麻秋霞，胡海濤，王耀邦

(縉云縣動物疫病預防控制中心，浙江縉云 321400)

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血凝抑制試驗中兩種鴨血清非特異性凝集因子去除方法的效果比較

麻秋霞，胡海濤，王耀邦

(縉云縣動物疫病預防控制中心，浙江縉云 321400)

摘要：非特異性凝集現(xiàn)象，是干擾血凝抑制試驗的重要因素。本次試驗因非特異性凝集而無法判定結(jié)果的比例占20%，采用紅細胞沉淀吸附預處理法去除鴨血清中的非特異性血凝素及鴨血球直接測定法進行血凝抑制試驗，均有較好去除非特異性凝集因子的效果，去非率達66%，且所得效價與常規(guī)檢測法相比，無明顯差異。

關(guān)鍵詞：血凝抑制試驗；非特異性凝集因子；鴨血清

血凝抑制試驗是免疫檢測工作中比較常用的一種試驗方法。因受某些非特異性血凝因子的影響，故在試驗中經(jīng)常會遇到鴨血清對雞紅細胞懸液的非特異性凝集，造成試驗結(jié)果判定時，因紅細胞不流淌或流淌不完全而無法作出正確判斷。

為尋求一種能有效消除非特異性凝集因子，又便于實際應(yīng)用的檢測方法，筆者進行了用雞紅細胞沉淀吸附預處理法和同源鴨紅細胞直接測定法檢測去除非特異性凝集因子的效果試驗，取得了理想成效，現(xiàn)介紹如下。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗用紅細胞分別采自3只同種健康公雞和番鴨，按常規(guī)方法，經(jīng)PBS洗滌離心后，分別配制成1%和5%雞紅細胞懸液和1%鴨紅細胞懸液，備用。

1.1.2試驗血清番鴨血清75份，從縉云縣不同地區(qū)5個鴨場中隨機采集。

1.1.3禽流感H5亞型(R-6)血凝抑制試驗抗原由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號2013004。

1.2試驗方法

1．2．1試驗設(shè)計通過雞紅細胞懸液對鴨血清的血凝抑制試驗，得出非特異性凝集數(shù)，再以雞紅細胞懸液與吸附處理后的鴨血清進行血凝抑制試驗、鴨紅細胞懸液與鴨自然分離血清的血凝抑制試驗結(jié)果，對兩法作出去除非特異性凝集因子效果的評估。

1.2.2非特異性凝集現(xiàn)象認定以血球凝集抑制試驗結(jié)果判定時，各孔血球均不流淌為準、如有在倍比稀釋后的前數(shù)孔凝集、后流淌者則不記入本試驗的非特異性凝集范圍。

1.2.3血清中非特異性凝集因子處理采集1份待檢血清加入等量5%雞紅細胞懸液，靜置30 min或4℃過夜，10000 r/min離心5 min后，取上清液待檢。

1.2.4血球凝集試驗分別進行1%雞紅細胞懸液和1%鴨紅細胞懸液的血球凝集試驗，配制4單位工作抗原。

1.2.5抗原標定采用反向滴定法標定工作抗原濃度。

1.2.6操作方法

試驗一：(常規(guī)檢測法)采用1%雞紅細胞懸液與鴨血清進行血球凝集抑制試驗。

試驗二：(紅細胞吸附法)采用1%雞紅細胞懸液與鴨吸附后血清進行血球凝集抑制試驗。

試驗三：(鴨紅細胞直接測定法)采用1%鴨紅細胞懸液與鴨血清進行血球凝集抑制試驗。

詳細操作按高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T18936-2003規(guī)范進行。

1.2.7試驗成立條件陰性對照孔血清滴度不大于2log2，陽性孔對照血清誤差不超1個滴度。

1.2.8判定標準將一次性反應(yīng)板傾鈄45°，空白對照孔血球為對照，以完全流淌的血清最高稀釋倍數(shù)為HI滴度。

2結(jié)果與分析

2.11%雞紅細胞懸液與鴨血清進行血凝抑制試驗結(jié)果據(jù)試驗檢測，因非特異性凝集而無法判定結(jié)果者15份、占20%，且有13份集中于同一養(yǎng)殖場戶。如以雞紅細胞懸液對鴨血清進行HI試驗則無法對其結(jié)果作出正確判斷。

2.2吸附處理法和鴨血球直接測定法的去非特異性血凝效果比較據(jù)試驗，兩法均有10個樣本血清完全去除了非特異性凝集現(xiàn)象，去非率達66%。詳見表1。

表1　吸附法和直接測定法去非效果比較

注：帶﹟號表示非特異性凝集

由表1可見，在10個被去除非特異性血凝抑制現(xiàn)象的血清樣本中，有6個樣本的測定效價完全相同。不同的4個樣本中，有3個樣本鴨血球直接測定法的測定效價比采用吸附法的測定值高1效價，即有稍高的靈敏度。

2．3三種檢測方法試驗結(jié)果的可靠性分析如以常規(guī)檢測法效價為標準，其它兩法則與其有較高的符合率。詳見表2。

表2　三種檢測方法試驗結(jié)果的可靠性分析

由表2可見，以試驗1(常規(guī)檢測法)的效價為標準，試驗2與試驗1比較：有11組樣本效價相同，其余有4組相差±1效價；2組高1效價，2組低1效價，兩者差異不顯箸(P>0.05)。試驗3與試驗1組比較有11組樣本效價相同，其余有4組相差±1效價；3組高1效價，1組低1效價，兩者差異不顯箸(P>0.05)。試驗3與試驗2比較有11組樣本效價相同，其余有4組相差±1效價；3組高1效價，1組低1效價，兩者差異不顯箸(P>0.05)。

綜上所述，相應(yīng)的三種檢測方法試驗結(jié)果，其差異不顯著(P>0.05)。即采用吸附法和鴨血球直接測定法所得結(jié)果基本可信。

3小結(jié)與討論

3．1本次雞紅細胞和鴨血清進行的血凝抑制試驗，因非特異性凝集而無法判定結(jié)果者占20%，且主要集中在同一個群體，如果不去除非特異性凝集，則無法對試驗結(jié)果作出正確評判。

3．2采用雞紅細胞沉淀吸附法和鴨紅細胞直接測定法，均能大部去除鴨血清中的非特異性凝集因子，能基本滿足一般檢測的精度要求，兩者比較，各有優(yōu)缺點：如用吸附法，則可用統(tǒng)一濃度的工作抗原和無需配制另一種血球懸液，但工作量較大，耗時較長。直接測定法，比吸附法則有稍高靈敏度，但僅能用于鴨血清。

3．3血凝抑制試驗中，用于吸附法的雞血球濃度和應(yīng)用比例較多，筆者為了精確效價計算故選用了本試驗中的比例參數(shù)，有否影響去非率，有待進一步研究探討。

3．4試驗證實三種測定方法，除試驗1中的非特異性凝集外，其他效價的誤差較小，結(jié)果可信。

中圖分類號：S852.5+2

文獻標識碼：A

文章編號：1005-7307(2016)02-0008-002