樊福好（農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心，廣州 510520）

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唾液學(xué)檢測技術(shù)在健康管理中的應(yīng)用

樊福好
（農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心，廣州 510520）

唾液(saliva)俗稱口水(oral fluid)，是指由位于口腔內(nèi)的腺體分泌的、包含多種活性酶、電解質(zhì)和抗體、抗原在內(nèi)的混合物，其中水分含量占99%以上。隨著機體生理狀態(tài)的改變，唾液的成分、濃度和黏度等變化往往較大。

研究唾液的組成、功能以及唾液狀態(tài)改變規(guī)律的學(xué)科稱為唾液學(xué)(Salivology)。

在中國古代的中醫(yī)養(yǎng)生典籍中，唾液也被稱為“金津玉液”，“華池神水”，可見唾液對生命活動的重要性，唾液對機體生理機能失衡的狀態(tài)恢復(fù)也至關(guān)重要。因此，醫(yī)學(xué)上日益重視唾液的研究，許多研究成果開始應(yīng)用于臨床實踐。

唾液的主要作用包括以下幾點：

1)唾液對食物的預(yù)消化作用

唾液中含有多種消化酶(如唾液淀粉酶、葡萄糖酶)，可以對進入口腔內(nèi)的食物進行初步消化，減輕胃腸道的消化負(fù)荷，為胃腸道的消化做好準(zhǔn)備。

2)唾液會產(chǎn)生對細(xì)菌和病毒的選擇性消滅作用

在機體處于正常生理機能的情況下，唾液將對進入口腔內(nèi)的細(xì)菌和病毒進行甄別并選擇性殺滅(如艾滋病病毒、溶血性鏈球菌、傷寒桿菌、大腸桿菌及葡萄球菌)，唾液是機體防護的重要防線。

唾液中溶菌酶的活性逐漸被重視并應(yīng)用與生產(chǎn)和臨床。

3)唾液可以有效地消除霉菌毒素和農(nóng)藥殘留

唾液中的過氧化氫酶等酶類可以對進入口腔內(nèi)的真菌毒素(如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素)進行瞬間降解和清除。

唾液還可以降解某些農(nóng)用藥物在食物和飼料中的殘留。

唾液還可以消除機體產(chǎn)生的超氧自由基、亞硝基化合物、黃曲霉素和苯并芘，具備較好的抗癌作用。俗諺有云：“日咽口水三百口，保你活到九十九?！?/p>

4)唾液可以促進傷口愈合

唾液中的表皮生長因子、神經(jīng)生長因子等可以促進傷口愈合，采集動物的唾液制成凍干品具有重要的醫(yī)學(xué)價值，具備巨大的商業(yè)前景。

唾液中的腮腺激素還具備延緩衰老的作用，促進機體延年益壽。

5)唾液參與抗體的大循環(huán)

人和動物機體對病原的抵抗主要通過免疫學(xué)反應(yīng)進行，進入機體的病原刺激機體產(chǎn)生的抗體在體內(nèi)的循環(huán)主要有兩個途徑：大循環(huán)和小循環(huán)。

小循環(huán)是指抗體在血液中循環(huán)，大循環(huán)是指抗體在血液和唾液之間循環(huán)，故此，體內(nèi)的抗體分為兩種：小循環(huán)抗體(small circulating antibody)、大循環(huán)抗體(large circulating antibody)。

小循環(huán)抗體主要參與機體的免疫記憶反應(yīng)，免疫保護活性較弱，甚至?xí)a(chǎn)生對機體有害的反應(yīng)(如登革熱的糖蛋白抗體、藍(lán)耳病的糖蛋白抗體和核蛋白抗體)。

大循環(huán)抗體主要參與機體的免疫保護反應(yīng)，也是重要的免疫保護機制產(chǎn)生的基礎(chǔ)，具備重要的生物防御意義(如環(huán)狀病毒膜蛋白抗體和豬瘟E2蛋白抗體)。

據(jù)此，可以推斷能夠產(chǎn)生大循環(huán)抗體的疫苗才是優(yōu)秀的生物制品(如我國的C株豬瘟苗)，而目前的豬藍(lán)耳苗、偽狂犬疫苗、禽流感滅活疫苗、口蹄疫滅活疫苗等均不能產(chǎn)生有效的大循環(huán)抗體，免疫效果較差。

6)唾液是判斷機體健康狀態(tài)的重要樣本

1853年開始，蘇格蘭人亞歷山大·伍德申請了針頭和注射器的專利，人類開始使用注射器，用注射器進行血液采集成為醫(yī)學(xué)上的主要標(biāo)本采集來源，血液學(xué)檢測在醫(yī)學(xué)上發(fā)揮了重要作用。但由于血液采集是一種侵入性采集方法，對機體造成巨大傷害，全球每年由于使用注射器造成的死亡人數(shù)達上百萬之多，針頭恐懼癥(needle phobia)已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)上的一大問題。

因此，發(fā)展一種新的、非侵入性-無創(chuàng)性(non-invasive)樣本采集方法具備巨大的醫(yī)學(xué)潛力和價值。在眾多的體液(尿液 、羊水、糞便、汗液、眼淚)檢測方法中，唾液學(xué)研究技術(shù)脫穎而出，該技術(shù)具備樣本采集方便、對機體的生理和心理無損害、可檢測內(nèi)容豐富，樣本內(nèi)的成分相對穩(wěn)定、蛋白和脂類含量低等特點。

表1　某豬群唾液中豬瘟抗體的檢測結(jié)果 %

表2　某豬群唾液中環(huán)狀病毒抗體的檢測結(jié)果

表3　某保育豬群的活度檢測結(jié)果

表4　某生長豬群的活度檢測結(jié)果

到目前為止，唾液中發(fā)現(xiàn)了至少600種以上的活性酶類，這些酶可以作為判斷機體健康狀態(tài)的重要指標(biāo)。其中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、唾液淀粉酶等均可作為機體活性的指示酶類。唾液檢測的項目包括電解質(zhì)、激素、藥物、抗體、抗原和感染因子等。

對豬群的研究發(fā)現(xiàn)，用PCR方法檢測唾液中的環(huán)狀病毒，檢出率高出血清學(xué)方法300%以上，檢測豬群唾液中的豬瘟抗體和環(huán)狀病毒(圓環(huán)病毒)抗體具有明顯的優(yōu)勢，CV%值較小，檢測結(jié)果穩(wěn)定。

機體活度(Activity)是評價機體對外界環(huán)境緩沖能力的重要指標(biāo)，其數(shù)值范圍在0.0～1.0之間。活度越高，機體越健康；活度越低，機體越容易生病。

附1：機體活度（Activity）檢測

唾液是機體口腔內(nèi)腺體(腮腺、頜下腺和舌下腺)分泌的重要液體，其成分隨著機體健康狀態(tài)的改變而改變，尤其是唾液中酶的量和酶活性是機體活力狀態(tài)改變的重要指針，測定唾液中酶的活性具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

唾液中酶的活性受到唾液分泌量的影響而變動較大，加之酶的活性還受到唾液pH、唾液中礦物質(zhì)及食物殘渣的影響而不斷波動，所以測定唾液中的酶活性具有很強的不確定性。通過配制特殊的顏色反應(yīng)液選擇性作用于唾液中的特異性酶，通過顏色改變來確定酶活性，實現(xiàn)酶活性測試的數(shù)量化具有重要的實踐意義。

本試劑盒中含有唾液中幾種重要酶(溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等)作用的相應(yīng)底物，底物產(chǎn)生的分解物使特定組合的色原物質(zhì)發(fā)生顏色的改變，通過測定光密度值來確定唾液中酶的總活性，以此標(biāo)示機體的活性狀態(tài)(活度)。

本試劑盒中含有陽性對照(0.5 mL)、陰性對照(0.5 mL)、反應(yīng)液A(1 mL)、反應(yīng)液B(20 mL)，微孔反應(yīng)板(96孔，可拆卸)1塊。

所有試劑置于4 ℃冷藏、避光保存。有效期180 d。

所有試劑禁止接觸皮膚、眼睛等部位，建議戴保護手套進行實驗操作。

1)唾液的準(zhǔn)備：停止采食和飲水6 h以上(或：過夜)，采用專用的唾液采集袋收集人或動物的唾液1 mL左右，10 000 r/min，離心1 min，上清備用(冷凍)。

檢測時，樣本需室溫條件下回溫30 min。

2)反應(yīng)板的準(zhǔn)備：根據(jù)樣本的數(shù)量，取微孔反應(yīng)板1塊或若干條。

3)加樣：第1、2孔加入陰性對照液10μL；第3、4孔加入陽性對照液10μL；其余各孔分別加入唾液樣本10μL。

4)在上述每孔中(陰性對照、陽性對照、樣品)分別加入反應(yīng)液A10μL、反應(yīng)液B180μL(反應(yīng)孔內(nèi)溶液最終體積200μL)。

5)讀板：加入反應(yīng)液B 10 min時立即采用630 nm濾光片讀取微孔反應(yīng)板各孔的OD值。

判斷：陰性對照小于0.05，陽性對照大于0.9，則反應(yīng)成立。

樣本OD值減去陰性對照OD值作為機體的活度值，陰性孔的OD值較小時，可以忽略不計。

活度=ODS-ODN(為計算方便，當(dāng)陰性對照值較小時，可以直接用樣本OD值代表活度值)

生理意義：機體的活度值越高，活性越高，機體抵抗力強，疾病后恢復(fù)較快。若活度值小于0.4，則機體抵抗力弱，疾病后恢復(fù)較慢。

眼觀判斷：深藍(lán)色：抵抗力強；淺藍(lán)色：抵抗力弱。

附2：機體寒度（Cold）檢測

本試劑盒中含有唾液中幾種重要酶(溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等)作用的相應(yīng)底物，底物產(chǎn)生的分解物使特定組合的色原物質(zhì)發(fā)生顏色的改變，通過顏色改變來確定機體的體質(zhì)。通過配制特殊的顏色反應(yīng)液選擇性作用于唾液中的特異性酶，通過顏色改變來確定酶活性，而其中某些酶的活性與機體的體質(zhì)有直接的關(guān)系。

本試劑盒中含有陽性對照(0.5 mL)、陰性對照(0.5 mL)、反應(yīng)液A(1 mL)，反應(yīng)液B(20 mL)，微孔反應(yīng)板1塊(96孔，可拆卸)。

所有試劑置于4 ℃冷藏、避光保存。有效期180 d。

所有試劑禁止接觸皮膚、眼睛等部位，建議戴保護手套進行實驗操作。

1)唾液的準(zhǔn)備：停止采食和飲水6 h以上(或：過夜)，采用專用的唾液采集袋收集人或動物的唾液1 mL左右，10 000 r/min，離心1 min，上清備用(冷凍)。

檢測時，樣本需室溫條件下回溫30 min。

2)反應(yīng)板的準(zhǔn)備：根據(jù)樣本的數(shù)量，取微孔反應(yīng)板1塊或若干條。

3)加樣：第1、2孔加入陰性對照液10μL；第3、4孔加入陽性對照液10μL；其余各孔分別加入唾液樣本10μL。

4)在上述每孔中(陰性對照、陽性對照、樣品)分別加入反應(yīng)液A10μL、反應(yīng)液B180μL(反應(yīng)孔內(nèi)溶液最終體積200μL)。

5)讀板：加入反應(yīng)液B 10 min時立即采用630 nm濾光片讀取微孔反應(yīng)板各孔的OD值。

判斷：陰性對照小于0.05，陽性對照大于0.9，則反應(yīng)成立。

以樣本OD值減去陰性對照OD值作為機體的寒度值。

寒度=ODS-ODN(為計算方便，當(dāng)陰性對照值較小時，可以直接用樣本OD值代表寒度值)

生理意義：機體的寒度值越高，寒性越高，機體呈寒涼體質(zhì)。

若寒度值小于0.4，則機體呈溫?zé)狍w質(zhì)。處于寒涼體質(zhì)的機體，不能使用寒涼藥物；處于溫?zé)狍w質(zhì)的機體，不得使用溫?zé)崴幬铩?/p>

熱性體質(zhì)：0.0～0.2；溫性體質(zhì)：0.2～0.4；中性體質(zhì)：0.4～0.6；涼性體質(zhì)：0.6～0.8；熱性體寒：>0.8。

眼觀判斷：深藍(lán)色：寒涼體質(zhì)；淺藍(lán)色或無色：溫?zé)狍w質(zhì)。

(收稿日期：2015-12-14)