劉京生，劉桂華，唐健濱，趙倩，趙學(xué)英，金訊波（華北石油管理局總醫(yī)院，河北任丘0655；山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院）

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FISH和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷上尿路上皮細(xì)胞癌效果比較

劉京生1，劉桂華1，唐健濱1，趙倩1，趙學(xué)英1，金訊波2
（1華北石油管理局總醫(yī)院，河北任丘062552；2山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院）

摘要：目的 比較熒光原位雜交（FISH）技術(shù)和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷上尿路上皮細(xì)胞癌（UUT-UC）的效果。方法 收集59例疑似UUT-UC患者的尿液標(biāo)本，用熒光標(biāo)記的3、7、17號染色體著絲粒及9p21區(qū)帶探針進(jìn)行FISH檢測，同時行尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查。以術(shù)后病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計算FISH和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷UUTUC的敏感度和特異度。結(jié)果 59例行FISH檢測的患者中，29例病理組織檢查確診為UUT-UC。FISH和細(xì)胞學(xué)的總體敏感度分別為68．9%、34．5%，P＜0．05。其中FISH和細(xì)胞學(xué)對于非肌層浸潤性腫瘤的敏感度分別為45．5%、18．2%，P＞0．05；肌層浸潤性腫瘤分別為83．3%、44．4%，P＜0．05。對低級別腫瘤分別為46．2%、23．1%，P＜0．05；高級別分別為87．5%、43．8%，P＜0．05。FISH和細(xì)胞學(xué)診斷UUT-UC的特異度分別是85．7%和90．5%，P＞0．05。結(jié)論 FISH診斷UUT-UC的敏感度高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，兩者特異度無明顯差異。

關(guān)鍵詞：上尿路上皮細(xì)胞癌；尿脫落細(xì)胞學(xué)；熒光原位雜交

上尿路上皮細(xì)胞癌（UUT-UC）是較為少見的惡性腫瘤，復(fù)發(fā)率高［1］，預(yù)后差。目前診斷上尿路腫瘤主要依靠影像學(xué)檢查，并輔以尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查和輸尿管鏡檢查。影像學(xué)檢查對小腫瘤（直徑＜5 mm）準(zhǔn)確性很低；腎盂輸尿管鏡檢查雖然比較可靠，但有創(chuàng)檢查可造成并發(fā)癥或腫瘤轉(zhuǎn)移；細(xì)胞學(xué)檢查敏感度偏低。熒光原位雜交（FISH）技術(shù)可以檢測與尿路上皮細(xì)胞癌（UC）有關(guān)的4種染色體的改變，包括9p21基因位點的缺失和3、7、17號染色體的非整倍性，對復(fù)發(fā)性膀胱癌的診斷準(zhǔn)確性較高［2，3］。UUT-UC患者的異常染色體組型與膀胱癌患者相似［4］。2009年9月～2014年8月，我們對59例疑似UUT-UC患者行FISH、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，以術(shù)后病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種檢測方法的靈敏度和特異度。

1　資料與方法

1．1臨床資料 選擇31例影像學(xué)檢查疑似UUTUC患者，男31例、女28例，年齡25～82歲均接受手術(shù)治療，其中根治性腎輸尿管切除術(shù)18例，輸尿管部分切除術(shù)11例。術(shù)后病理結(jié)果證實1例為輸尿管炎性息肉，1例為輸尿管鱗狀細(xì)胞癌，余29例均為UUT-UC。臨床分期；pTis～pT1期（未浸潤肌層）11例，pT2～pT4期（浸潤肌層）18例；病理分級G1、G2級（低組別）13例，G3級（高級別）16例。

1．2FISH檢測方法 留取患者清晨初次尿液50 mL，離心去上清，加入膠原酶B于37℃中消化。用甲醇與冰醋酸（3∶1）的固定液固定。將細(xì)胞滴于玻片上，56℃老化玻片。將玻片用37℃胃蛋白酶溶液消化，2×SSC（pH 7．0）溶液漂洗，－20℃預(yù)冷的乙醇中脫水，自然干燥。玻片置（73±1）℃環(huán)境中變性，預(yù)冷乙醇脫水，用45～50℃烤片機(jī)上預(yù)熱。將探針混合物于（73±1）℃環(huán)境中變性后滴于玻片雜交區(qū)域，封片42℃過夜雜交。移去蓋玻片，用50%甲酰胺／2×SSC溶液洗滌，70%乙醇中脫水，暗處干燥玻片。用DAPI復(fù)染劑復(fù)染后，在熒光顯微鏡下觀察玻片。FISH DNA探針由北京金菩嘉公司提供，包括兩種組合：GLP P16／CSP17探針與CSP3／CSP7探針，熒光顯微鏡下均可見紅色與綠色兩種信號。GLP P16／CSP17探針常見異常類型為p16缺失或17號染色體非整倍性，CSP3／CSP7探針常見異常類型為3號及7號染色體非整倍性。正常細(xì)胞應(yīng)為2紅／2綠，任意兩個以上位點（含兩個）出現(xiàn)異常，或一個位點有兩種以上（含兩種）異常，即可判斷為陽性。

1．3尿脫落細(xì)胞檢查方法 尿液細(xì)胞學(xué)檢查由2位病理學(xué)專家采用盲法完成。尿液標(biāo)本與用于FISH檢測的標(biāo)本同一天采集。

1．4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

FISH、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷UUT-UC的敏感度分別為68．9%（20／29）、34．5%（10／29），P＜0．05。二者診斷未浸潤肌層UUT-UC的敏感度分別為45．5%（5／11）、18．2%（2／11），P＞0．05；診斷浸潤肌層的UUT-UC的敏感度分別為83．3%（15／18）、44．4%（8／18），P＜0．05。二者診斷病理分級低級別UUT-UC的敏感度分別為46．2%（6／13）、23．1%（3／13），P＞0．05；診斷病理分級高級別UUT-UC的敏感度分別為87．5%（14／16）、43．8% （7／16），P＜0．05。二者診斷UUT-UC的特異度分別為85．7%（18／21）、90．5%（19／21），P＞0．05。

3　討論

影像學(xué)檢查聯(lián)合尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查或輸尿管鏡檢查是常用的診斷UUT-UC的方法。但是，這些輔助檢查均有其自身的局限性。尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查敏感度僅為35%～50%［5，6］。輸尿管插管沖洗可以提高尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查的敏感度，但假陰性率仍高達(dá)39%［5］，而且有一定創(chuàng)傷性［7］。在輸尿管鏡輔助下行組織活檢診斷UUT-UC正確率可達(dá)90%，但有創(chuàng)檢查可引起嚴(yán)重的并發(fā)癥（輸尿管穿孔、斷裂、狹窄或腫瘤細(xì)胞外漏、種植），檢測原位癌時敏感度也很低。文獻(xiàn)報道，F(xiàn)ISH診斷膀胱UC的靈敏度高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，但特異度無明顯差別［8，9］。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)ISH診斷UUT-UC敏感度高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，但特異度相似，同國外研究結(jié)果基本一致［10～12］。盡管FISH檢測未浸潤肌層和低級別UUT-UC的敏感度似乎好于尿脫落細(xì)胞學(xué)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？赡芘c此組病例的數(shù)量較少有關(guān)。

綜上所述，在診斷UUT-UC時，當(dāng)影像學(xué)檢查陽性或可疑而細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果陰性或無法確定時，可用FISH作為補(bǔ)充檢查，也許可以避免應(yīng)用侵襲性的檢查技術(shù)。對于影像學(xué)檢查為陽性但細(xì)胞學(xué)和FISH檢查為陰性的病例，內(nèi)鏡檢查仍是必須的。由于國人與西方人膀胱癌的3、16、18號染色體雜合子缺失頻率存在統(tǒng)計學(xué)上差異［14，15］，因此3、7、17號染色體和9p21探針是否是檢測國人UUT-UC的最佳組合，仍需進(jìn)一步研究。

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收稿日期：（2015-04-28）

通信作者：金訊波（E-mail：16365451＠qq．com）

中圖分類號：R737．5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X（2016）02-0066-02

doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2016．02．028