林迪，孫長貴

(解放軍第117醫(yī)院檢驗科南京軍區(qū)醫(yī)學檢驗質(zhì)量控制中心，浙江杭州310013)

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寨卡病毒感染及其實驗室檢查

林迪，孫長貴

(解放軍第117醫(yī)院檢驗科南京軍區(qū)醫(yī)學檢驗質(zhì)量控制中心，浙江杭州310013)

摘要:非洲埃博拉疫情還沒完全結束，又一種蚊媒病毒－寨卡病毒在美洲出現(xiàn)暴發(fā)流行。2007年以前，寨卡病毒病在全球僅有14例散發(fā)病例。2015年5月以來，巴西發(fā)生大規(guī)模寨卡病毒感染疫情，美洲、非洲等其他30多個國家和地區(qū)也相繼報告出現(xiàn)寨卡病毒傳播；新年伊始，寨卡病毒陸續(xù)進入中國境內(nèi)，截止2016年2月26日，我國已發(fā)生6例輸入性寨卡病毒感染病例。由于寨卡病毒疫情爆發(fā)式蔓延，2016年2月1日，世界衛(wèi)生組織（WHO）把寨卡病毒感染列為國際緊急衛(wèi)生事故，引起了國際社會的廣泛關注。本文就該病毒的結構、生物學特性、流行病學、臨床表現(xiàn)、診斷與鑒別診斷和實驗室檢查等作簡要綜述。

關鍵詞：寨卡病毒；蚊媒病毒；小頭畸形；感染

寨卡病毒病是由寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）感染引起的，以發(fā)熱、皮疹、關節(jié)痛或結膜炎為主要臨床表現(xiàn)的自限性急性傳染病，主要通過埃及伊蚊叮咬傳播，極少引起死亡，但孕婦感染后可能會導致胎兒小頭畸形甚至死亡[1]。1947年，科學家首次在烏干達抓獲的用于黃熱病研究的獼猴中分離到ZIKV，而這些猴子聚居的雜草叢就被用來命名這種病毒；1952年，在烏干達和坦桑尼亞的人體中分離到ZIKV[2]。此后，多個國家有散發(fā)病例報道，但主要在全球熱帶及亞熱帶地區(qū)流行；2007年，首次在密克羅尼西亞的雅普島發(fā)生ZIKV疫情的暴發(fā)流行[3，4]，2013年10月，法屬波利尼西亞也發(fā)生大規(guī)模ZIKV暴發(fā)，約有29000人為疑似病例（約占總?cè)丝?0%）[5]；2015年5月，巴西發(fā)現(xiàn)首例本地感染病例，其后疫情持續(xù)發(fā)酵，直到發(fā)生了大規(guī)模疫情，至今已有150萬人感染ZIKV，另外，巴西衛(wèi)生部于2016年1月12日還通報了356例可能與ZIKV感染相關的小頭畸形病例；目前，非洲、美洲、亞洲和太平洋地區(qū)均有寨卡病毒病疫情暴發(fā)，ZIKV進一步呈現(xiàn)蔓延擴大和跨境傳播趨勢，因此引起了全球的廣泛關注。本文就ZIKV相關的結構和生物學特性、發(fā)病機制、流行病學、臨床表現(xiàn)、診斷與鑒別診斷和實驗室檢查等作簡要綜述。

1　寨卡病毒的結構和生物學特性

ZIKV是一種蚊媒病毒，屬黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，全基因長度約為11Kb，直徑40～70nm，有包膜，包含10794個核苷酸，編碼3419個氨基酸，ZIKV基因編碼3個結構蛋白[衣殼蛋白(C)、膜前體蛋白(prM)和包膜蛋白(M)]和7個非結構蛋白（NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5）。根據(jù)基因型分為非洲型和亞洲型，本次美洲流行的為亞洲型[3，6－8]。與ZIKV最密切相關的病毒是Spondweni病毒[9]。ZIKV的抵抗力不詳，但黃病毒屬的病毒一般不耐酸、不耐熱。60℃30min可滅活，70%乙醇、1%次氯酸鈉、脂溶劑、過氧乙酸等消毒劑及紫外線照射均可滅活[10]。

2　發(fā)病機制

目前ZIKV的發(fā)病機制還尚不明確。由于樹突狀細胞（DCs）是大多數(shù)蚊媒黃病毒感染的主要目標，部分科學家認為ZIKV最初是在DCs內(nèi)開始復制，隨后擴散到淋巴結和血液中[11]；還有一項研究在被ZIKV感染的細胞核中發(fā)現(xiàn)相應抗原，故ZIKV被認為是在細胞核中進行復制，這與其他黃病毒科病毒通常在細胞質(zhì)中復制的特點不同[12]；另外Rodolphe Hamel等人通過中和抗體和RNA沉默實驗證明人皮膚成纖維細胞容許ZIKV的復制，隨后誘導Toll樣受體3(TLR3)、RIG－I、MDA5以及一些干擾素刺激基因（包括OAS2、ISG15以及MX1）的轉(zhuǎn)錄，最后經(jīng)感染的皮膚成纖維細胞導致自噬小體的形成，自噬小體的存在與病毒復制作用的增強有很大關系[13]。

3　流行病學

ZIKV廣泛分布于非洲大陸北部以及許多東南亞國家，包括馬來西亞、印度、菲律賓、泰國、越南、印度尼西亞以及巴基斯坦[14－21]。ZIKV活動一直比較隱匿，僅在赤道周圍的非洲、美洲、亞洲和太平洋地區(qū)有寨卡病毒感染散發(fā)病例。近兩年，ZIKV先是在巴西興風作浪，而后又侵入南美洲，近期，它又沖出拉丁美洲。截至2016年1月，在非洲、亞洲、美洲以及太平洋島嶼上至少45個國家發(fā)現(xiàn)寨卡病毒傳播的證據(jù)，其中在南美洲有23個國家和地區(qū)正在流行。因為越來越多的證據(jù)表明ZIKV與小頭畸形之間的聯(lián)系，2016年1月15日，CDC發(fā)布旅行警告，建議孕婦考慮推遲前往以下國家和地區(qū)：巴西、哥倫比亞、薩爾瓦多、法屬圭亞那、危地馬拉、海地、洪都拉斯、馬提尼克島、墨西哥、巴拿馬、巴拉圭、蘇里南、委內(nèi)瑞拉和波多黎各自由邦。新年伊始，寨卡病毒陸續(xù)進入中國境內(nèi)，截止2016年2月26日，我國已發(fā)生6例輸入性寨卡病毒感染病例。根據(jù)監(jiān)測，我國與傳播ZIKV有關的伊蚊種類主要為埃及伊蚊和白紋伊蚊，其中埃及伊蚊主要分布于海南省、廣東省雷州半島以及云南省的西雙版納州、德宏州、臨滄市等地區(qū)；白紋伊蚊則廣泛分布于我國河北、山西、陜西以南廣大區(qū)；我國南方部分地區(qū)存在可傳播寨卡病毒的媒介伊蚊。隨著寨卡病毒的輸入，特別是在我國夏秋季節(jié)伊蚊密度較高的南方地區(qū)，不排除在局部地區(qū)發(fā)生本地傳播擴散的可能。

3.1傳染源和宿主范圍患者、隱性感染者和感染ZIKV的非人靈長類動物是該病的可能傳染源。

3.2傳播途徑[22－24]⑴各種伊蚊被認為是ZIKV的傳播媒介，主要為埃及伊蚊。通過伊蚊叮咬進行傳播，這是最主要的途徑。⑵母嬰傳播，包括宮內(nèi)感染和分娩時感染；乳汁中可檢測到寨卡病毒核酸，但尚無通過哺乳感染新生兒的報道。⑶血源傳播和性傳播罕見。

3.3易感人群人群普遍易感。曾感染過寨卡病毒

的人可能對再次感染具有免疫力。

4　臨床表現(xiàn)和病理特點[10]

寨卡病毒病臨床癥狀不明顯，但患者可能會出現(xiàn)類似于其他蟲媒病毒?。ǖ歉餆岷突卓涎艧幔┑呐R床癥狀，其潛伏期目前尚不清楚，現(xiàn)有資料顯示為3～12d，常見報道的癥狀包括皮疹（90%～95%）、發(fā)熱（65%～73%）、關節(jié)痛（65%～70%）以及非化膿性結膜炎（55%～63%）[4，7]。其他癥狀還包括肌肉痛、全身乏力以及頭痛，少數(shù)患者可出現(xiàn)腹痛、惡心、腹瀉、粘膜潰瘍、皮膚瘙癢等，癥狀持續(xù)2～7天緩解，預后良好，重癥與死亡病例罕見。小兒感染病例還可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)、眼部和聽力等改變。孕婦感染ZIKV可能導致新生兒小頭畸形甚至胎兒死亡。ZIKV感染可能還會增加格林－巴利綜合征（GBS）和新生兒小頭畸形的病例，但二者之間的因果關系尚未明確[25]。

5　診斷[10]

5.1診斷主要依據(jù)流行季節(jié)、地區(qū)、發(fā)病年齡等流行病學資料、臨床表現(xiàn)以及實驗室常規(guī)檢測結果進行診斷。

5.1.1診斷依據(jù)根據(jù)流行病學史、臨床表現(xiàn)和相關實驗室檢查綜合判斷。

5.1.1.1疑似病例⑴流行病學史：發(fā)病前14天內(nèi)在ZIKV感染病例報告或流行地區(qū)旅行或居住。⑵臨床表現(xiàn)：難以用其他原因解釋的發(fā)熱、皮疹、關節(jié)痛或結膜炎等。

5.1.1.2臨床診斷病例疑似病例且ZIKV IgM抗體檢測陽性。

5.1.1.3確診病例疑似病例或臨床診斷病例經(jīng)實驗室檢測符合下列情形之一者：⑴ZIKV核酸檢測陽性。⑵分離出ZIKV。⑶恢復期血清ZIKV中和抗體陽轉(zhuǎn)或者滴度較急性期呈4倍以上升高，同時排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染。

5.2鑒別診斷需要和以下疾病進行鑒別診斷：⑴主要與登革熱和基孔肯雅熱進行鑒別診斷。⑵其他：與微小病毒、風疹、麻疹、腸道病毒、立克次體病等相鑒別。

6　實驗室檢測[10]

6.1一般檢查血常規(guī)：部分病例可有白細胞和血小板減少。

6.2血清學檢查

6.2.1 ZIKV IgM檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫熒光法等進行檢測。

6.2.2 ZIKV中和抗體檢測采用空斑減少中和試驗（PRNT）檢測血液中和抗體。應盡量采集急性期和恢復期雙份血清開展檢測。

6.3病毒抗原檢測采用免疫組化法檢測寨卡ZIKV。

6.4病毒分離培養(yǎng)可將標本接種于蚊源細胞（C6/ 36）或哺乳動物細胞（Vero）等方法進行分離培養(yǎng)，也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進行病毒分離。

6.5病毒核酸檢測[26]血清學方法只適用于急性和/或恢復期標本，因為在感染早期IgM和IgG抗體滴度較低，且ZIKV抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強的交叉反應，易于產(chǎn)生假陽性；病毒分離培養(yǎng)對實驗室要求高、耗費時間長；相比之下，實時RT－PCR（rRTPCR）在感染早期能更快速、準確、靈敏地檢測出標本中的ZIKV，成為ZIKV診斷的金標準。ZIKV rRT－PCR檢測引物序列見表1。rRT－PCR反應總體積為25μl：kit enzyme mixture（包括逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶）0.25μl；2×Quantitect RT－PCR buffer 10μl，上下游引物各1.25μl（10μmol/L），探針0.5μl （10μmol/L），RNA5μl，DEPC水補足體系到25μl；推薦循環(huán)參數(shù)：先逆轉(zhuǎn)錄50℃×10min，95℃×15min循環(huán)一次；再按95℃×15s，60℃×1min循環(huán)40次（退火/延伸）。

表1　rRT- PCR檢測寨卡病毒引物序列

7　結束語

目前世界范圍內(nèi)尚無針對寨卡病毒的疫苗，也沒有特異的抗病毒藥物用于臨床，主要是對癥處理，防止蚊蟲叮咬是最佳的預防方式。由于寨卡病毒感染可能與小頭畸形、GBS有關，所以建議準備妊娠及妊娠期女性謹慎前往寨卡病毒流行地區(qū)。當前，寨卡病毒的傳播出現(xiàn)上升趨勢，為防止疫情傳入我國，我們應該做好預防控制工作，例如加強出入境檢疫、做好疫情監(jiān)測、大力開展衛(wèi)生防病工作、加強環(huán)境衛(wèi)生綜合整治以及清除蚊媒滋生地，確保做到早發(fā)現(xiàn)、早報告、早診斷、早隔離、早治療。

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·論著·

·論著·

(收稿日期2016-03-01；修回日期2016-03-04)

通信作者：孫長貴，男，生于1962年9月，碩士研究生導師，主任技師，教授，suncgui@163.com。

作者簡介：林迪，女，生于1987年10月，本科，技師，從事臨床微生物學檢驗。

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.001

中圖分類號：R373.9，R446

文獻標識碼：A

文章編號：1674－1129(2016)02－0131－03