買買提艾力·哈斯木，白靖平，江仁兵

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院骨與軟組織科，新疆烏魯木齊　830000)

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血管內(nèi)皮生長因子在骨肉瘤及骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤中的表達(dá)水平分析

買買提艾力·哈斯木，白靖平，江仁兵

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院骨與軟組織科，新疆烏魯木齊830000)

【摘要】目的:探討原發(fā)骨肉瘤與骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤中的血管內(nèi)皮生長因子( VEGF)表達(dá)水平。方法:選取34例骨肉瘤以及16例骨轉(zhuǎn)移瘤患者腫瘤組織納入研究，另選取10例同時(shí)期單純骨折患者組織標(biāo)本作為對(duì)照。運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)3種組織VEGF表達(dá)，并比較不同骨組織VEGF表達(dá)水平差異。結(jié)果:骨肉瘤患者、骨轉(zhuǎn)移瘤患者VEGF表達(dá)均高于正常對(duì)照組，差異具有顯著性意義( P＜0. 01)，骨轉(zhuǎn)移瘤與骨肉瘤腫瘤組織VEGF表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0. 05)。不同組織學(xué)分型骨肉瘤VEGF陽性表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0. 05)。結(jié)論: VEGF在骨肉瘤與骨轉(zhuǎn)移瘤組織中表達(dá)異常增高。在不同類型骨腫瘤組織之間及不同組織學(xué)分型骨肉瘤之間VEGF表達(dá)無顯著差異性。

【關(guān)鍵詞】骨肉瘤;骨轉(zhuǎn)移瘤;血管內(nèi)皮生長因子

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2016-3-4 10∶16網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160304.1016.022.html

腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成［1］。血管內(nèi)皮生長因子( vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子之一，VEGF特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加血管通透性，以誘導(dǎo)腫瘤血管生成，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用［2］。骨肉瘤是骨原發(fā)性的惡性腫瘤，其生長速度較快，容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，VEGF起到很大的促進(jìn)作用［3］。骨轉(zhuǎn)移瘤多來源于肺癌及乳腺癌，VEGF的異常表達(dá)對(duì)骨轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)生亦有很大的作用［4］。本研究通過免疫組化法分析骨肉瘤以及骨轉(zhuǎn)移瘤(乳腺癌骨轉(zhuǎn)移)腫瘤組織中VEGF表達(dá)，了解骨肉瘤以及骨轉(zhuǎn)移瘤中VEGF表達(dá)差異。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2011年1月至2014年12月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的，經(jīng)病理確診的34例骨肉瘤患者以及16例骨轉(zhuǎn)移瘤患者的腫瘤組織標(biāo)本各200 mg，標(biāo)記并置于－70℃?zhèn)溆?。其中，骨肉瘤患者男?8例，女性16例;年齡29～57歲，平均( 42. 4± 10. 6)歲;按WHO分型，成骨細(xì)胞型14例，成軟骨細(xì)胞型12例，成纖維細(xì)胞型8例。骨轉(zhuǎn)移瘤均為女性乳腺癌患者術(shù)后骨轉(zhuǎn)移并病理性骨折，年齡32～49歲，平均( 40. 1±7. 4)歲。所有患者標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，5 mm連續(xù)切片。另選取10例同時(shí)期單純骨折患者組織標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2方法

對(duì)照組正常組織、原發(fā)骨肉瘤與骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤組織VEGF表達(dá)采用免疫組化SP法。兔抗人VEGF單克隆抗體和即用型SABC試劑盒均購自武漢博士德公司。嚴(yán)格按照試劑盒操作步驟說明書進(jìn)行，標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，經(jīng)常規(guī)切片，脫蠟，磷酸鹽緩沖液清洗，高溫抗原修復(fù)，進(jìn)行VEGF免疫組化染色，蘇木精復(fù)染，專用封片劑封片。

1.3結(jié)果評(píng)價(jià)

染色結(jié)果兩位高級(jí)病理專業(yè)技術(shù)人員以雙盲法讀片，結(jié)果取平均值計(jì)算。以核染色棕黃或者褐色為陽性，核未染色為陰性。結(jié)果判定:每個(gè)樣本隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞比率≥5%為陽性( + )表達(dá)，＜5%為陰性(－)表達(dá)。陽性率=陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)× 100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分比表示，不同骨肉瘤組織學(xué)分型之間VEGF陽性表達(dá)比價(jià)采用Fisher精確概率法檢驗(yàn)，骨肉瘤與骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤組織VEGF表達(dá)水平比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=0. 05，P＜0. 05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1骨肉瘤及骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤組織VEGF免疫組化

結(jié)果

骨肉瘤細(xì)胞及骨轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞VEGF蛋白染色均呈棕黃色顆粒狀強(qiáng)染，位于胞漿，間質(zhì)細(xì)胞陰性。對(duì)照組健康骨組織細(xì)胞VEGF表達(dá)陰性，幾乎無黃染。

2.2骨肉瘤及骨轉(zhuǎn)移瘤腫瘤組織VEGF表達(dá)水平比較

對(duì)照組VEGF陽性表達(dá)率為10% ( 1/10)。骨肉瘤患者腫瘤組織VEGF的陽性表達(dá)率為73. 53% ( 25/34)，其中，成骨細(xì)胞型、成軟骨細(xì)胞型及成纖維細(xì)胞型骨肉瘤組織VEGF的陽性表達(dá)率分別為71. 43%( 10/14)、75. 00% ( 9/12)及75. 00% ( 6/8)，不同組織學(xué)分型骨肉瘤VEGF陽性表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0.05)。骨轉(zhuǎn)移瘤患者腫瘤組織VEGF陽性表達(dá)率為68. 75% ( 11/16)。骨肉瘤患者、骨轉(zhuǎn)移瘤患者VEGF表達(dá)均高于正常對(duì)照組，差異具有顯著性意義( P＜0. 01)，骨轉(zhuǎn)移瘤與骨肉瘤腫瘤組織VEGF表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0. 05)。

3　討論

研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤發(fā)生發(fā)展與血管的形成密切相關(guān)，抑制腫瘤組織血管的生成可發(fā)揮抗腫瘤作用［5－6］。VEGF又稱血管滲透因子或血管增殖因子，是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能生長因子，人類VEGF基因位于染色體的6p21，全長28 kb。編碼VEGF的基因長約14 kb，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成［7］。VEGF可以特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，可誘導(dǎo)血管形成，增加血管通透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂與增殖，在胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合、腫瘤生長與轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用。VEGF蛋白表達(dá)隨腫瘤生物學(xué)行為惡性潛能的增加而顯著增加［8－9］，是被用于檢測(cè)腫瘤血管生成對(duì)抗血管生成藥物敏感性的常用指標(biāo)［10－11］。

研究表明，VEGF抑制劑可顯著減緩荷瘤動(dòng)物體內(nèi)的骨肉瘤組織生長速度，同時(shí)會(huì)降低肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤瘤體內(nèi)的血管密度，縮小腫瘤體積、降低腫瘤侵襲能力［12］。而直接應(yīng)用VEGF單克隆抗體可抑制荷瘤小鼠腫瘤生長和轉(zhuǎn)移［13］。Gordon等［11，14］通過靜脈輸注VEGF單克隆抗體治療晚期腫瘤患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)腫瘤均不同程度受到抑制。

本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果表明，VEGF在骨肉瘤和骨轉(zhuǎn)移瘤中表達(dá)水平均顯著高于正常組織( P＜0. 01)，說明無論是原發(fā)性還是轉(zhuǎn)移性腫瘤中VEGF的高表達(dá)并非偶發(fā)事件。另外一個(gè)方面，不同組織學(xué)分型骨肉瘤中VEGF表達(dá)水平無顯著差異提示VEGF的表達(dá)水平在各型腫瘤中均高表達(dá)但是并不具備特異性，提示VEGF可能是對(duì)不同惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展都起到比較重要的作用。綜上所述，VEGF可作為骨肉瘤及骨轉(zhuǎn)移瘤的診斷、治療以及預(yù)后判斷的一個(gè)新指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

［1］Basson M.Tumor angiogenesis: Tumors fight back with a lectin ［J］.Nature Medicine，2014，20 ( 3) : 250.

［2］Iovino F，F(xiàn)erraraccio F，Orditura M，et al.Serum vascular endothelial growth factor ( VEGF) levels correlate with tumor VEGF and p53 overexpression in endocrine positive primary breast cancer ［J］.Cancer Investigation，2008，26( 3) : 250－255.

［3］Holzer G，Hamilton G，Angelberger P，et al.Imaging of Highly Malignant Osteosarcoma with Iodine-123-Vascular Endothelial Growth Factor［J］.Oncology，2012，83( 1) : 45－49.

［4］Weilbaecher KN，Guise TA，Mccauley LK.Cancer to bone: a fatal attraction［J］.Nature Reviews Cancer，2011，11( 6) : 411－425.

［5］Ferrara N.Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress［J］.Endocrine Reviews，2004，25 ( 4) : 581－611.

［6］李春海，李克勤.腫瘤微血管生成的機(jī)制與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移［J］.中華腫瘤雜志，2000，22( 3) : 181－183.

［7］Zhang ZL，Zhang JF，Yuan YF，et al.Suppression of angiogenesis and tumor growth in vitro and in vivo using an anti－angiopoitin-2 single-chain antibody［J］.Experimental＆Therapeutic Medicine，2014，7( 3) : 543－552.

［8］馬占龍，鄧紅.VEGF及其促腫瘤血管形成作用的研究進(jìn)展［J］.江蘇醫(yī)藥，2004，30( 1) : 50－51.

［9］段澤星，謝立群.VEGF在腫瘤生長和血管生成中的作用［J］.世界華人消化雜志，2010，( 27) : 2894－2900.

［10］李伊培，郗永義，張連成，等.抗VEGF/VEGFR靶向腫瘤血管藥物的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，14 ( 16) : 3158－3162.

［11］Gordon MS.Phase I safety and pharmacokinetic study of recombinant human anti-vascular endothelial growth factor in patients with advanced cancer［J］.J Clin Oncol，2001，19( 3) : 843－850.

［12］張先燎.血管內(nèi)皮生長因子及其受體與骨肉瘤關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15( 6) : 567－571.

［13］李敏，陳浩，秦嶺，等.抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體bevacizumab對(duì)實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜黑色素瘤生長的影響［J］.中華眼底病雜志，2011，27( 1) : 37－41.

［14］Zhao Y，Adjei AA.Targeting Angiogenesis in Cancer Therapy: Moving Beyond Vascular Endothelial Growth Factor［J］.Oncologist，2015，20( 6) : 660－673.

(學(xué)術(shù)編輯:馮剛)

論著

Analysis of the level of vascular endothelial growth factor expression in osteosarcoma and bone metastatic neoplasm

Maitiaili·Buaijiaer Hasimu，BAI Jing-ping，JIANG Ren-bing
( Department of Bone and Soft Tissue，Cancer Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumchi 830000，Xinjiang，China)

【Abstract】Objective: To explore the level of vascular endothelial growth factor expression in osteosarcoma and bone metastatic neoplasm.Methods: Tumor tissue specimens from 34 patients with osteosarcoma and 16 patients with bone metastatic neoplasm and tissue specimens from patients with simple fracture ( control group) were enrolled for detecting the levels of VEGF expression of 3 kinds by using immunohistochemistry and analyzing the differences of VEGF expression in different bone tissues.Results: The levels of VEGF were higher in patients with osteosarcoma and bone metastatic neoplasm than that in control group，with statistical significance ( P＜0. 01).There was no statistical difference in the level of VEGF expression between tumor tissues of osteosarcoma and bone metastatic neoplasm( P＞0. 05) and no significant difference in the positive VEGF expression among different histological classification of osteosarcoma ( P＞0. 05).Conclusion: VEGF is expressed highly in tumor tissues of osteosarcoma and bone metastatic neoplasm.Moreover，no difference is found in different types of bone tumor tissues and the VEGF expression among different histological classification of osteosarcoma.

【Key words】Osteosarcoma; Bone metastatic neoplasm; Vascular endothelial growth factor

作者簡介:買買提艾力·哈斯木( 1978－)，男，副主任醫(yī)師。E-mail: maimaitiailihasimu@126.com

基金項(xiàng)目:新疆自治區(qū)衛(wèi)生廳青年基金( 2012Y07)

收稿日期:2015－04－08

doi:10. 3969/j. issn. 1005-3697. 2016. 01.11

【文章編號(hào)】1005-3697( 2016) 01-039-03

【中圖分類號(hào)】R738

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A