蔡　鋒　馬紅巖

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Claudin-3在人胰腺癌組織芯片中的表達及其臨床意義

蔡鋒1馬紅巖2

【摘要】目的 檢測Claudin-3在人胰腺癌中的表達情況，探討人胰腺癌發(fā)病中Claudin-3所起的作用。方法 構(gòu)建包含64例胰腺導(dǎo)管腺癌及16例慢性胰腺炎組織的80點陣的組織芯片。利用免疫組化方法檢測該組織芯片中Claudin-3的表達情況，探討其與人胰腺癌病理因素的關(guān)系。結(jié)果 64例人胰腺癌組織中，Claudin-3陽性表達率是79．69%（51/64），與慢性胰腺炎相比，提示Claudin-3與胰腺癌相關(guān)（P＜0．05）；Claudin-3表達與性別、年齡、組織分化程度和腫瘤臨床分期無相關(guān)性。結(jié)論 胰腺癌與Claudin-3的陽性表達相關(guān)，這提示Claudin-3與人胰腺癌的發(fā)生發(fā)展存在緊密關(guān)系，但和胰腺癌的臨床病理無相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】胰腺癌；Claudin-3；組織芯片

2 476100商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校

胰腺癌是消化系統(tǒng)中惡性程度極高的腫瘤，由于有隱匿起病、發(fā)展迅速的臨床特點，待臨床癥狀出現(xiàn)時大多已屬晚期，預(yù)后極差。緊密連接（tightjuctions，TJs）結(jié)構(gòu)為近年研究的熱點，Claudins為其重要組成部分，大量研究表明，結(jié)構(gòu)及功能的改變和腫瘤、炎癥等許多疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系［1-4］。

組織芯片（tissue microarray，TM），又稱組織微陣列，可在同等物理、化學(xué)等條件下檢測大量組織標本，具有快速、經(jīng)濟、減小實驗誤差等許多優(yōu)點，是一種較新的以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于臨床及基礎(chǔ)研究［5-7］。本研究利用免疫組織化學(xué)染色方法（SP）結(jié)合TM技術(shù)研究Claudin-3在胰腺癌組織中的表達情況，探討Claudin-3在人胰腺癌診斷和治療中的臨床應(yīng)用價值。

1　材料和方法

1.1材料與分組

人胰腺癌及慢性胰腺炎組織均取自我院2008～2014年病理科存放的病理標本，經(jīng)過經(jīng)過條件篩選共計80例，胰腺癌標本要求手術(shù)前既沒有接受化療，又沒有接受放療等特殊治療，共64例，慢性胰腺炎標本取自非腫瘤的胰腺組織，共16例。女性患者29例，男性患者35例，年齡37～69歲，中位年齡57歲，平均年齡（55.36±10.64）歲。根據(jù)2012年TNM的分期標準，Ⅲ～Ⅳ期36例，Ⅰ～Ⅱ期28例，樣本含量和分組情況如表1所示。

1.2實驗方法

采用高密度構(gòu)建組織芯片的方法，制作兩個，分別用于免疫組織化學(xué)染色和陰性對照使用。兔抗人Claudin-3單克隆抗體采購于上海安研商貿(mào)有限公司。應(yīng)用SP法進行Claudin-3蛋白的免疫組織化學(xué)染色，最后觀察結(jié)果。

1.3結(jié)果判定

在高倍光鏡條件下，陽性染色的判定標準是以細胞出現(xiàn)棕黃色顆粒為準，其中根據(jù)陽性表達細胞數(shù)量的比例，以確定表達等級。有陽性表達細胞，但數(shù)量≤10%時，判定為低表達；而陽性表達細胞數(shù)在10%～50%時，或陽性表達細胞數(shù)≥50%時，均判定為高表達。

1.4統(tǒng)計學(xué)應(yīng)用

所得數(shù)據(jù)均運用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，進行統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗水準均統(tǒng)一為P≤0.05。

2　實驗結(jié)果

2.1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

在本實驗中，Claudin-3在16例慢性胰腺炎組織中，有5例呈低表達狀態(tài)，陽性表達率31.25%。而在64例胰腺癌組織中陽性表達的標本為51例，且均呈高表達狀態(tài)，陽性表達率為79.69%；實驗結(jié)果還同時表明：Claudin-3的表達不在胞質(zhì)或胞核中，而主要在細胞膜上；Claudin-3在5例慢性胰腺炎組織中的低表達情況，其陽性細胞數(shù)及染色強度低于胰腺癌組。

2.2統(tǒng)計學(xué)測定結(jié)果

經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)測定，Claudin-3在胰腺癌組織中是呈現(xiàn)高表達狀態(tài)，與慢性胰腺炎組織中的低表達狀態(tài)相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝12.09，P＜0.05），但在組間比較胰腺導(dǎo)管腺癌中可以發(fā)現(xiàn)，腫瘤TNM分期之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果同樣表明Claudin-3的表達與患者性別、年齡均無差異，內(nèi)容詳見表1。

表1　Claudin-3在組織芯片的表達情況

3　討論

從全世界范圍來看，胰腺癌的發(fā)病均有逐年增加的趨勢。胰腺癌早期就具有侵襲和轉(zhuǎn)移性是其惡性生物學(xué)行為的一個特征，在胰腺癌發(fā)生的早期即存在胰腺外器官的轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致80%以上的胰腺癌患者，在診斷明確時已經(jīng)失去了行胰十二指腸切除術(shù)的根治手術(shù)機會［8］，5年生存率低于6%［9］。有大量研究表明，胰腺癌要想獲得最佳的治療效果，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷是最為關(guān)鍵的［10］，研究顯示，早期胰腺癌的手術(shù)切除率，可以達到90%以上，而5年生存率則可達到37%以上，與中晚期胰腺癌相比較，臨床效果有著極大的優(yōu)勢。人們通過借助腫瘤分子生物學(xué)，尋找有效靶點，對胰腺癌進行早期診斷及治療，闡明胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，明確胰腺癌早期即存在遠處轉(zhuǎn)移的機制，始終是胰腺癌基礎(chǔ)及臨床研究的熱點。

本次實驗在同等條件下，在一張組織芯片切片上同時檢測了Claudin-3蛋白在16例慢性胰腺炎組織中和64例胰腺癌組織中的表達情況，通過結(jié)果分析，我們發(fā)現(xiàn)，Claudin-3蛋白在胰腺癌組織中呈現(xiàn)的是高度表達狀態(tài)（79.69%，51/64），主要在細胞膜上有較高表達，而在胞核及胞質(zhì)中沒有表達，這與Claudin-3在其他腫瘤組織中的實驗結(jié)果相符合［11-14］。同時我們還發(fā)現(xiàn)，Claudin-3蛋白在16例慢性胰腺炎組織中有5例呈低表達狀態(tài)（31.25%，5/16），這表明Claudin-3在胰腺癌組織中的表達情況相對于慢性胰腺炎組織而言具有一定特異性。本實驗同時表明，胰腺癌組織中Claudin-3的表達在患者性別、年齡及腫瘤臨床分期方面存在的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。本次實驗結(jié)果還表明，Claudin-3蛋白在胰腺癌的早期也存在高表達狀態(tài)，因此我們可以推測，Claudin-3在胰腺癌的早期診斷方面，或許具有重要的臨床使用價值。本實驗同時提醒我們，Claudin-3在慢性胰腺炎呈現(xiàn)的低表達狀態(tài)，或許可以推斷慢性胰腺炎在轉(zhuǎn)變?yōu)橐认侔┑倪^程中，Claudin-3也可能發(fā)揮著非常重要的作用，其在腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移及增值中亦可能扮演著極其重要的角色。

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Expression of Claudin-3 in Pancreatic Carcinoma and Its Clinical Significance Using Tissue Microarrays

CAI Feng1MA Hongyan21 First Hostipal of Shangqiu，Shangqiu 476100，China，2 Shangqiu Medical college，Shangqiu 476100，China

【Abstract】

Objective In order to test the expression of Claudin-3 in human pancreatic cancer and to discuss its role in oncogenesis of pancreatic carcinoma．Methods Human pancreatic carcinoma tissue microarray was constructed containing 80 cores of 16 chronic pancreatitis tissues and 64 pancreatic cancers． By immunohistochemistry，the expression of Claudin-3 was detected and the relationship between Claudin-3 and the clinical pathology of pancreatic cancer was analysed． Results It proved the positive rate of Claudin-3 in human pancreatic cancer was 79．69%（51/64），Claudin-3 staining was more intense in malignant cells than in chronic pancreatitis tissues（P＜0．05）． No evidence was found for an association between Claudin-3 expression and age at surgery，gender，the extent of tissue differentiation，tumor grade． Conclusion The expression of Claudin-3 is related to the pancreatic cancer and Claudin-3 play a vital role in the development of pancreatic carcinoma，but Claudin-3 was no correelated with clinical pathology of pancreatic carcinoma．

【Key words】Pancreatic carcinoma，Claudin-3，Tissue microarray

doi:10．3969/j．issn．1674-9316．2016．01．126

【中圖分類號】R361

【文獻標識碼】B

【文章編號】1674-9316（2016）01-0171-02

作者單位：1 476100 商丘市第一人民醫(yī)院