龐國(guó)峰 山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 266500

一例雞新城疫病毒感染的診斷

龐國(guó)峰 山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 266500

2015年10月，某規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了一起肉雞的傳染性、快速死亡病例，發(fā)病雞表現(xiàn)出呼吸困難、下痢、病死率和死亡率較高、漿膜和黏膜出血等臨床特征，從臨床診斷疑似為新城疫病毒感染，無(wú)菌取病料送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR檢測(cè)和病毒分離鑒定等進(jìn)行確診，結(jié)合臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，最終確診該養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了新城疫病毒的感染。

新城疫病毒；感染；臨床診斷；實(shí)驗(yàn)室診斷

雞新城疫毒病是由雞新城疫病毒引起的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病［1］。該病感染的宿主范圍比較廣，雞、鴨、鵝、火雞、鵪鶉和鴿子等均易感［2］。病雞和帶毒雞是NDV的主要傳染源，可經(jīng)呼吸道和消化道傳播，一年四季都可發(fā)生，但以春秋季發(fā)病較多。該病傳播速度快、發(fā)病率和死亡率高，是目前危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)最為嚴(yán)重的烈性傳染病之一和我國(guó)長(zhǎng)期以來(lái)一直堅(jiān)持免疫的主要傳染病之一［4］。2015年10月，某規(guī)模肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了一起以呼吸困難、下痢、病死率和死亡率較高以及漿膜和黏膜出血為主要特征的傳染病，經(jīng)臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)和病毒分離鑒定，最終確診為由新城疫病毒感染所致?，F(xiàn)將整個(gè)診斷過(guò)程介紹如下。

1　材料和方法

（1）主要試劑。一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒、DL2000 DNA Marker均購(gòu)自寶生物（大連）工程有限公司，抗新城疫病毒陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

（2）實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)。將無(wú)菌采取病死雞的肝臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織病料加滅菌生理鹽水研磨，反復(fù)凍融3次，12000r/分鐘離心5分鐘，取上清液參照參考文獻(xiàn)［5］中的方法提取基因組RNA，并按照其RTPCR擴(kuò)增條件分別進(jìn)行新城疫強(qiáng)毒和弱毒的RTPCR檢測(cè)。

（3）SPF雞胚病毒分離。將上述處理的病毒上清液加入青霉素和鏈霉素，4℃作用6小時(shí)以上，之后將處理的樣品接種10日齡SPF雞胚，0.1mL/胚，置37℃孵化器內(nèi)培養(yǎng)120小時(shí)，24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚棄去，24～120小時(shí)死亡的雞胚4℃保存。

（4）雞胚病變觀察。120小時(shí)后收獲所有雞胚尿囊液，觀察接種雞胚的胚體病變情況。

（5）血凝試驗(yàn)。取收獲的雞胚尿囊液做血凝試驗(yàn)（HA）。

（6）病毒中和試驗(yàn)。取收獲的雞胚尿囊液與等量抗雞新城疫病毒特異性血清混合，室溫中和1小時(shí)后，接種SPF雞胚10只，觀察120小時(shí)，觀察雞胚的胚體病變情況，收獲雞胚尿囊液做血凝試驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

（1）臨床癥狀及剖檢變化。發(fā)病雞精神萎靡，眼半閉半睜，食欲下降，咳嗽，呼吸困難，有粘性鼻液，張口呼吸，病程短，2～5天死亡。剖檢可見(jiàn)全身黏膜出血，淋巴結(jié)腫大、出血，腺胃黏膜出血、壞死，盲腸扁桃體腫大、出血。

（3）RT-PCR檢測(cè)結(jié)果。組織病料經(jīng)新城疫強(qiáng)毒擴(kuò)增引物可擴(kuò)增出349bp的特異性條帶，與明文龍等［5］的報(bào)道完全一致。而組織病料經(jīng)新城疫弱毒擴(kuò)增引物未擴(kuò)增出任何特異性條帶。表明組織病料中含有新城疫強(qiáng)毒，而沒(méi)有新城疫弱毒。

（4）胚體病變觀察結(jié)果。接種后72～120小時(shí)，接種的雞胚陸續(xù)出現(xiàn)死亡，剖檢觀察死亡雞胚可見(jiàn)胚體全身出血，頭部、足趾和翅膀出血嚴(yán)重。

（5）血凝試驗(yàn)（HA）結(jié)果。收獲的尿囊液對(duì)1％雞紅細(xì)胞的血凝效價(jià)為1∶1024。

（6）病毒中和試驗(yàn)結(jié)果。雞胚尿囊液與抗雞新城疫病毒陽(yáng)性血清中和后接種的雞胚至接種后120小時(shí)，10枚雞胚全部健活，剖檢雞胚未見(jiàn)病變。收獲其尿囊液做血凝試驗(yàn)，對(duì)1％雞紅細(xì)胞無(wú)凝集性，表明分離毒株可被抗雞新城疫病毒陽(yáng)性血清特異性中和。

（7）綜合診斷結(jié)果。結(jié)合臨床癥狀、剖檢病理變化等臨床診斷結(jié)果以及RT-PCR檢測(cè)、病毒分離、胚體病變觀察、分離毒株血凝試驗(yàn)、分離毒株中和試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，確診為此次疫病由新城疫病毒感染所致。

3　討論

新城疫病毒不僅對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害嚴(yán)重，也是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一，能夠造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。新城疫病毒的宿主范圍廣泛，由于野生飛禽的存在，病毒很難凈化，預(yù)防該病主要通過(guò)疫苗免疫接種和加強(qiáng)飼養(yǎng)場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常消毒。新城疫病毒一旦在養(yǎng)殖場(chǎng)存在就很難根除，在雞群中長(zhǎng)期存在，當(dāng)雞群免疫力下降時(shí)會(huì)引發(fā)疾病。疫苗免疫雞群也可以發(fā)生新城疫，常由于疫苗接種時(shí)受母源抗體的影響，接種疫苗后不能獲得免疫力，當(dāng)雞群中存在新城疫強(qiáng)毒時(shí)導(dǎo)致雞群發(fā)病。

［1］楊麗麗，鄒冬輝.新城疫病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展［J］.吉林農(nóng)業(yè)，2015，（19）：90-91.