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(大理大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，云南大理671000)

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正常人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)中HCY-2表達(dá)變化及意義

張?jiān)?，李耀康，王光?/p>

(大理大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，云南大理671000)

摘要：目的觀察同型半胱氨酸誘導(dǎo)基因(HCY-2)在正常人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)中的表達(dá)，探討其在泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)育中的作用。方法取不同發(fā)育時(shí)期的正常人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢，采用免疫組化ABC法檢測(cè)HCY-2。結(jié)果在腎臟皮質(zhì)內(nèi)，妊娠中期HCY-2表達(dá)量均低于其他各期，P均<0.05；在腎臟髓質(zhì)內(nèi)，不同階段人體胚胎HCY-2表達(dá)量無差異(P均>0.05)；在睪丸內(nèi)妊娠中期HCY-2表達(dá)量均低于其他各期，其中妊娠早期最高，P均<0.05；在卵巢內(nèi)妊娠晚期HCY-2表達(dá)量均低于其他各期，其中妊娠中期最高，P均<0.05。結(jié)論HCY-2在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢發(fā)育的整個(gè)時(shí)期持續(xù)表達(dá)，其可能與人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)的發(fā)育有關(guān)。

關(guān)鍵詞：胚胎發(fā)育；腎臟；睪丸；卵巢；同型半胱氨酸誘導(dǎo)基因

同型半胱氨酸誘導(dǎo)基因(HCY-2)是陳光慧等[1, 2]在體外模擬高半胱氨酸血癥時(shí)，從體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞中克隆的新基因。有研究顯示，該基因在成年大鼠各器官組織中廣泛表達(dá)[3]。另外，HCY-2在人類胚胎時(shí)期的心臟亦有表達(dá)，主要表達(dá)在心肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，在畸形人體胚胎心臟中表達(dá)異常[4]；進(jìn)一步研究顯示，在同型半胱氨酸(HCY)刺激培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中，HCY-2表達(dá)變化與細(xì)胞增殖改變密切相關(guān)[5，6]。目前，有關(guān)HCY-2在人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)中表達(dá)狀態(tài)的研究較少。2013年10月～2014年12月，我們觀察了發(fā)育不同時(shí)期的正常人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢中HCY-2的表達(dá)變化，探討其在人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)育中的作用。

1材料與方法

1.1材料HCY-2抗體由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部心血管研究所提供。收集正常人體胚胎20例，其中處于妊娠早期(4～8周)6例，妊娠中期(3～4個(gè)月)5例，妊娠晚期(5～6個(gè)月)5例，近足月(8個(gè)月以上)4例；以上人體胚胎均來源于北京大學(xué)第三附屬醫(yī)院、和平里醫(yī)院等，所有胚胎因某種原因流產(chǎn)后死亡。標(biāo)本均為通信作者在北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部攻讀碩士研究生期間收集，已獲北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部倫理委員會(huì)審批。

1.2HCY-2檢測(cè)方法將標(biāo)本用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，以5 μm厚度進(jìn)行組織切片。采用免疫組化ABC法檢測(cè)HCY-2，其中一抗(抗HCY-2抗體)濃度為1∶800(體積比)，陰性對(duì)照用PBS代替一抗，按試劑盒說明書操作；以呈現(xiàn)黃棕色染色為HCY-2陽性反應(yīng)，用Q-500圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽性部位的光密度(OD)值，以此表示HCY-2表達(dá)量。每個(gè)樣本取3張切片，每張切片隨機(jī)分析3個(gè)視野，取平均值。

2結(jié)果

HCY-2在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢發(fā)育的整個(gè)時(shí)期均表達(dá)，主要表達(dá)在腎臟皮質(zhì)的腎小管、腎小球髓質(zhì)的集合管及睪丸、卵巢的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。見表1。

表1　正常人體胚胎泌尿生殖系統(tǒng)中HCY-2

注： 與妊娠早期比較，*P<0.01；與妊娠中期比較，▲P<0.05，#P<0.01；與妊娠晚期比較，△P<0.01。

3討論

本研究發(fā)現(xiàn)，HCY-2在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢發(fā)育的整個(gè)時(shí)期均持續(xù)表達(dá)，且主要表達(dá)在腎臟皮質(zhì)的腎小管、腎小球髓質(zhì)的集合管及睪丸、卵巢的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。李英等[4]在研究成年大鼠時(shí)顯示，功能活躍或分裂增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞組成的器官中HCY-2表達(dá)較高。而我們先前的研究結(jié)果也顯示，心肌細(xì)胞內(nèi)HCY-2表達(dá)與心肌細(xì)胞增殖呈正相關(guān)[6]。在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢發(fā)育的整個(gè)時(shí)期，參與構(gòu)成腎臟、睪丸和卵巢的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，此時(shí)HCY-2持續(xù)表達(dá)。因此，可以推測(cè)在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢發(fā)育過程中，HCY-2 的表達(dá)蛋白與構(gòu)成腎臟、睪丸和卵巢的細(xì)胞生長、增殖有關(guān)，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖以影響或調(diào)節(jié)腎臟、睪丸和卵巢的發(fā)育。

李勇等[3, 7, 8]在雞胚轉(zhuǎn)染HCY-2基因后的研究發(fā)現(xiàn)，HCY-2基因高表達(dá)時(shí)可引起雞胚心臟結(jié)構(gòu)紊亂、心內(nèi)膜墊缺損，抑制心室、心房發(fā)育，并引起心肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變；在培養(yǎng)的人體胚胎心肌細(xì)胞中的研究也同樣表明，HCY-2基因表達(dá)改變可引起心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變[9]。HCY-2基因表達(dá)紊亂能夠誘導(dǎo)雞胚心血管系統(tǒng)發(fā)育異常，表現(xiàn)為心包積液、異位心、心外露和心臟過小等，故認(rèn)為HCY-2可能是一種胚胎發(fā)育的毒性因子。在內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染HCY-2基因，發(fā)現(xiàn)HCY-2可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，而細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育的整個(gè)過程中具有十分重要的作用[10, 11]。因此，進(jìn)一步推測(cè)HCY-2 的表達(dá)蛋白通過引起細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)腎臟、睪丸和卵巢的發(fā)育。

陳光慧等[2]研究表明，HCY-2可促進(jìn)雞胚心肌細(xì)胞凋亡，為凋亡促進(jìn)基因。我們前期的研究也顯示，HCY-2在室間隔膜部缺損的人體胚胎心臟中表達(dá)明顯高于正常發(fā)育的人體胚胎心臟[5]。因此，推測(cè)在胚胎心臟發(fā)育時(shí)期HCY-2基因可能通過細(xì)胞凋亡來影響心臟內(nèi)部的分隔。另有研究顯示，HCY-2基因與RIP3基因高度同源[9]，為RIP3的同源基因。RIP3基因可激活Caspase-2而引發(fā)一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[12]。在Hela細(xì)胞株中基因沉默RIP3，細(xì)胞將不能夠激活cAMP和cGMP，從而使細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)途徑受阻，細(xì)胞失去正常的功能[13,14]。因此，在人體胚胎腎臟、睪丸和卵巢的發(fā)育中，HCY-2的表達(dá)在腎臟、睪丸和卵巢的正常結(jié)構(gòu)形成方面可能具有重要的作用，但是其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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《山東醫(yī)藥》第56卷第6期刊載的“益氣除痰方含藥血清對(duì)順鉑耐藥肺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響”一文中， “益氣除痰方由黨參、薏苡仁、守宮、生南星等藥物組成”應(yīng)為“益氣除痰方由紅參、薏苡仁、壁虎、生南星等藥物組成”。

本刊編輯部

(收稿日期：2015-08-04)

中圖分類號(hào)：R321.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)10-0078-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.10.035

通信作者：王光明(E-mail: 420869015@qq.com)