陳旭玉，鐘錦玲，黃 嫻，甘炳春

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室),海南萬(wàn)寧 571533；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京 100193；3.嶺南師范學(xué)院，廣東湛江 524048；4.海南碧凱醫(yī)藥研究所，海南?？?570216)

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溫郁金根腐病生物藥劑的篩選

陳旭玉1,2，鐘錦玲3，黃 嫻4，甘炳春1*

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室),海南萬(wàn)寧 571533；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京 100193；3.嶺南師范學(xué)院，廣東湛江 524048；4.海南碧凱醫(yī)藥研究所，海南海口 570216)

摘要[目的]篩選溫郁金根腐病有效的生物藥劑。[方法]采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定7種生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病病原菌的室內(nèi)毒力。[結(jié)果] 0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對(duì)根腐病菌抑制作用較好，其EC50值分別為1.14和 3.61 mg/L；其次為3%中生菌素、3%氨基寡糖素和熒光假單胞桿菌，EC50分別為11.64、13.52和16.61 mg/L。[結(jié)論] 0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對(duì)溫郁金根腐病菌具有較好的抑制作用，可進(jìn)一步用于大田試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞溫郁金；根腐病；生物藥劑；篩選

溫郁金(CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)是姜科姜黃屬多年生草本植物, 其根莖可作為莪術(shù)入藥[1]，是保婦康栓的主要原料。溫郁金引入海南種植多年，隨著種植面積擴(kuò)大，病蟲(chóng)害發(fā)生越嚴(yán)重[2]。根腐病是溫郁金主要病害之一，主要發(fā)生在根莖部，發(fā)病初期側(cè)根呈水漬狀，后黑褐腐爛，并向上蔓延導(dǎo)致地上部分發(fā)黃，最后全株枯死[3]。溫郁金根腐病6月開(kāi)始被發(fā)現(xiàn)，7月達(dá)到高峰，連作嚴(yán)重的地塊發(fā)病率達(dá)50%，溫郁金根腐病問(wèn)題日益突出。目前，對(duì)溫郁金根腐病的報(bào)道和防治措施有限，造成產(chǎn)量降低及品質(zhì)下降，因此，對(duì)其的防治任務(wù)十分緊迫。為此，筆者研究了幾種生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病菌的抑制作用，旨在為該病害的大田防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌。 溫郁金根腐病病原菌由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所分離并置于4 ℃冰箱保存。

1.1.2供試生物藥劑。生物藥劑種類、廠家及使用濃度見(jiàn)表1。

表1　供試生物藥劑及使用濃度

1.2方法

1.2.1培養(yǎng)基配制。含藥平板培養(yǎng)基：將表1中不同藥劑分別用無(wú)菌水配制成所需各濃度的50倍，用移液槍取2 mL注入冷卻至約50 ℃的48 mL PDA培養(yǎng)基，輕輕搖勻。每個(gè)濃度3次重復(fù)，另設(shè)清水對(duì)照。

1.2.2室內(nèi)毒力測(cè)定。采用生長(zhǎng)速率法[4]測(cè)定抑制效果。

1.2.3公式計(jì)算。將抑制率換算成機(jī)率值，藥劑濃度換算成濃度對(duì)數(shù)，以設(shè)定的藥劑濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，抑制機(jī)率值為縱坐標(biāo)，采用Excel軟件求出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù)。

2結(jié)果與分析

2.1供試生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病病原菌生長(zhǎng)的影響由表2可知，7種生物藥劑在設(shè)定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對(duì)菌絲的生長(zhǎng)均有不同程度的抑制。隨著濃度增加，菌落直徑減小，藥劑對(duì)病菌的抑制增大，藥劑濃度與抑制率呈正相關(guān)。在7種生物藥劑中，當(dāng)相同的質(zhì)量濃度范圍為6.25~100.00 mg/L時(shí)，3%氨基寡糖素表現(xiàn)出較高的抑菌率,為80.4%；3%中生菌素次之，抑菌率為76.4%。在質(zhì)量濃度為1 000.00 mg/L時(shí)，蠟質(zhì)芽孢桿菌和99%惡霉靈的抑菌率均為100%，病菌生長(zhǎng)完全受到限制。

表27種生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病病原菌生長(zhǎng)的影響

Table 2Effects of seven biological agents on pathogenic bacteria growth in root rot disease ofC.wenyujin

生物藥劑Biologicalagents處理劑量Treatmentdosagemg/L菌落直徑Colonydiametermm抑菌率Bacteriostasisrate%清水對(duì)照Blankcontrol73.803%中生菌素100.0017.4076.43%Zhongshengmycin50.0023.2868.525.0026.0864.712.5034.2353.66.2545.9837.7蠟質(zhì)芽孢桿菌1000.000100Bacilluscereus500.0018.4075.1250.0029.5560.0125.0047.8335.262.5049.2833.23%氨基寡糖素100.0014.5080.43%amino-oligosaccharins50.0022.5569.425.0022.8369.112.5026.5064.16.2556.9022.9哈茨木霉菌WP1000.009.1887.6TrichodermaharzianumWP500.0010.1086.3250.0010.8585.3125.0011.8883.962.5024.5066.8熒光假單胞桿菌1000.0016.0378.3Pseudomonasfluorescens500.0019.6373.4250.0020.7571.9125.0026.0864.762.5029.8859.599%惡霉靈1000.00010099%hymexazol500.0013.8881.2250.0013.9581.1125.0018.2875.262.5018.3375.10.5%施特靈氨基寡糖素AS100.0018.7374.60.5%Shitelingamino-50.0020.2072.6oligosaccharinsAS25.0023.5068.212.5028.7061.16.2534.9852.6

2.2供試生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病菌菌絲的室內(nèi)毒力由表3可知，0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP的EC50值較小，分別為1.14和3.61 mg/L；其次為 3%中生菌素、3%氨基寡糖素和熒光假單胞桿菌，其EC50值分別為11.64、13.52、16.61 mg/L，表現(xiàn)均較敏感。99%惡霉靈和蠟質(zhì)芽孢桿菌對(duì)溫郁金根腐病菌的毒力相對(duì)較弱，其EC50值分別為70.00和145.65 mg/L。

表3 7種生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病菌的室內(nèi)毒力

Table 3Effects of seven biological agents on indoor toxicity of root rot disease ofC.wenyujin

生物藥劑Biologicalagents毒力回歸方程Toxicityregressionequation相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient(r2)EC50mg/L3%中生菌素3%Zhongshengmyciny=0.8160x+4.13030.956811.64蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacilluscereusy=2.5521x-0.52090.8034145.653%氨基寡糖素3%amino-oligos-accharinsy=1.1103x+3.74410.754213.52哈茨木霉菌WPTrichodermaharzianumWPy=0.5133x+4.71390.70213.61熒光假單胞桿菌Pseudomonasfluorescensy=0.4424x+4.46010.974416.6199%惡霉靈99%hymexazoly=2.9397x-0.42410.548470.000.5%施特靈氨基寡糖素AS0.5%shitelingamino-oligosaccharinsASy=4.9998x+4.71960.95551.14

3結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，7種生物藥劑對(duì)溫郁金根腐病菌的毒力測(cè)定有差異。從EC50來(lái)看，各藥劑的毒力大小依次為0.5%施特靈氨基寡糖素AS、哈茨木霉菌WP、3%中生菌素、3%氨基寡糖素、熒光假單胞桿菌、99%惡霉靈、蠟質(zhì)芽孢桿菌， 其中0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對(duì)病菌菌絲的抑制效果最好，其次是3%中生菌素。因此，哈茨木霉菌WP和0.5%施特靈氨基寡糖素AS對(duì)溫郁金根腐病菌具有較好的抑制作用，可進(jìn)一步用于大田試驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 一部[S]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000：230.

[2] 黃嫻,陳旭玉. 溫郁金彎孢霉葉枯病病原菌的藥劑篩選[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(8):2345-2346.

[3] 楊三豹，盧啟強(qiáng).溫郁金優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].溫州農(nóng)業(yè)科技,2004(2):24-25.

[4] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1998:62-344.

Screening for Biological Pesticides against Root Rot Disease onCurcumawenyujin

CHEN Xu-yu1,2, ZHONG Jin-ling3, HUANG Xian4, GAN Bing-chun1*(1. Hainan Branch Institute of Medicinal Plant (Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine), Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Wanning, Hainan 571533; 2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100193; 3. Lingnan Normal University, Zhanjiang, Guangdong 524048; 4. Hainan Bikai Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd, Haikou, Hainan 570216)

Abstract[Objective] To screen out effective biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujin. [Method] We determined the indoor toxicity of seven kinds of biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujinby mycelium growth rate method. [Result] The toxicological tests showed that 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP had strong activity against mycelia growth, and theirEC50values were 1.14 and 3.61 mg/L, respectively. Secondly, 3% Zhongsheng mycin WP, 3% amino-oligosaccharin AS andP.fluorescensWP also had activity against the mycelia growth, and theirEC50values were 11.64, 13.52 and 16.61 mg/L, respectively. [Conclusion] The 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP have good inhibition to the pathogen of root rot, so they can be used in field trials.

Key wordsCurcumawenyujinChen et C. Ling; Root rot; Biological pesticides；Screening

收稿日期2015-12-25

作者簡(jiǎn)介陳旭玉(1981- )，女，海南臨高人，副研究員，碩士，從事藥用植物保護(hù)及微生物資源開(kāi)發(fā)研究。*通訊作者，研究員，從事病蟲(chóng)害防治研究。

基金項(xiàng)目國(guó)家科技重大專項(xiàng) (2012ZX09304006)；海南省重大專項(xiàng) (ZDZX2013008)；國(guó)家基本藥物所需中藥原料資源調(diào)查和監(jiān)測(cè)項(xiàng)目[國(guó)中醫(yī)藥科技中藥便函(2012)157、158號(hào)]。

中圖分類號(hào)S 482.2+92

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)02-192-02