韓卓然，孫敬鋒

( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384 )

水產(chǎn)動(dòng)物益生菌的篩選及應(yīng)用

韓卓然，孫敬鋒

( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384 )

水產(chǎn)動(dòng)物；益生菌；篩選；應(yīng)用

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和養(yǎng)殖強(qiáng)度的增加，水產(chǎn)動(dòng)物病害爆發(fā)頻繁。傳統(tǒng)的抗生素藥物雖然對(duì)治療疾病有積極效用，但長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生巨大的負(fù)面效應(yīng)：病原菌產(chǎn)生耐藥性，效力下降[1]；藥物殘留干擾水產(chǎn)動(dòng)物腸道內(nèi)有益微生物菌群的生長(zhǎng)和繁殖，影響水產(chǎn)動(dòng)物的健康；殘留在水體中的抗生素破壞養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，水產(chǎn)品質(zhì)量下降。近年來，我國(guó)水產(chǎn)品因藥物殘留而出口受阻的事件屢見不鮮，給我國(guó)水產(chǎn)業(yè)造成巨大損失。

1974年P(guān)arker[2]首創(chuàng)益生菌一詞，最早提出益生菌有利于腸道微生態(tài)平衡。目前普遍認(rèn)為，益生菌的作用主要是改善動(dòng)物新陳代謝、提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收利用率和免疫力、減少環(huán)境污染等[3]。益生菌因具有無毒、無殘留、無抗藥性、無污染等特點(diǎn)，逐漸被廣泛應(yīng)用。

1 益生菌的作用機(jī)理

1.1 競(jìng)爭(zhēng)抑制

益生菌菌群與病原菌競(jìng)爭(zhēng)黏膜附著位點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)方式，降低病原菌活性，阻止病原菌黏附，使養(yǎng)殖動(dòng)物獲得穩(wěn)定適宜的微生物環(huán)境[4]。

1.1.1 競(jìng)爭(zhēng)黏附位點(diǎn)

益生菌黏附定殖于宿主體內(nèi)是發(fā)揮作用的前提。益生菌進(jìn)入機(jī)體后，最先發(fā)揮的作用就是與病原菌競(jìng)爭(zhēng)附著位點(diǎn)[5]。有研究表明，黏附力強(qiáng)的植物乳酸菌ST-Ⅲ(LactobacillusplantarumCGMCC)與致病菌共同作用于腸細(xì)胞時(shí)，通過競(jìng)爭(zhēng)性占位效應(yīng)形成生物膜，抑制致病菌的黏附和侵入，保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性，使宿主細(xì)胞免受損傷[6]。益生菌和病原菌的黏附機(jī)制相似，益生菌分泌一種以蛋白為主要成分的黏附素，介導(dǎo)其黏附至腸黏膜上皮細(xì)胞，所以益生菌易于與病原菌競(jìng)爭(zhēng)附著位點(diǎn)。但宿主體內(nèi)毒力因子過多，機(jī)體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)過強(qiáng)，益生菌就會(huì)無法黏附。

1.1.2 競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

益生菌與異養(yǎng)型細(xì)菌爭(zhēng)奪腸道內(nèi)有限的底物，使病原菌因缺乏營(yíng)養(yǎng)而在競(jìng)爭(zhēng)中不占優(yōu)勢(shì)。研究證明，熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)與殺鮭氣單胞菌(Aeromonassalraonicida)競(jìng)爭(zhēng)游離鐵離子，抑制后者的增殖[7]。大部分微生物生長(zhǎng)均需要鐵離子[8]，所以益生菌對(duì)鐵離子的競(jìng)爭(zhēng)力可作為衡量其效果的標(biāo)準(zhǔn)之一。Neeser等[9]還研究證明，益生菌在腸內(nèi)與致病菌爭(zhēng)奪碳水化合物。好氧的芽孢桿菌(Bacillus)在腸道內(nèi)可消耗分子氧，制造厭氧環(huán)境，抑制好氧的致病菌，利于厭氧的乳酸菌和雙歧桿菌(Bifidobacterium)的生存與增殖[10]。

1.2 分泌抑制物

益生菌可以釋放細(xì)菌素、親鐵元素、溶菌酶、蛋白酶、過氧化氫等多種物質(zhì)，這些物質(zhì)都可不同程度地抑制各種革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌。已證實(shí)乳酸菌產(chǎn)生的抑菌素可抑制其他病原菌[11]。黃滄海等[12]研究發(fā)現(xiàn)，乳酸桿菌代謝產(chǎn)物中的乳酸不是唯一起抑菌或滅菌作用的代謝物；乳酸桿菌的菌體及其代謝產(chǎn)物對(duì)大腸桿菌(Escherichiacoli)具有一定的協(xié)同抑制作用，且抑菌效果更好、時(shí)間更持久。李海兵[13]從健康對(duì)蝦腸道內(nèi)篩選出了需鈉弧菌(Vibrionatriegens)和溶藻弧菌(V.alginolyticus)。體外拮抗試驗(yàn)表明，它們對(duì)哈維氏弧菌(V.harveyi)、鰻弧菌(V.anguillarum)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)等幾種海洋水產(chǎn)動(dòng)物的主要致病菌均有不同的抑制作用。抑制反應(yīng)動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)表明，這些菌的代謝產(chǎn)物中含有抑菌活性物質(zhì)。單曉楓[14]從鯉魚(Cyprinuscarpio)腸黏膜篩選出了有抑菌作用的糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)，培養(yǎng)物上清液中含有機(jī)酸和對(duì)胰蛋白酶敏感的某種抑菌物質(zhì)。

1.3 提供營(yíng)養(yǎng)促進(jìn)機(jī)體消化吸收

益生菌可以產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等胞外酶，它們不僅可以提高消化速率，還可以提供維生素、氨基酸、脂肪酸這類生長(zhǎng)因子[15]。Bairagi等[16]報(bào)道，分離自鯰魚(Silurusasotus)消化道的菌株可產(chǎn)生胞外淀粉酶和蛋白酶，促進(jìn)了消化，提高了飼料的利用率。Fang等[17]研究表明，白鱘(Psephuyrusgladius)喂食含乳酸菌、納豆桿菌(B.natto)等益生菌的飼料后，胃中酸性蛋白酶及堿性蛋白酶的活性明顯提高。但應(yīng)注意的是，不同屬的益生菌分泌的消化酶種類和數(shù)量不同，產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌適用于草食性魚類，而產(chǎn)脂肪酶能力強(qiáng)的益生菌適于肉食性魚類。所以，應(yīng)根據(jù)水產(chǎn)動(dòng)物種類選擇合適的益生菌[18]。

腸道是吸收營(yíng)養(yǎng)的重要部位，益生菌可以改變腸黏膜結(jié)構(gòu)，增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率，還可以調(diào)節(jié)腸道內(nèi)pH值，影響腸道內(nèi)消化酶活性，提高魚類消化能力。Fang等[17]報(bào)道，匙吻鱘(Polyodonspathula)飼喂益生菌后，前腸腸壁和肌肉層厚度增加，前腸、中腸褶皺明顯增多，消化吸收率明顯提高。丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)使腸道絨毛高度以及腸道上皮細(xì)胞微絨毛高度顯著增加，腸吸收面積增大，吸收效率提高[19]。益生菌可以增加腸道內(nèi)短鏈脂肪酸的含有量，且短鏈脂肪酸除了可以促進(jìn)腸蠕動(dòng)，降低食糜對(duì)機(jī)體的損傷外，還可以降低腸道內(nèi)的pH值[19-20]。梅景良等[21]提取了黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)胃、腸、肝胰臟內(nèi)的酶，發(fā)現(xiàn)只有在一定的pH內(nèi)酶才具有活性。

1.4 增強(qiáng)非特異性免疫力

益生菌不僅可以刺激胸腺和脾等免疫器官發(fā)育，激發(fā)機(jī)體體液和細(xì)胞免疫[22]，還可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫力。幼魚、蝦和其他無脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)發(fā)育不及成體，主要依賴非特異性免疫反應(yīng)。

1.4.1 提高酶活力

溶菌酶存在于魚體表黏液、血漿和肝臟中，可破壞病原菌細(xì)胞壁，這使魚體表黏液成為保護(hù)魚類的天然屏障。Taoka等[23]用含乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、丁酸梭菌和酵母菌的復(fù)合益生菌飼喂牙鲆(Paralichthysolivaceus)，牙鲆體表黏液和血漿中的溶菌酶活性及血漿蛋白含量均有所提高。孟小亮[24]給黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)投喂地衣芽抱桿菌(B.licheniformis)后，黃顙魚血清內(nèi)的白細(xì)胞吞噬活性和溶菌酶活性明顯提高、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性降低，而總蛋白含量有所增加。結(jié)果表明，應(yīng)用地衣芽抱桿菌增強(qiáng)了黃顙魚的非特異性免疫力，也在一定程度上改善了肝臟功能。

1.4.2 提高腸道黏膜屏障功能

腸道黏膜屏障包括微生物屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和機(jī)械屏障，其中機(jī)械屏障最為重要。機(jī)械屏障由腸上皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞分泌的黏液組成，杯狀細(xì)胞分泌黏蛋白遍布整個(gè)腸道，形成一層黏液層。黏液層能夠保護(hù)腸道上皮細(xì)胞免受病原菌侵襲，成了腸道黏膜屏障的第一道防線。益生菌可以增加黏蛋白的分泌量，強(qiáng)化腸道黏膜屏障的防御能力?；瘜W(xué)屏障由腸道中的胃酸、溶菌酶、膽汁等生物因子構(gòu)成。凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei) 攝食添加益生菌的飼料時(shí)，腸道蛋白酶、淀粉酶活性增高，酶活性與生長(zhǎng)速度具一定相關(guān)性[25]。生物屏障由腸道內(nèi)菌群與腸道黏膜結(jié)合或黏附形成，益生菌可以增殖有益菌，抑制有害菌，使腸道菌群保持穩(wěn)定。免疫屏障是免疫細(xì)胞、免疫分子、免疫組織和免疫器官構(gòu)成的生理性屏障，具有防御病原微生物感染的作用。

1.4.3 參與其他免疫調(diào)控

益生菌在腸道中還有其他免疫調(diào)控效應(yīng)，包括增強(qiáng)樹突細(xì)胞和T細(xì)胞免疫功能，阻止致炎性細(xì)胞因子的合成及增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的作用[26]、分泌抑菌因子及使上皮細(xì)胞緊密連接等。

2 益生菌的篩選

盡管有陸生動(dòng)物益生菌用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的報(bào)道，但從宿主本身篩選出的土著微生物可以很好地適應(yīng)環(huán)境，更高效的抑制病原菌[27]。而那些非分離自魚類消化道的益生菌株，往往不能穩(wěn)定地定殖在魚類消化道中。除了考慮益生菌在腸道內(nèi)定殖以及定殖的時(shí)間外，還應(yīng)注意其耐酸、耐鹽、耐熱等特性，這些因素均會(huì)影響益生菌的活性及作用效果。所以，篩選的益生菌應(yīng)具有如下特點(diǎn):(1)在低pH值和膽汁中可以存活，可在腸內(nèi)定殖，競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)強(qiáng)；(2)易于獲得，在體內(nèi)易繁殖，體外易培養(yǎng)，不與病原菌雜交；(3)產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)對(duì)機(jī)體本身沒有危害；(4)能夠提高機(jī)體免疫力；(5)經(jīng)高熱加工后，益生菌活性好，穩(wěn)定性高；(6)不帶耐藥因子或所含耐藥因子少。根據(jù)上述特點(diǎn)，為保證其應(yīng)用的安全性及其良好效果，目前篩選益生菌時(shí)普遍遵循以下過程。

2.1 候選菌株的獲得

篩選優(yōu)良菌株是使益生菌發(fā)揮良好作用的基礎(chǔ)，在篩選過程中主要考慮合適的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及盡可能從腸道中獲得更多的菌株。所以獲得大量候選菌株是一項(xiàng)十分繁重的任務(wù)?？蓮挠佐~和甲殼類動(dòng)物消化道中分離得到固有微生物，黏附在上皮細(xì)胞的益生菌；再?gòu)酿じ接陴ひ荷系奈⑸镏谢蛳蓝虝憾ň拥奈⑸镏蟹蛛x出來[28]。

2.2 益生菌的篩選

從大量候選菌株中篩選出益生菌菌種是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。以對(duì)病原菌的拮抗作用，對(duì)酸、膽鹽和熱的耐受性，以及在腸道中的黏附能力等為篩選指標(biāo)，篩選出目標(biāo)菌株。

2.2.1 體外拮抗試驗(yàn)

動(dòng)物腸道內(nèi)的固有菌群對(duì)外來菌群有顯著的拮抗作用。體外拮抗試驗(yàn)是篩選益生菌的主要方法，絕大多數(shù)益生菌的篩選都是以抑制特定病原菌為目的，即在固體培養(yǎng)基上根據(jù)抑制物和含鐵細(xì)胞的產(chǎn)生或?qū)︷B(yǎng)分的競(jìng)爭(zhēng)，篩選出益生菌[29]。目前研究者應(yīng)用不同的方法進(jìn)行體外拮抗試驗(yàn)。張玲[30]用十字交叉法，以哈維氏弧菌和副溶血弧菌作為指示菌，利用體外拮抗試驗(yàn)篩選出了嗜鹽單胞菌屬(Halomonas)；張棋[31]利用牛津杯抑菌試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)篩；王福強(qiáng)[32]以弧菌為指示菌，先后運(yùn)用了點(diǎn)種法、上清液法和共培養(yǎng)法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)；李海兵[13]采用瓊脂擴(kuò)散法從健康中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)及凡納濱對(duì)蝦腸道分離出了對(duì)病原弧菌具有拮抗作用的候選菌，并進(jìn)行了體外拮抗試驗(yàn)。曾東[33]采用雙層平板法測(cè)定分離菌株對(duì)病原菌的拮抗作用。

2.2.2 菌株耐受性

2.2.3 菌株的鑒定

傳統(tǒng)的鑒定菌株方法通常是參考細(xì)菌鑒定手冊(cè)，綜合考慮菌株耐受性，結(jié)合形態(tài)觀察、革蘭氏染色、測(cè)定各項(xiàng)生理生化指標(biāo)和血清學(xué)反應(yīng)等。目前分子生物學(xué)方法也普遍應(yīng)用于細(xì)菌鑒定過程中，如指紋圖譜技術(shù)、基因組探針技術(shù)、基因測(cè)序、GC含量測(cè)定和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等。近年來，自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)因其高效、簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確等特點(diǎn)也逐漸被廣泛應(yīng)用[36-38]。此外，也有將光學(xué)手段應(yīng)用到益生菌的鑒定工作中，如熒光光譜、紅外光譜技術(shù)等[39-41]。

2.2.4 安全性鑒定

雖然對(duì)益生菌安全性并無公認(rèn)的解釋，但綜合目前對(duì)益生菌安全性的研究可以獲得如下的認(rèn)識(shí):益生菌一定不能是致病菌，且不能產(chǎn)生有害物質(zhì)，菌株不能通過遺傳修飾獲得有害基因或者具有將有害基因或耐藥性因子轉(zhuǎn)移的潛力。所以，試驗(yàn)篩選出的益生菌還需在活體中檢測(cè)，包括向宿主動(dòng)物體內(nèi)引入候選菌種，監(jiān)測(cè)記錄生長(zhǎng)狀況、種群分布、殘留量和各種理化指標(biāo)等，確保該菌種對(duì)宿主無害。最后還要確保益生菌在正常條件下可穩(wěn)定增長(zhǎng)。

2.3 體內(nèi)作用效果評(píng)價(jià)

嚴(yán)格按照以上步驟篩選出的菌株，具有如下特點(diǎn)：(1)在體外能夠拮抗病原菌；(2)對(duì)不良環(huán)境具有耐受性；(3)對(duì)宿主沒有致病性。評(píng)價(jià)這些候選菌株在魚體內(nèi)或水體中的應(yīng)用效果，是篩選優(yōu)良菌株的最后關(guān)鍵性一步，即從候選菌株中繼續(xù)篩選能夠抵抗病原體攻擊(通常需要攻毒試驗(yàn)來確定)、具有免疫增強(qiáng)作用或明顯改善水質(zhì)的菌株。Burbank等[42]從虹鱒(Oncorhynchusmykiss)腸道中篩選出了可抑制嗜冷黃桿菌(Flavobacteriumpsychrophilum)的益生菌，體外試驗(yàn)結(jié)果表明，有16株菌株具有可抑制或降低嗜冷性黃桿菌致病性的潛在能力，被作為候選益生菌。Burbank等[43]從上述16株候選益生菌菌株中挑選10株進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。結(jié)果表明，有兩株 (C6-6和C6-8)可顯著降低感染了嗜冷黃桿菌的虹鱒的死亡率。這兩株菌株最終可以從胃腸道中再次被分離出來，表明其在腸道內(nèi)定殖的能力。

3 益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

益生菌應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的方式有多種，如注射或浸浴生物體[44-45]、作用于養(yǎng)殖水體和作為飼料添加劑等。目前，將益生菌直接應(yīng)用于養(yǎng)殖水體和作為飼料添加劑的方法因安全、見效快等優(yōu)勢(shì)被普遍使用。

3.1 直接應(yīng)用于養(yǎng)殖水體

在養(yǎng)殖水體中使用益生菌，可以改善養(yǎng)殖水體的水質(zhì)，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)[46]。趙玉潔等[47]報(bào)道，光合細(xì)菌能將水域中異養(yǎng)菌分解的殘余有機(jī)物產(chǎn)生的有機(jī)酸、硫化氫及氨等作為基質(zhì)，合成菌體物質(zhì)并增殖，既參與水質(zhì)凈化，又可被其他動(dòng)物所捕食。張小平[48]在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌SC02及與假單胞菌的復(fù)合菌劑，在一定時(shí)間內(nèi)能有效去除養(yǎng)殖水體中氨氮、亞硝酸鹽氮和總氮等的含量。張信娣等[49]將紅假單胞菌(Rhodopseudomonasspheroides)應(yīng)用于三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)養(yǎng)殖水體，可穩(wěn)定水體pH，去除含氮化合物，降低化學(xué)需氧量，促進(jìn)水體氮循環(huán)。宋協(xié)法等[50]在養(yǎng)殖半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)稚魚的水體中添加以芽孢桿菌為主要成分的益生菌干粉后，稚魚的肥滿度和成活率分別提高了5.29%～5.41%和5.10%～5.67%。

益生菌自身繁殖分解了大量的有機(jī)物，為有益藻類提供了營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)了浮游動(dòng)物的生長(zhǎng)，維持了生態(tài)系統(tǒng)平衡。養(yǎng)殖水體中的殘餌和糞便使大量有機(jī)物積聚在池塘淤泥中，大量繁殖異養(yǎng)有害菌，污染水質(zhì)，消耗氧氣。加入益生菌可減少微生物耗氧量，改變水體和底泥的微生物組成和結(jié)構(gòu)。Devaraja等[51]向蝦池中投入了以芽孢桿菌為主的復(fù)合微生物制劑后，水體沉積物好養(yǎng)菌的數(shù)量增加，有害弧菌的數(shù)量降低，加速了水體中有機(jī)物的降解，改善了養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境。

3.2 水產(chǎn)動(dòng)物餌料添加劑

益生菌可以改善飼料品質(zhì)，提高飼料營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)飼料的吸收利用率，降低發(fā)病率，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高幼苗成活率，改善水產(chǎn)品品相及口感。Mirbakhsh等[52]在蝦苗培養(yǎng)中使用枯草芽孢桿菌SI02和花域枯草芽孢桿菌IS03(B.vallismortisIS03)，提高了幼苗的生長(zhǎng)率及成活率。覃初斌[53]等研究發(fā)現(xiàn)，鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus) CCICC6141和干酪乳桿菌(L.casei) BL23可以刺激斑馬魚(Daniorerio)卵母細(xì)胞的成熟，提高繁殖力以及胚胎質(zhì)量。Burbank等[42]發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌可以提高稚參變態(tài)率；張漢華等[54]在斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)養(yǎng)殖水體中添加益生菌制劑后發(fā)現(xiàn)，斑節(jié)對(duì)蝦性狀改善明顯，規(guī)格變大、活力變強(qiáng)、大小均勻、產(chǎn)量提高、飼料系數(shù)降低；孟小亮[24]對(duì)黃顙魚投喂地衣芽孢桿菌后，降低了魚體肌肉脂肪含量，增加肌肉粗蛋白以及風(fēng)味氨基酸含量，使魚肉鮮美適口，提高了水產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

很多研究表明，同種魚飼喂單一益生菌和復(fù)合益生菌的效果不同。潘雷[55]發(fā)現(xiàn)，大菱鲆(Scophthalmusmaximus)攝食添加含地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜酸乳酸菌(L.acidophilus)以及雙歧桿菌(Bifidobacterium)的復(fù)合益生菌的飼料后，存活率顯著提高。胡毅等[25]將3種菌株分別或組合為不同的復(fù)合益生菌加入飼料中，發(fā)現(xiàn)飼喂復(fù)合益生菌組的凡納濱對(duì)蝦的淀粉酶活力、血清蛋白濃度及溶菌酶活力明顯高于單一菌株組。但曾東[33]卻發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌的效果不一定優(yōu)于單一菌，單一枯草芽孢桿菌菌劑的作用效果優(yōu)于枯草芽孢桿菌與光合細(xì)菌復(fù)合菌劑和枯草芽孢桿菌與腸球菌復(fù)合菌劑。

4 展 望

益生菌為無毒、無殘留、無副作用的微生物制品，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中逐漸廣泛應(yīng)用，但水產(chǎn)動(dòng)物益生菌的研究及應(yīng)用依舊存在很多不足。首先，對(duì)益生菌抑制病原菌作用機(jī)理的研究都是在體外條件下進(jìn)行，而在體內(nèi)的作用機(jī)制是否與體外相同尚不清楚。益生菌與致病菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類和過程也不明確；其次，水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用很多益生菌并不是從水產(chǎn)動(dòng)物或者生活環(huán)境中篩選出來，而是來自某些陸生動(dòng)物，這就造成益生菌株無法定殖或不穩(wěn)定、效果不佳；第三，同一株菌在不同水生動(dòng)物體內(nèi)的作用效果、復(fù)合菌株與單一益菌株的益生效果、不同復(fù)合菌株最佳配伍都尚不清楚；最后，益生菌在宿主體內(nèi)是否會(huì)過量繁殖或突變、是否會(huì)對(duì)宿主產(chǎn)生不利影響、直接將益生菌添加到養(yǎng)殖水體中是否會(huì)破壞生態(tài)平衡等問題也亟待研究。

盡管益生菌在應(yīng)用中遇到諸多問題，但是隨著人們對(duì)水產(chǎn)品安全和品質(zhì)的要求不斷提高，以及水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病問題日益突出，益生菌成了可以替代抗生素及化學(xué)藥品，防止水產(chǎn)動(dòng)物病害的最佳選擇，所以必須加強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物益生菌篩選和應(yīng)用研究。第一，加強(qiáng)對(duì)已有益生菌菌種添加量、添加劑型、添加頻率、安全性和藥品配伍等問題的研究；第二，不斷加強(qiáng)針對(duì)特異性病原的開發(fā)和應(yīng)用的研究，不斷豐富水生動(dòng)物益生菌資源。第三，加強(qiáng)基礎(chǔ)理論研究，主要針對(duì)益生菌在體內(nèi)的增殖特點(diǎn)、作用機(jī)理及與免疫力的相互關(guān)系等研究，以期為水產(chǎn)動(dòng)物益生菌的篩選及應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

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Screening and Application of Probiotics in Aquaculture

HAN Zhuoran, SUN Jingfeng

(Tianjin Key Lab of Aqua-ecology and Aquaculture, Department of Fishery Science,Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China)

aquatic animal; probiotics; screening; application

S917.4

C

1003-1111(2016)01-0093-06

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.01.017

2015-06-01；

2015-08-31.

教育部重點(diǎn)科研項(xiàng)目(209006)；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(15JCZDJC34000)；天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)基金資助項(xiàng)目(TD12-5018).

韓卓然(1992-)，女，碩士研究生；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物病害及免疫.E-mail: hzr_0714@163.com.通訊作者：孫敬鋒(1976-)，男，教授，博士；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物病害防治.E-mail：sun_jf@163.com.