吳玉玉

(河南省延津縣畜牧局 453200)

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公豬精液的冷凍保存及解凍

吳玉玉

(河南省延津縣畜牧局 453200)

一般利用液氮(-196℃)作冷源(過去有用干冰作冷源的)，將新鮮公畜精液經(jīng)過處理，分裝，冷凍保存，即為凍精制作。本文就豬精液冷凍保存稀釋液的制作、精液稀釋、降溫和平衡、精液的分裝和凍結(jié)及凍精的解凍進(jìn)行技術(shù)性闡述。

1精液冷凍保存稀釋液

精液冷凍保存的稀釋液一般以葡萄糖、乳糖、甘油為主要成分，其中甘油濃度以1%～3%為宜。據(jù)報道，一些配方中建議加入EDTA(乙二胺四乙酸)，可起到良好作用。精液品質(zhì)與冷凍效果密切相關(guān)，最好用濃精液制作凍精。

2精液稀釋

一般多采用一次稀釋法或二次稀釋法，三次稀釋法很少用。①一次稀釋法：常用于顆粒精液。把含甘油的稀釋液按要求比例一次加入精液之中，在8℃下平衡3.5～6 h，保證甘油能夠完全浸入精子內(nèi)，產(chǎn)生抗凍保護(hù)作用。②二次稀釋法：常用于袋裝精液。為減少甘油對精子的有害作用，采用本法效果好。將采出的精液先以不含甘油的第一稀釋液稀釋至最后倍數(shù)的一半，經(jīng)1 h緩慢降溫至15℃，維持4 h，再從15℃經(jīng)1 h降溫至5℃，然后用含甘油的第二稀釋液在同溫度下作等量第2次稀釋。在5℃下平衡2 h。③三次稀釋法：首先用脫脂奶將濃份精液在30℃下按1∶0.5倍作第1次稀釋，至1 h降溫至15℃；其次用蔗糖-卵黃液(11%蔗糖液80 mL加入卵黃20 mL)，按原精液量1∶1作第2次稀釋，經(jīng)2～3 h降溫至5℃；進(jìn)一步在5℃下用含甘油的蔗糖-卵黃液(11%蔗糖78 mL加入卵黃20 mL、甘油2 mL)，按原精液1：1作第3次稀釋。稀釋后的精液在38～40℃進(jìn)行鏡檢，要求精子活力不低于原精液。如果精液密度沒有測定，稀釋倍數(shù)一般以2～4倍為宜[1]。

3降溫和平衡

降溫指精液稀釋后在30℃以上，經(jīng)1 h由30℃降至15℃，維持4 h，再經(jīng)1 h降至5℃，或用原精在室溫靜置2 h后，離心增加濃度，經(jīng)2 h降至5℃[2]。平衡指加入含甘油的稀釋液對精液作用的時間，以防低溫打擊。

4精液的分裝和凍結(jié)

凍精采用顆粒、細(xì)管、安瓿瓶和袋裝四種分裝方法。細(xì)管凍精是當(dāng)今流行的凍精分裝方法：應(yīng)用材料為0.25 mL或0.5 mL塑料細(xì)管，在5℃下分裝精液，用聚乙烯粉末封口，充分平衡后凍結(jié)。顆粒法：將平衡的精液滴在一定溫度下凍結(jié)成0.1～0.2 mL的顆粒。安瓿法目前很少應(yīng)用。由于輸精量大，豬的精液也可用塑料袋裝，但效果不太好。

根據(jù)劑量和冷源不同，凍結(jié)方法有干冰埋藏法和液氮熏蒸法。

干冰埋藏法：A.顆粒冷凍法：將干冰置于木盒中，用滴管將5℃經(jīng)平衡的精液(0.1 mL或0.2 mL)滴入孔內(nèi)，用干冰封埋2～4 min，收集凍精放入液氮或干冰內(nèi)貯存。B.細(xì)管、袋裝冷凍法：將分裝的精液平鋪在壓實(shí)的干冰面上，覆蓋干冰，2～4 min后將凍精移入液氮或干冰內(nèi)貯存。

液氮熏蒸法：A.顆粒冷凍法：將裝有液氮的廣口保溫瓶上置一銅紗網(wǎng)，距液氮面1～3 cm，預(yù)冷數(shù)分鐘，使其溫度維持在-80℃～-100℃(豬的滴凍溫度是-75℃～-80℃)，將平衡的精液按規(guī)定量均勻而整齊地滴在上面，停留2～4 min，精液變白時，收集凍精入瓶，移入液氮貯存。B.細(xì)管、袋裝冷凍法：與顆粒冷凍相同，將細(xì)管和袋裝精液放在距液氮面一定距離的銅紗網(wǎng)上，停留5 min，待精液凍結(jié)后收集貯于液氮中。

凍精的保存：凍結(jié)的細(xì)管、顆粒、安瓿瓶或袋裝精液，經(jīng)解凍檢查合格后，即按標(biāo)識(品種、編號、采精日期、型號)分別包裝，轉(zhuǎn)入液氮罐中貯備使用。

4凍精的解凍

解凍溫度、解凍液成分和解凍方法直接影響精子解凍后的活力。解凍方法分為低溫水解凍(0～5℃)法、溫水解凍(30～40℃)法和高溫解凍(50～70℃)法等，其中以30～40℃解凍方法實(shí)用、效果較好。解凍液的種類：除各自的稀釋液和精清外，較好的有葡萄糖3 g、檸檬酸鈉1.5 g，溶解在100 mL蒸餾水中，加安鈉咖注射液2 mL使用效果較好。解凍方法：細(xì)管、安瓿瓶和袋裝精液可直接投入35～40℃溫水中，待精液融化一半時，立即取出備用。顆粒精液可干解凍，即將滅菌容器置于50～60℃水中恒溫后，投入一次輸精劑量的精液顆粒，讓其均勻散開，搖至融化，同時加入20～30℃解凍液1 mL；濕解凍是將1 mL解凍液裝入滅菌解凍容器，置于50～60℃溫水中預(yù)熱，然后投入一次輸精劑量的若干顆粒凍精，均勻散開，搖至融化，取出使用。解凍后精液應(yīng)立即用于輸精，不宜保存。

5參考文獻(xiàn)

[1]孫智.公豬精液的稀釋和保存[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2014(7)：58.

[2]趙書廣.中國養(yǎng)豬大成[M](第2版).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013.

中圖分類號：S828.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1005-2739(2016)03-0029-02

作者簡介：吳玉玉(1988-)，女，河南省延津縣人，大專，助理畜牧師。

收稿日期：2015-12-28