陳運旺，陳石嬌，林翀

（海南省農(nóng)墾總醫(yī)院兒科1、檢驗科2，海南 ?？?570311）

反復(fù)肺部感染兒童的腸道狀況研究

陳運旺1，陳石嬌1，林翀2

（海南省農(nóng)墾總醫(yī)院兒科1、檢驗科2，海南 ?？?570311）

目的 比較反復(fù)肺部感染兒童和健康兒童的腸道狀況。方法選取2013年1月至2015年4月于我院接受治療的300例反復(fù)肺部感染兒童作為觀察組，同期入院檢查的300例正常兒童作為對照組。取兩組兒童1 g糞便進(jìn)行腸道菌群檢驗，比較兩組兒童雙歧桿菌、腸桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌、腸球菌以及酵母菌的數(shù)量對數(shù)值；計算并比較雙歧桿菌與腸桿菌比值(B/E)；檢驗并比較兩組兒童血漿內(nèi)毒素、二胺氧化酶、血漿D-乳酸、黏液蛋白以及免疫球蛋白A(SIgA)的含量；比較兩組兒童腸道病毒陽性情況、腸黏膜通透性發(fā)生情況。結(jié)果觀察組兒童腸道菌群數(shù)量對數(shù)值中，雙歧桿菌(7.10±0.59)、腸桿菌(7.86±0.47)、乳酸桿菌(5.17±1.01)、擬桿菌(4.19±1.01)、腸球菌(6.12±0.87)、酵母菌(4.12±1.08)，對照組兒童雙歧桿菌（9.56±0.82）、腸桿菌(4.17±0.54)、乳酸桿菌(8.01±1.05)、擬桿菌(8.14±0.93)、腸球菌(9.41±0.71)、酵母菌(7.71±0.84)，觀察組B/E值為0.90，對照組B/E值為2.29，兩組數(shù)據(jù)比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組兒童血漿內(nèi)毒素為(0.06±0.02)EU/mL、二胺氧化酶(1.84±0.45)U/mL、血漿D-乳酸(3.70±0.72)μg/mL、黏液蛋白(247.41±80.10)μg/g、SIgA含量(395.85±108.42)μg/g，對照組兒童血漿內(nèi)毒素為(0.003±0.001)EU/mL、二胺氧化酶(0.83±0.21)U/mL、血漿D-乳酸(1.92±0.68)μg/mL、黏液蛋白(310.62±76.54)μg/g、SIgA含量(516.91±110.27)μg/g，兩組數(shù)據(jù)比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組兒童病毒陽性104例(34.7%)、腸黏膜通透性增強(qiáng)187例(62.3%)，對照組病毒陽性7例（2.3%）、腸黏膜通透性增強(qiáng)4例(1.3%)，兩組數(shù)據(jù)比較差異均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論反復(fù)肺部感染兒童腸道菌群更易失調(diào)，腸道免疫屏障和腸黏膜易受到損傷，腸道狀況較差。

反復(fù)肺部感染；兒童；腸道狀況

肺部感染是兒童群體中發(fā)病較多的炎癥疾病，隨著治療水平的提高和用藥質(zhì)量的加強(qiáng)該病死亡率明顯下降，但是部分兒童患者會反復(fù)發(fā)生肺炎，且反復(fù)肺炎的發(fā)病率正在逐步增長，對患兒的身心健康有很大影響[1-2]。關(guān)于患兒肺炎反復(fù)發(fā)作的發(fā)病機(jī)制和預(yù)防手段比較復(fù)雜，有研究指出體內(nèi)益生菌能夠調(diào)節(jié)免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抵抗病毒的能力從而可能縮短反復(fù)肺部感染的概率[3-4]。目前有關(guān)反復(fù)肺炎患兒腸道菌群的調(diào)節(jié)、腸道黏膜的屏障作用以及兩者之間的關(guān)系的報道比較少，現(xiàn)進(jìn)行反復(fù)肺部感染兒童的腸道狀況研究，以探究反復(fù)肺部感染和腸道狀況之間的影響關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年4月于我院接受治療的300例肺部感染兒童作為觀察組，其中男孩127例，女孩173例，所有患兒年齡均低于12歲，平均年齡(8.4±3.3)歲。選取同期入院檢查的300正常兒童作為對照組，其中男孩136例，女孩164例，平均年齡(8.7±2.8)歲。兩組患兒性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有患兒均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像技術(shù)診斷為肺部感染；②1年內(nèi)肺部感染發(fā)作≥2次；③患兒無腸胃疾病，入院時未服用抗感染藥物；④患兒監(jiān)護(hù)人同意患兒參與實驗。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有患兒于入院第1天進(jìn)行統(tǒng)一樣本采集，由患兒監(jiān)護(hù)人協(xié)助用無菌離心管收集患兒清晨空腹糞便標(biāo)本，收集完畢后置于-80℃低溫保存。糞便樣本采集完畢后采集2 mL靜脈血樣本于肝素鈉管中，置于-80℃下低溫保存。

1.2.2 菌群檢測 稱取1 g糞便并加入100 mL磷酸鹽緩沖液充分振蕩搖勻，搖勻后繼續(xù)加入磷酸鹽緩沖液將樣本稀釋。取1 mL稀釋標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上，使用“L”型棒將樣本涂勻，分別做包括雙歧桿菌、腸桿菌、乳酸桿菌在內(nèi)的多種細(xì)菌培養(yǎng)并計算菌量，再取其數(shù)量的對數(shù)值進(jìn)行分析。

1.2.3 血樣檢測 將采集的血樣進(jìn)行離心旋轉(zhuǎn)，取上層血清液進(jìn)行檢驗。對分離出的上層血漿進(jìn)行分光光度法，檢測血漿內(nèi)毒素和二胺氧化酶的含量。血漿經(jīng)高氯酸去除蛋白質(zhì)后，用酶耦聯(lián)紫外分光光度法檢測血漿D-乳酸的含量。

1.3 評價指標(biāo) 對患者雙歧桿菌、腸桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌、腸球菌、酵母菌含量進(jìn)行檢測，其中除腸桿菌外其余均為有益菌[5]；計算雙歧桿菌與腸桿菌比值(B/E)，B/E小于1.01為菌群異常，大于或等于1.01為菌群正常[6]；檢驗血漿內(nèi)毒素、二胺氧化酶、血漿D-乳酸、黏液蛋白以及免疫球蛋白A(SIgA)的含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患兒腸道菌群數(shù)量對數(shù)值比較 觀察組患兒腸桿菌(7.86±0.47)高于對照組(4.17±0.54)，其他包括雙歧桿菌、乳酸桿菌在內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量對數(shù)值均低于對照組，表明觀察組較對照組菌群失調(diào)，且有益菌數(shù)量減少，兩組數(shù)據(jù)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組雙歧桿菌比腸桿菌比值(B/E)0.90，低于正常值1.01，對照組B/E(2.29)高于正常值，兩組數(shù)據(jù)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患兒腸道菌群數(shù)量對數(shù)值比較(±s)

表1 兩組患兒腸道菌群數(shù)量對數(shù)值比較(±s)

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)300 300雙歧桿菌7.10±0.59 9.56±0.82 2.014 0.047腸桿菌7.86±0.47 4.17±0.54 2.081 0.043乳酸桿菌5.17±1.01 8.01±1.05 2.019 0.047擬桿菌4.19±1.01 8.14±0.93 2.112 0.040腸球菌6.12±0.87 9.41±0.71 2.008 0.046酵母菌4.12±1.08 7.71±0.84 2.080 0.043 B/E 0.90 2.29 2.131 0.036

2.2 兩組患兒腸黏膜指標(biāo)比較 觀察組血漿內(nèi)毒素、二胺氧化酶、血漿D-乳酸均高于對照組，表明觀察組患兒腸道腸黏膜較對照組有明顯損傷，而黏液蛋白和SIgA含量均低于對照組同樣證明觀察組患者腸黏膜屏障功能受損，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 兩組患者腸道病毒及腸黏膜通透性比較 觀察組患兒腸道病毒陽性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組，表明反復(fù)肺部感染患兒腸道病毒處于高水平，觀察組腸道黏膜通透性增強(qiáng)比例高達(dá)62.3%，表明反復(fù)肺炎感染兒童腸道屏障功能受損，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表2 兩組患兒腸黏膜指標(biāo)比較(±s)

表2 兩組患兒腸黏膜指標(biāo)比較(±s)

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)300 300血漿內(nèi)毒素(EU/mL) 0.06±0.02 0.003±0.001 2.134 0.036二胺氧化酶(U/mL) 1.84±0.45 0.83±0.21 2.141 0.034血漿D-乳酸(μg/mL) 3.70±0.72 1.92±0.68 2.138 0.035黏液蛋白(μg/g) 247.41±80.10 310.62±76.54 2.371 0.020 SIgA(μg/g) 395.85±108.42 516.91±110.27 2.416 0.018

表3 兩組患者腸道病毒及腸黏膜通透性比較[例（%）]

3 討 論

肺部感染是發(fā)病率較高的炎癥疾病之一，在學(xué)齡前兒童中尤其常見，主要臨床表現(xiàn)為肺炎[7-8]。反復(fù)肺部感染是指1年內(nèi)肺部感染≥2次，約占兒童肺部感染總數(shù)的8%，其發(fā)病機(jī)制受到多種因素共同影響[9]。目前國內(nèi)外有大量研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)肺部感染患兒存在免疫功能紊亂或支氣管哮喘等癥狀，所以學(xué)界推測免疫功能紊亂以及過敏性疾病可能是反復(fù)肺部感染的病發(fā)原因[10-11]。而對于肺部感染與患兒腸道狀況之間關(guān)系的研究比較少見，但肺部感染患兒腸道常出現(xiàn)不同于正常兒童的癥狀，因此現(xiàn)進(jìn)行反復(fù)肺部感染兒童的腸道狀況研究，探究反復(fù)肺部感染和腸道狀況之間的關(guān)系。

觀察組患兒腸桿菌高于對照組，而包括雙歧桿菌、乳酸桿菌在內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量對數(shù)值均低于對照組，表明觀察組較對照組菌群失調(diào)，且有益菌數(shù)量減少。在對反復(fù)肺部感染兒童的腸道菌群進(jìn)行檢測時發(fā)現(xiàn)，反復(fù)肺部感染兒童和正常兒童相比，腸桿菌數(shù)量處于高水平，而雙歧桿菌、乳酸桿菌等其他有益菌數(shù)量則處于較低水平。腸道中正常的菌群會通過營養(yǎng)作用、生物拮抗、免疫作用維持機(jī)體內(nèi)部的生態(tài)平衡，對于兒童的生長發(fā)育有著至關(guān)重要的作用[12-13]。如果菌群中各菌種之間比例發(fā)生較大改變甚至超過正常范圍的時候便會出現(xiàn)菌群失調(diào)。雙歧桿菌或乳酸桿菌能夠影響TLR2受體進(jìn)而影響肥大細(xì)胞功能的發(fā)揮。肥大細(xì)胞在受體的刺激之下會做出應(yīng)激反應(yīng)，從而提示益生菌產(chǎn)生抗過敏反應(yīng)，從而有效抵抗過敏性抗原。因此當(dāng)雙歧桿菌或者乳酸桿菌的含量大大減少時就會導(dǎo)致益生菌抗過敏反應(yīng)不足，從而不能有效抵御外來抗原，這就大大增加了感染的概率。所以當(dāng)腸道菌群失調(diào)時，就有可能引起肺部感染概率增加，導(dǎo)致反復(fù)肺炎的發(fā)作。

當(dāng)腸道黏膜通透性增強(qiáng)時，腸道內(nèi)毒素就會向腸腔外轉(zhuǎn)移，增加血漿中的內(nèi)毒素含量。而二胺氧化酶是位于小腸黏膜絨毛上皮細(xì)胞中的物質(zhì)，一旦腸黏膜細(xì)胞受損，該酶就會釋放進(jìn)入血液，或者隨著壞死脫落的腸黏膜細(xì)胞進(jìn)入腸腔，增加血漿或者腸腔中二胺氧化酶的含量。而血漿D-乳酸能夠直接反應(yīng)黏膜損傷程度，在黏膜發(fā)生缺血時血漿D-乳酸會在早期迅速上升，所以觀察組血漿內(nèi)毒素(0.06±0.02)EU/mL、二胺氧化酶(1.84±0.45)U/mL、血漿D-乳酸(3.70±0.72)μg/mL均高于對照組。

乳酸桿菌數(shù)量的減少會直接影響腸道黏膜的屏障功能。腸道上皮的緊密連接是一種多功能復(fù)合體，能夠在相鄰細(xì)胞之間形成密封，緊密連接密封了相鄰細(xì)胞之間細(xì)胞旁的空間，能夠防止微生物和其他抗原的擴(kuò)散[14-15]。而乳酸桿菌的作用恰恰能夠有效幫助形成緊密連接。乳酸桿菌菌株自身的特性和數(shù)量能夠影響緊密連接蛋白質(zhì)的表達(dá)和分布情況，進(jìn)而能夠提高細(xì)胞之間的通透阻力，這種上皮的通透阻力能夠有效阻擋隔絕體外抗原以及病毒入侵。而當(dāng)乳酸桿菌數(shù)量減少時就會引起腸道上皮通透性增強(qiáng)。所以觀察組患兒觀察組腸道黏膜通透性增強(qiáng)比例高達(dá)62.3%，且病毒陽性率(34.7%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組(2.3%)。

所以反復(fù)肺部感染一定程度上是由腸道菌群的失調(diào)直接引起的，當(dāng)腸道菌群的種類、數(shù)量以及生物特性發(fā)生變化時，腸道免疫系統(tǒng)對已發(fā)生變化的菌群不能耐受，抗過敏作用降低，抵御抗原的能力受到削弱，而且當(dāng)腸道內(nèi)致病菌繁殖過度就會損害腸道黏膜，腸道黏膜通透性增強(qiáng)則加劇了腸腔內(nèi)細(xì)菌、物質(zhì)外流進(jìn)入血液，引發(fā)其他部位炎癥的發(fā)生。

綜上所述，反復(fù)肺部感染兒童腸道菌群更易失調(diào)，腸道免疫屏障和腸黏膜易受到損傷，腸道狀況較差。

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Intestinal condition of children with recurrent pulmonary infection.

CHEN Yun-wang1,CHEN Shi-jiao1,LIN Chong2. Department of Pediatrics1,Department of Clinical Laboratory2,Hainan Provincial Nongken General Hospital,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo compare the intestinal condition of children with recurrent pulmonary infection and healthy children.MethodsA total of 300 cases of children with pulmonary infection,who admitted to our hospital from January 2013 to April 2015,were selected as the observation group.At the same time,300 cases of normal children were selected as the control group.Feces(1 g)of the two groups were collected to examine the intestinal microbiota. The logarithm of the number of Bifidobacterium,Enterobacter,Lactobacillus,Bacteroides,Enterococcus and Yeast in the two groups was compared.the ratio of bifidobacteria to enterobacteria(B/E)was calculated.The levels of plasma endotoxin,diamine oxidase,plasma D-lactate,mucin protein and immunoglobulin A(SIgA)in the two groups were tested and compared;the positive rate of enteroviruses and the permeability of intestinal mucosa in the two groups were compared.ResultsThe logarithm of the number of Bifidobacterium,Enterobacter,Lactobacillus,Bacteroides,Enterococcus and Yeast in the observation group and the control group were respectively(7.10±0.59)and(9.56±0.82),(7.86±0.47) and(4.17±0.54),(5.17±1.01)and(8.01±1.05),(4.19±1.01)and(8.14±0.93),(6.12±0.87)and(9.41±0.71),(4.12±1.08) and(7.71±0.84);the ratios of B/E in the observation group and the control group were respectively 0.90 and 2.29.All of the above differences were statistically significant(P＜0.05).The levels of plasma endotoxin,diamine oxidase,plasma D-lactate,mucin protein and immunoglobulin A(SIgA)in the observation group and the control group were respectively (0.06±0.02)EU/mL and(0.003±0.001)EU/mL,(1.84±0.45)U/mL and(0.83±0.21)U/mL,(3.70±0.72)μg/mL and(1.92± 0.68)μg/mL,(247.41±80.10)μg/g and(310.62±76.54)μg/g,(395.85±108.42)μg/g and(516.91±110.27)μg/g,and all the above differences were statistically significant(P＜0.05).The positive rate of enteroviruses and the permeability of intestinal mucosa in the observation group and the control group were respectively 104 cases(34.7%)and 7 cases(2.3%), 187 cases(62.3%)and 4 cases(1.3%),and the differences were statistically significant(P＜0.01).ConclusionThe intestinal microbiota of children with recurrent pulmonary infection is more likely to be in disorder,which will lead to intestinal immune barrier and intestinal mucosa vulnerable to damage,and deterioration of intestinal conditions.

Recurrent pulmonary infection;Children;Intestinal condition

R725.6

A

1003—6350（2016）24—4045—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.24.028

2016-06-06)

陳運旺。E-mail：275015427@qq.com