黃楚君，蔡金艷，倪俊，楊超，張鐵

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束花石斛化學(xué)成分研究

黃楚君1，蔡金艷1，倪俊1，楊超1，張鐵2

（1.廣東藥科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州510006；2.文山學(xué)院，云南 文山663000）

摘要：目的 對束花石斛三氯甲烷部位進(jìn)行化學(xué)成分研究。方法 采用硅膠柱層析、ODS柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜及重結(jié)晶等方法對束花石斛三氯甲烷部位進(jìn)行分離純化，并通過理化性質(zhì)與核磁、質(zhì)譜等光譜分析方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果 分離鑒定出10個單體化合物，分別為紐替皂苷元-26-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、2，7-二羥基-4-甲氧基-9-芴酮（2）、dengibsinin（3）、chrysotoxone（4）、丁香醛（5）、對羥基苯甲醛（6）、香草酸（7）、三十一烷醇（8）、十六烷酸（9）、大黃酚（10）。結(jié)論化合物1為首次從石斛屬植物中分離得到，也是首次在束花石斛中發(fā)現(xiàn)變形螺甾烷醇類甾體皂苷。

關(guān)鍵詞：束花石斛；化學(xué)成分；變形螺甾烷醇類；芴酮

石斛始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，是我國傳統(tǒng)名貴中藥?！吨袊幍洹肥蛰d的石斛藥材為蘭科植物金釵石斛、鼓槌石斛或流蘇石斛的栽培品及其同屬植物近似種的新鮮或干燥莖［1］。石斛味甘、性微寒，歸胃、腎經(jīng)，有益胃生津、滋陰清熱之功效，用于治療熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥［2］，自古以來就是治療消渴（糖尿?。┑膶Ｋ帲?］。現(xiàn)代研究表明，石斛具有降血糖、抗氧化、抗衰老、改

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-05-23 11：06 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160523.1106.002.html善肝功能、治療白內(nèi)障、增強(qiáng)人體免疫力等多種藥理作用［4］。石斛中主要成分類型有生物堿、茋類、芴酮、香豆素、黃酮類、蒽醌等［5-6］。

束花石斛（Dendrobium chrysanthum Wall.ex Lindl.）是蘭科石斛屬植物［7］，鮮品的莖大多向一側(cè)彎曲，表面綠色，有光澤，質(zhì)重。氣微，味稍苦，嚼之有黏性，分布于廣西、貴州、云南等地。可用于陰傷津虧、口干煩渴、食少干嘔、病后虛熱、目暗不明，具有退熱和免疫調(diào)節(jié)作用。已報(bào)道束花石斛的化學(xué)成分主要包括菲類、聯(lián)芐類及蒽醌等［8］。本課題組前期采用胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型篩選了束花石斛的降血糖活性部位，結(jié)果表明三氯甲烷部位的降血糖效果較好，且不影響細(xì)胞活力［9］。本文采用硅膠柱層析、ODS柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜及重結(jié)晶等方法對束花石斛降血糖活性部位三氯甲烷部位進(jìn)行分離純化，根據(jù)化合物理化性質(zhì)及核磁、質(zhì)譜等光譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定出10個單體化合物結(jié)構(gòu)，其中的紐替皂苷元-26-O-β-D-吡喃葡萄糖苷是首次從束花石斛中發(fā)現(xiàn)的變形螺甾烷醇類甾體皂苷。

1 儀器與材料

AV-500 MHz核磁共振儀（瑞典Bruker公司）；Sephadex LH-20（GE Healthcare公司）；高效GF254硅膠薄層板、柱色譜硅膠（200～300目）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；其他試劑均為分析純。

束花石斛2013年采集于云南省文山市，由文山學(xué)院張鐵教授鑒定為Dendrobium chrysanthum Wall. ex Lindl.的干燥莖，標(biāo)本保存于廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)系研究室。

2 提取與分離

束花石斛干燥莖7.5 kg，經(jīng)剪碎后用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取4次，每次3 h，濾過，合并濾液，回收乙醇得總浸膏550 g，將總浸膏加適量的水制成混懸液，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取，各萃取部位濃縮成浸膏，得石油醚部位90 g，三氯甲烷部位170 g，乙酸乙酯部位75 g，正丁醇部位160 g。將三氯甲烷部位樣品（170 g），經(jīng)硅膠（200～300目）柱色譜分離，石油醚-二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，TLC檢識，合并相同組分，得到各組分再反復(fù)經(jīng)硅膠（200～300目）柱色譜，Sephadex LH-20柱色譜及溶劑（石油醚、乙酸乙酯）重結(jié)晶純化得到化合物1（100 mg）、化合物2 （100 mg）、化合物3（30 mg）、化合物4（25 mg）、化合物5（25 mg）、化合物6（25 mg）、化合物7（30 mg）、化合物8（45 mg）、化合物9（25 mg）、化合物10（200 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（甲醇），mp 253～254℃。由1H-NMR（500 MHz，CD3OD）可知，δ 0.81（3H，s），0.98（3H，s），1.02（3H，s）及1.22（3H，s）為4個角甲基氫信號，5.33（1H，d，J=5.0 Hz）表明該化合物含有1個烯鍵。由13C-NMR（125 MHz，CD3OD）顯示該化合物共有33個碳原子，其中δ 142.3、122.2為烯鍵上2個碳信號，δ 71.6（C-3）、82.1（C-16）、62.7（C-17）、77.6（C-26）、121.7（C-22）、139.4（C-20）、85.2 （C-25）為苷元上連氧碳原子信號，δ 105.6為葡萄糖端基碳信號，δ 75.3（C-2′）、77.7（C-3′）、72.4（C-4′）、78.0（C-5′）、63.2（C-6′）為葡萄糖上的其他碳信號。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對照一致，故確定化合物1為紐替皂苷元-26-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（26-O-β-D-glucopyranosylnuatigenin）。

化合物2：紅色結(jié)晶（三氯甲烷-甲醇），mp 255～257℃。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.09-6.99 （2H，m）、6.88（1H，dd，J=7.3，1.9 Hz）這3個氫可能位于同一個苯環(huán)上；6.70（1H，d，J=2.0 Hz）、6.63 （1H，d，J=2.0 Hz）互為間偶?xì)洌?.00（3H，s）為苯環(huán)上甲氧基氫，且一個苯環(huán)為間位取代，另一個苯環(huán)含有3個氫。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：195.1為羰基碳信號，57.0為甲氧基碳信號，161.6、151.8、153.8 為3個連氧的芳環(huán)碳信號，且其中1個為甲氧基，可見該化合物還有2個羥基，106.3、106.4、122.8、128.3、130.2、125.4、117.3、136.0、137.5均為芳環(huán)上的碳信號。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］對照基本一致，故推斷化合物2為2，7-二羥基-4-甲氧基-9-芴酮（2，7-dihydroxy-4-methoxy-9-fluorenone）。

化合物3：紅黃色針晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 224～226℃，m/z 271.062 2（［M-H］-），分子式為C15H11O5。由1H-NMR（500 MHz，CDCl3）數(shù)據(jù)可知，該化合物連有2個—OCH3，分別為δ 3.97（3H，s，2-OCH3）和4.15（3H，s，4-OCH3），且連有至少2個—OH，分別為δ 6.13（1H，s）和9.15（1H，s），其余氫信號中7.18（1H，dd，J=1.0，7.0 Hz，H-8）、6.99（1H，dd，J=1.0，8.0 Hz，H-6）、7.14（1H，t，J=7.0，8.0 Hz，H-7）表明是苯環(huán)上相鄰的3個氫，7.10（1H，s，H-1）為另一側(cè)苯環(huán)的氫信號。由13C-NMR（125 MHz，CDCl3）可知，δ 57.2、62.5為2個—OCH3碳原子信號，其余碳原子的信號分別為104.3（C-1）、147.8（C-2）、144.2（C-3）、139.6（C-4）、130.2（C-4a）、151.3（C-5）、124.4（C-6）、130.6（C-7）、116.6（C-8）、125.7 （C-5a）、125.8（C-9b）、136.0（C-9a）。根據(jù) HMBC譜可知，C-2與2-OCH3、H-1相關(guān)，C-3與H-1相關(guān)，C-4與4-OCH3相關(guān)，C-4a與H-1相關(guān)，C-5與H-7相關(guān)，C-6與H-6、8相關(guān)，C-9與H-1、8相關(guān)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］對照基本一致，故推測化合物3為dengibsinin。

化合物4：紅黃色針晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 236～237℃。由1H-NMR（500 MHz，CDCl3）數(shù)據(jù)可知，該化合物連有2個—OCH3，分別為δ 3.96（3H，s）和4.14（3H，s），6.89（1H，d，J=9.0 Hz）與6.66 （1H，d，J=9.0 Hz）的氫質(zhì)子呈鄰位偶合，7.07（1H，s）為苯環(huán)上氫的單峰信號，8.41（1H，s）、8.66（1H，s）為羥基活潑氫信號。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］對照基本一致，推斷化合物4為chrysotoxone。

化合物5：無色方晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 110～112℃。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ 9.83（1H，s）為醛基活潑氫的信號，3.99（6H，s）為2個甲氧基的氫信號，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］對照基本一致，故推斷化合物5為丁香醛（syringaldazin）。

化合物6：白色針晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 105 ～106℃。1H-NMR（500 MHz，CDCl3），δ 9.87（1H，s）為醛基的活潑氫信號，7.82（2H，d，J=8.5 Hz），6.99（2H，d，J=8.5 Hz），由偶合常數(shù)可知這2個氫呈鄰位偶合，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］對照基本一致，確定化合物6為對羥基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde）。

化合物7：淡黃色針晶（甲醇），mp 208～209℃。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ 7.57（2H，dt，J=2.0，8.0 Hz），6.85（1H，d，J=8.5 Hz），3.91（3H，s）為甲氧基氫信號，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］對照基本一致，故確定化合物7為香草酸（vanillic acid）。

化合物8：白色粉末（石油醚-乙酸乙酯），mp 85～87℃。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ 3.65（2H，t，J= 6.7 Hz，H-1），1.56（2H，m，H-2），1.49（2H，m，H-3），1.26（54H，m），0.88（3H，t，J=7.0 Hz，H-31），故推斷化合物8為三十一烷醇（hentriacontanol alcohol）。

化合物9：白色粉末（三氯甲烷），mp 61～62℃。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ 2.37（2H，t，J=10.0 Hz），1.65（2H，m），1.28（24H，m），0.90（3H，t，J=10.0，5.0 Hz），以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］對照基本一致，故推斷化合物9為十六烷酸（palmitic acid）。

化合物10：黃色針晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 198～199℃。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ 12.13 （1H，s）和12.02（1H，s）為2個羥基活潑氫的信號，7.83（1H，dd，J=7.5，1.5 Hz）、7.68（1H，t，J=7.5，8.0 Hz）、7.29（1H，d，J=8.0，1.5 Hz）這3個氫質(zhì)子為苯環(huán)上相鄰的3個氫，且δ 7.68的氫信號與δ 7.83和7.29分別呈鄰位偶合，7.66（1H，d，J=1.0 Hz），7.11 （1H，dd，J=1.5，0.5 Hz）這2個氫呈間位偶合，2.48 （3H，s）為與苯環(huán)直接相連的甲基氫信號。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］對照基本一致，故推斷化合物10為大黃酚（chrysophanol）。

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（責(zé)任編輯：陳翔）

中圖分類號：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1006-8783（2016）03-0279-03

DOI：10.16809/j.cnki.1006-8783.2016031804

收稿日期：2016-03-18

基金項(xiàng)目：廣東藥科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃資助項(xiàng)目（201410573022）；廣州市珠江科技新星專項(xiàng)（201506010061）；2015年廣東省優(yōu)秀青年教師培養(yǎng)計(jì)劃（YQ2015097）

作者簡介：黃楚君（1992—），女，2011級藥學(xué)專業(yè)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)班本科學(xué)生；通信作者：蔡金艷（1981—），女，副教授，主要從事天然藥物活性成分和創(chuàng)新藥物研究，Email：caijy928@163.com。

Study on chemical constituents from Dendrobium chrysanthum Wall.ex Lindl.

HUANG Chujun1，CAI Jinyan1，NI Jun1，YANG Chao1，ZHANG Tie2
（1.School of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2.Wenshan University，Wenshan 663000，China）

AbstractObjective To study the chemical constituents from the hypoglycemic chloroform extract of Dendrobium chrysanthum Wall.ex Lindl.Methods The compositions of chloroform fraction were isolated by gel chromatography ODS column chromatography Sephadex LH-20 and recrystallization.The structures were identified according to the data of MS1H-NMR13C-NMR and physicochemical characters.Results Ten compounds were isolated and identified from the chloroform extract of D.chrysanthum.Respectively as 26-O-β-D-glucopyranosylnuatigenin 1 2 7-dihydroxy-4-methoxy-9-fluorenone 2 dengibsinin 3 chrysotoxone 4 syringaldazin 5 p-hydroxybenzaldehyde 6 vanillic acid 7 hentriacontanol alcohol 8 palmitic acid 9 chrysophanol 10 .Conclusion Compound 1 was a pseudo-spirostanol saponin which was obtained for the first time from this genus.

Key wordsDendrobium chrysanthum Wall.ex Lindl. chemical constituents pseudo-spirostanol fluorenone