蘇勝宇，賀茂強(qiáng)，韓長志**

（西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院云南省森林災(zāi)害預(yù)警與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室云南省森林保護(hù)重點(diǎn)學(xué)科，云南 昆明 650224）

蘑菇屬中國新記錄種
——松林蘑菇*

蘇勝宇，賀茂強(qiáng)，韓長志**

（西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院云南省森林災(zāi)害預(yù)警與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室云南省森林保護(hù)重點(diǎn)學(xué)科，云南 昆明 650224）

根據(jù)形態(tài)特征及基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育分析，作者對(duì)采自云南麗江老君山大型真菌標(biāo)本ZRL2014261進(jìn)行了研究，經(jīng)鑒定為蘑菇屬（Agaricus）一新記錄種——松林蘑菇（A.cupressophilus Kerrigan）。該種最初描述于美國。該文對(duì)該種的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行了詳細(xì)描述，并附有相關(guān)形態(tài)特征照片。標(biāo)本保存于中國科學(xué)院微生物研究所菌物標(biāo)本館。

蘑菇屬；蘑菇科；新記錄種；中國

蘑菇屬（Agaricus L.）是蘑菇科（Agaricaceae）的模式屬，隸屬于擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）傘菌目（Agaricales)。主要特征為：菌蓋多具鱗片；菌柄中生，具菌環(huán)；菌褶離生，初期為白色，后期變?yōu)榉奂t色、淺棕色、紅棕色至深棕色；菌肉大多由非淀粉反應(yīng)的菌絲構(gòu)成；孢子淺棕色至深棕色。該屬包含有重要的食用菌栽培種，如雙孢蘑菇（A.brunnescens Peck）、姬松茸（A.subrufescens Peck），也包含有大量的野生可食用種類，如大紫蘑菇（A.augustus Fr.）、橙黃蘑（A.perrarus Schulzer）、麻臉蘑菇（A.villaticus Brond.）、紅肉蘑菇 （A.haemorrhoidarius Schulzer）、雙環(huán)林地蘑菇（A.placomyces Peck）、白杵蘑菇（A.nivescens Moeller）等。

蘑菇屬幾乎分布在全世界各大洲，有400多種[1]。我國蘑菇屬種類分布廣，從遼寧、內(nèi)蒙古、吉林、黑龍江到云南、四川、西藏、新疆都有分布[2]，但在中國僅約50多種被報(bào)道。

云南省麗江老君山位于滇西北四縣交界處，面積大，地形、地貌、氣候、植被類型復(fù)雜多樣，原始針林、針闊混交林、闊葉林的面積超過1 000km2，并具有從亞熱帶常綠闊葉林到高山流石灘植被完整的植被垂直分布類型[3]，是滇西北最重要的生態(tài)區(qū)——怒江和瀾滄江峽谷生態(tài)區(qū)、橫斷山脈南部最重要的生物多樣性熱點(diǎn)地區(qū)。

2014年7月～8月，筆者在對(duì)麗江老君山自然保護(hù)區(qū)進(jìn)行大型真菌調(diào)查期間，發(fā)現(xiàn)了保護(hù)區(qū)內(nèi)蘑菇屬1個(gè)國內(nèi)新記錄種：松林蘑菇A.cupressophilus Kerrigan，因其種加詞cupressophilus的寓意是常見于柏木林的蘑菇，故本文給予中文名松林蘑菇。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本采集

在保護(hù)區(qū)內(nèi)選取大型真菌分布較為集中的地區(qū)，采用踏查的方法采集大型真菌標(biāo)本。在野外采集時(shí)及時(shí)拍照，保存其自然生存狀態(tài)影像，并記錄采集地的生境，之后用錫箔紙包裹帶回。

1.2 標(biāo)本的形態(tài)學(xué)研究

采集當(dāng)天首先對(duì)標(biāo)本宏觀形態(tài)特征進(jìn)行描述測(cè)量，包括菌蓋、菌柄、菌褶及菌環(huán)；然后把標(biāo)本及時(shí)放入烘干器中烘干，裝入自封塑料袋保存。野外考察結(jié)束后，回到實(shí)驗(yàn)室，先經(jīng)5%的KOH軟化后，對(duì)菌褶和菌蓋表皮分別進(jìn)行徒手切片，觀察并記錄微觀形態(tài)特征，包括菌褶菌髓結(jié)構(gòu)、擔(dān)孢子、擔(dān)子及囊體的形態(tài)大小、菌蓋表皮的解剖結(jié)構(gòu)類型等特征。標(biāo)本保存于中國科學(xué)院微生物研究所菌物標(biāo)本館（HMAS）。

1.3 分子系統(tǒng)學(xué)研究

取一小片標(biāo)本組織（菌褶） 使用E.Z.N.A.TM Forensic Kit,D3591－O1試劑盒（Omega Bio－Tek，美國） 提取總 DNA，檢測(cè)DNA濃度；選取ITS4/ ITS51241作引物對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，具體的擴(kuò)增反應(yīng)體系和條件見參考文獻(xiàn) [7]。將擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳凝膠檢測(cè)，條帶清晰明亮的話就可送往測(cè)序公司做正反向測(cè)序，獲得ITS序列。

將獲得的ITS序列使用BioEdit軟件打開進(jìn)行人工校正，對(duì)套峰和錯(cuò)亂序列進(jìn)行處理。將處理過的序列和其他從GenBank下載的可靠序列一起構(gòu)建數(shù)據(jù)集。通過Clustal X比對(duì)并人工調(diào)整后，采用軟件MrModeltest2.2選擇建樹的最適分析模型，用Mr Bayes 3.0b4軟件構(gòu)建貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹，并計(jì)算后驗(yàn)概率來檢驗(yàn)系統(tǒng)樹的可靠性[8－9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)描述

菌蓋直徑16 mm～43 mm，平展，中央稍凸起，邊緣表皮延伸并開裂，菌蓋表面被淺棕色鱗片；菌肉厚1 mm～2 mm；菌褶離生，深棕色，排列緊密，寬3 mm～4 mm；菌緣整齊；有6種不同長度的菌褶。菌柄圓柱狀，長29 mm～49 mm，頂部稍細(xì)、直徑5 mm，基部直徑6 mm；表面灰棕色，具絲質(zhì)光澤或被絲狀物，內(nèi)部中空；菌環(huán)膜質(zhì)，單層，部分與菌蓋邊緣相連，直徑16 mm～43 mm，上表面深棕色，下表面棕灰色（圖1）。氣味為苦杏仁味。菌蓋表皮、菌肉、菌柄遇5%KOH均變?yōu)辄S色。

擔(dān)孢子 （4.3～5.7） μm×（3.3～4.3） μm[X=（4.8±0.3） ×（3.8±0.3），Q=1.1－1.7，Qm=1.3± 0.1，n=20]，橢圓形至卵圓形，暗棕色、棕色，無芽孔。擔(dān)子（15.4～22.8） μm×（6.4～8.6） μm，棒狀，具4個(gè)小梗，稀1個(gè)或2個(gè)小梗。褶緣囊體少，梨形或?qū)挵魻睿?4～29）μm×（7.8～17.7）μm。菌蓋表皮由直徑4 μm～10 μm的菌絲組成，淺棕色（圖1）。

研究標(biāo)本：云南省麗江市石鼓鎮(zhèn)老君山自然保護(hù)區(qū)，云南松（Pinus yunnanensis）林，2014年7月31日，賀茂強(qiáng)（ZRL2014261 HMAS 273722）。林中散生。

圖1 松林蘑菇（Agaricus cupressophilus）的形態(tài)特征Fig.1 Morphology of Agaricus cupressophilus

2.2 分子系統(tǒng)學(xué)研究結(jié)果

數(shù)據(jù)由52條序列構(gòu)成，分別代表蘑菇屬中的6個(gè)組，長度為680 bp。Bivelares組在系統(tǒng)發(fā)育樹中單系發(fā)生并具有100%的后驗(yàn)概率支持率。我們的樣品和從GenBank下載的模式標(biāo)本序列（A.cupressophilus FS22 EU258676 TYPE） 聚在一起，并有95%的支持率，而與相似種A.tlaxcalensis Callac et G.Mata和A.cupressicola Bon&Grilli則是不同分枝（見圖2）。同時(shí)樣品的ITS序列在與模式標(biāo)本序列的對(duì)比中只有1個(gè)堿基的不同。以上分子系統(tǒng)發(fā)育研究顯示我們的標(biāo)本與A.cupressophilus的模式標(biāo)本應(yīng)該為同一種。

圖2 基于ITS序列的蘑菇屬貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Bayesian phylogenetic tree based on ITS sequences of Agaricus

3 討論

本文標(biāo)本ZRL2014261與模式標(biāo)本A.cupressophilus的形態(tài)學(xué)特征基本一致。比如它們外形都較為纖細(xì)，菌蓋直徑都在1 cm～7 cm，淡灰色；菌柄也都多為圓柱狀，稍有彎曲，中空，微帶紅色；顯微鏡下孢子都是橢圓形，孢子大小多數(shù)在（4.2～4.9）μm×（3.4～4.2） μm，擔(dān)子都為棒狀，大小都為（19～23）μm×（6～7）μm[11]。標(biāo)本ZRL2014261的擔(dān)孢子有極少數(shù)比模式標(biāo)本描述的稍大，但是在微觀形態(tài)描述測(cè)量中，極少數(shù)的擔(dān)孢子大小不影響整體擔(dān)孢子的大小范圍。A.cupressophilus與 A.tlaxcalensis在系統(tǒng)發(fā)育上相近，在形態(tài)學(xué)上都具明顯的鱗片、鱗片顏色都是淺棕色到棕色、形狀也較為相似。但是它們的形態(tài)區(qū)別特征也較為明顯，如A. cupressophilus子實(shí)體切開后變色不明顯，而A.tlaxcalensis的子實(shí)體切開后明顯變紅；A.cupressophilus的褶緣囊體為棒狀、梨形，不串生成鏈，但A.tlaxcalensis的褶緣囊體則串生成鏈。在對(duì)A.cupressophilus與另一個(gè)形態(tài)和系統(tǒng)發(fā)育相近種A.cupressicola的對(duì)比中發(fā)現(xiàn)，它們的孢子無區(qū)別，大小、顏色（淺棕色、棕色、深棕色）都很相似；都大量出現(xiàn)擔(dān)子小梗數(shù)目為1或者2的擔(dān)子；同樣都在松科植物下生長。不同點(diǎn)則在于它們菌蓋上的鱗片，A. cupressophilus的菌蓋上具明顯鱗片，而A.cupressicola的菌蓋表面為絨毛狀，鱗片不明顯。同時(shí)我們對(duì)標(biāo)本的ITS序列的分子系統(tǒng)學(xué)分析也證明其跟A. cupressophilus為同一種。綜合形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)學(xué)研究結(jié)果，可以確定這個(gè)標(biāo)本與A.cupressophilus的模式標(biāo)本為同一個(gè)種[11]，并表明該種的生態(tài)環(huán)境除了柏木林外還可在云南松林中分布。

分子研究證明，該種屬于蘑菇屬中的Bivelares組。該組的成員大多為可食用的，而且都是易于人工栽培[11]。該種在我國的發(fā)現(xiàn)，為增加我國野生食用菌資源提供了必要的理論依據(jù)。

[1]桂陽，朱國勝，劉作易.中國西南亞熱帶區(qū)蘑菇屬Arvens es組三個(gè)新種及潛在的生物多樣性 [C]//中國菌物學(xué)會(huì)第六屆會(huì)員代表大會(huì)（2014年學(xué)術(shù)年會(huì)）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會(huì)議摘要.北京：中國菌物學(xué)會(huì)，2014.

[2]陳美元，廖劍華，王波，等.中國野生蘑菇屬90個(gè)菌株遺傳多樣性的DNA指紋分析 [J].食用菌學(xué)報(bào)，2009，16（1）：11－16.

[3]龍勇誠，譚碧霞.老君山項(xiàng)目保護(hù)規(guī)劃 [R].昆明：美國大自然保護(hù)協(xié)會(huì)中國項(xiàng)目部，2002.

[4]曾輝，王澤生，毛寧.蘑菇屬中常見種及其應(yīng)用[J].食用菌，1995，17（1）：2-4.

[5]羅曉萍，王俊燕.蘑菇屬的初步研究[J].科技信息（科學(xué)教研），2007（24）：227，272.

[6]李宇.中國蘑菇屬新種和新記錄種[J].云南植物研究，1990，12（2）：154-160

[7] Zhao RL,Karunarathnas,Rasps O,et al.Major clades in tropical Agaricus[J].Fungal Divers,2011,51(1):279-296.

[8]Huelsenbeck JP,Ronquist F,Bollback JP.Bayesian inference of phylogeny and in its impact on evolutionary biology[J].Sci ence,2001 294(5550):2310-2314.

[9]Ronquist F,Heulsenbeck JP.MrBayes 3:Bayesian phyloge netic inference under mixed models[J].Bioinformatics,2003, 19(12):1572-1574.

[10]Wang Zhuo-Ren,Parra Luis A,Callac Philippe,et al.Edi ble species of Agaricus (Agaricaceae) from Xinjiang Province (Western China)[J].Phytotaxa,2015(202):185-197.

[11]Kerrigan RW,Callac P,Parra LA.New and rare taxa in A garicus section Bivelares (Duploannulati)[J].Mycologia, 2008,100(6):876-892.

[12]于清華，周均亮，趙瑞琳.蘑菇屬中國新記錄種--細(xì)叢卷毛柄蘑菇[J].食用菌學(xué)報(bào)，2014，21（1）：64-68.

[13]黃年來.中國食用菌百科[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1993：134-135.

[14]張光亞.云南食用菌[M].昆明：云南人民出版社，1984：88-97.

[15]卯曉嵐.中國經(jīng)濟(jì)真菌[M].北京：科學(xué)出版社，1998：189-207.

[16]鄧叔群.中國的真菌[M].北京：科學(xué)出版社，1963.

[17]Parra LA.Agaricus L.and Allopsalliota Nauta&Bas[M]. Alassio:Edizioni Candusso,2008.

Agaricus cupressophilus,a New Record in China

SU Sheng-yu,HE Mao-qiang,HAN Chang-zhi
（Key Laboratory of Forest Disaster Warning and Control in Yunnan Province,Key Subject of Forestry Protection in Yunnan Province,College of Forestry,Southwest Forestry University,Kunming 650224,China）

During study on macrofungi from Laojun Mountain National Natural Reserve,Lijiang,Yunnan province,we charac terized a specimen ZRL2014261 by morphological and ITS data.It was identified as Agaricus cupressophilus,which was origi nally described from North America and is firstly reported from China.The morphological description of this species is proved, along with a color plate.The specimen was preserved in Herbaria of Institute of Microbial Fungi,the Chinese Academy of Sci ences.

Agaricus;Agaricaceae;new record;China

S646.9

A

1003-8310（2016）02-0007-04

10.13629/j.cnki.53－1054.2016.02.002

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31000013、31360014、31470152）。

蘇勝宇（1989－），男，在讀碩士研究生，主要從事資源微生物研究。E－mail:471757165@qq.com.

**通信作者：韓長志（1982－），男，博士，講師，主要從事植物病理研究。E－mail:1532088733@qq.com.

2016－01－04