為去離子水。

2　方法與結(jié)果

2．1對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸標準品10mg于100 mL棕黃色容量瓶中，蒸餾水溶解定容至刻度，濃度為0．1 mg/mL，備用。

2．2供試品溶液的制備精密稱取干燥的對葉大戟藥材粉末1 g，置于100mL錐形瓶中，加入60%的乙醇溶液30 mL，溫度30℃，時間30 min，功率100 W，頻率40 KHz，過濾，將濾液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，去離子水定容至刻度，備用。

2．3最大吸收波長的測定取對照品溶液和供試品溶液各1 mL于25 mL比色管中，加入F-C試劑1 mL，再加入質(zhì)量分數(shù)為20%的碳酸鈉溶液2．0 mL，用去離子水定容至刻度線，搖勻，放置在50℃恒溫水浴鍋中，水浴40 min，在紫外波長500～800 nm范圍掃描，確定最大吸收波長為758 nm。

2．4標準曲線的配制與線性關(guān)系精密吸取沒食子酸對照品溶液0．1、0．2、0．3、0．4、0．5、0．6 mL置于10 mL棕色容量瓶中，按照“2．3”項下方法測定。以吸光度A為縱坐標，標品濃度C作為橫坐標作圖，并制作回歸曲線，得到回歸方程A=173．7C－0．004 3，r=0．999 1。按M(mg)=C×25 mL×4式進行含量計算，在0．001～0．006 mg/mL濃度范圍內(nèi)與沒食子酸測定的吸光度A的線性回歸良好。

2．5回收率試驗取已知含量的樣品6份，每份精密稱取1 g，精密加入一定量沒食子酸對照品溶液，按照“2．2”項下的方法制備供試品溶液，按照“2．3”項下方法測定，結(jié)果沒食子酸平均回收率為97．48%，RSD為2．10%。

2．6單因素試驗

圖1　乙醇濃度對對葉大戟總多酚提取率的影響

2．6．1乙醇濃度對提取率的影響精密稱取1 g藥材5份，乙醇濃度分別為50%、60%、70%、80%、90%，藥液比1:30，超聲40 min，超聲溫度50℃，超聲提取2次，計算提取率。結(jié)果乙醇濃度為70%時，總多酚提取率最高，見圖1。 2．6．2超聲溫度對提取率的影響精密稱取1 g藥材5份，乙醇濃度為70%，藥液比為1:30，超聲40 min，超聲溫度分別20℃、30℃、40℃、50℃、60℃進行超聲提取，提取2次，計算提取率。結(jié)果超聲溫度為40℃時，總多酚提取率最高，見圖2。

圖2　超聲溫度對對葉大戟總多酚提取率的影響

2．6．3藥液比對提取率的影響精密稱取1 g藥材5份，乙醇濃度70%，以藥液比分別為:1:10、1:20、1:30、1:40、1:50，超聲30 min，超聲溫度40℃，提取2次，計算提取率。結(jié)果藥液比1:40時，總多酚提取率最高，見圖3。

圖3　藥液比對對葉大戟總多酚提取率的影響

2．6．4超聲時間對提取率的影響精密稱取1 g藥材5份，乙醇濃度70%，藥液比1∶40，超聲溫度40℃，分別超聲20、30、40、50、60 min，提取2次，計算提取率。結(jié)果提取時間為40 min時，總多酚提取率最高，見圖4。

圖4　時間對對葉大戟總多酚提取率的影響

2．6．5正交試驗優(yōu)化選擇對葉大戟總多酚提取條件以乙醇濃度、藥液比、超聲溫度和超聲時間設(shè)計為正交試驗，由此建立正交試驗表(表1)。各因素對對葉大戟總多酚提取的影響主次順序為C＞D＞A＞B，即超聲溫度＞提取時間＞乙醇濃度＞藥液比。超聲溫度和提取時間為主要影響因素，乙醇濃度和藥液比次之，最佳提取工藝為A2B2C3D1，即體積分數(shù)70%的乙醇，藥液比為1:40，超聲溫度40℃，超聲時間為30 min，見表2、3。

表1　正交設(shè)計因素水平表

表2　正交試驗設(shè)計表及結(jié)果

表3　方差分析

2．6．6總多酚最佳工藝提取驗證試驗為考察上述工藝的穩(wěn)定性，精密稱取1 g藥材，按照該工藝條件A2B2C3D1進行重復性試驗3次，平均含量為11．163mg/g，RSD為0．049%，說明該提取工藝穩(wěn)定。

3　結(jié)論

本研究以乙醇濃度、藥液比、提取溫度和提取時間為影響因素，并采用正交試驗優(yōu)化工藝。篩選出對葉大戟中總多酚最佳提取工藝為A2B2C3D1，即體積分數(shù)70%的乙醇，藥液比為1:40，超聲溫度45℃，超聲時間為30 min。對最佳提取工藝進行驗證試驗，提取的對葉大戟中總多酚含量可達11．163 mg/ g，RSD為0．049%，實驗結(jié)果表明A2B2C3D1提取工藝簡單、穩(wěn)定性好，可為對葉大戟總多酚提取研究提供理論依據(jù)。

參考文獻:

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(本文編輯施洋)

［收稿日期:2015-9-10］

通信作者:周曉英，女，碩士，教授，碩士生導師，研究方向:天然藥物的質(zhì)量控制與活性的篩選研究，E-mail:zhouxiaoying4@163．com。

作者簡介:王小新(1970－)，女，本科，主管藥劑師，研究方向:中藥學基礎(chǔ)研究。

基金項目:新疆維吾爾自治區(qū)專利實施計劃項目(2012SS1021)

doi:10．3969/j．issn．1009-5551．2016．03．015

中圖分類號:R94

文獻標識碼:A

文章編號:1009-5551(2016)03-0324-03