崔陽陽，孫偉偉，趙瑞華*，徐彩，吳天思，2

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院婦科，北京　100053；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京　100029)

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活血消異方對子宮內(nèi)膜異位癥模型小鼠體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的影響

崔陽陽1，孫偉偉1，趙瑞華1*，徐彩1，吳天思1，2

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院婦科，北京100053；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029)

【摘要】目的評估活血消異方對子宮內(nèi)膜異位癥模型小鼠體外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠結(jié)局的影響。方法根據(jù)胚胎供體小鼠(中藥組、模型組和假手術(shù)組)和接受胚胎移植的假孕小鼠(中藥組、模型組和假手術(shù)組)的來源，兩兩組合，將實(shí)驗(yàn)分為9組進(jìn)行IVF-ET，移植7 d后，觀察不同條件下的妊娠率及活胎率。結(jié)果IVF-ET后，9組小鼠的妊娠率比較有顯著性差異(P<0.05)。通過分組比較，中藥-假手術(shù)組、模型-假手術(shù)組及假手術(shù)-假手術(shù)組的IVF-ET妊娠率有顯著性差異(P<0.05)；假手術(shù)-中藥組、假手術(shù)-模型組及假手術(shù)-假手術(shù)組的IVF-ET妊娠率有顯著性差異(P<0.05)。9組活胎率由高到低依次為假手術(shù)-假手術(shù)組、假手術(shù)-中藥組、中藥-中藥組、中藥-假手術(shù)組、中藥-模型組、假手術(shù)-模型組、模型-假手術(shù)、模型-中藥組、模型-模型組，組間比較有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論活血消異方可提高模型小鼠IVF-ET的妊娠率及活胎率。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜異位癥；不孕；體外受精-胚胎移植

(JReprodMed2016，25(2)：166-171)

子宮內(nèi)膜異位癥(EM)簡稱內(nèi)異癥，是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在宮腔以外部位的一種雌激素依賴性疾病。內(nèi)異癥是育齡婦女的常見病、多發(fā)病，以疼痛和不孕為主要特點(diǎn)。有數(shù)據(jù)顯示近年來內(nèi)異癥的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，且發(fā)病年齡趨于年輕化。內(nèi)異癥與女性不孕密切相關(guān)，有研究報(bào)道高達(dá)40%～60%的內(nèi)異癥患者合并不孕癥[1]，而不孕癥患者中約40%～50%的人存在內(nèi)異癥。內(nèi)異癥是引起女性不孕的主要原因之一，內(nèi)異癥患者合并不孕癥的風(fēng)險(xiǎn)為非內(nèi)異癥人群的20倍[2]。2000年Buyalos等[3]首次提出“內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥”(Endometriosis-associated infertility)的概念。

隨著輔助生殖技術(shù)(ART)的發(fā)展及臨床應(yīng)用，ART逐漸成為內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥患者最理想的助孕方式和治療手段。有研究報(bào)道，內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥患者行體外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治療時(shí)胚胎移植率可達(dá)85%，但妊娠率僅為20%左右[4]。因此，如何提高這類患者助孕治療的妊娠率成為生殖領(lǐng)域醫(yī)生關(guān)注的熱點(diǎn)問題。這種高移植率和低妊娠率的現(xiàn)象提示，胚胎著床可能是影響其妊娠結(jié)局的關(guān)鍵性問題。前期研究發(fā)現(xiàn)，活血化瘀治療不僅能改善內(nèi)異癥的臨床癥狀，還對合并不孕的患者有明顯的助孕作用，活血消異方能縮小異位內(nèi)膜體積、改善內(nèi)異癥的組織病理形態(tài)；有效降低異位內(nèi)膜組織中細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)等蛋白的表達(dá)[5]。本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，通過建立內(nèi)異癥小鼠模型，結(jié)合IVF-ET技術(shù)，觀察內(nèi)異癥模型小鼠胚胎發(fā)育的情況及妊娠結(jié)局，探討活血消異方對內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥患者妊娠結(jié)局的影響。

材料和方法

一、實(shí)驗(yàn)材料

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇健康、性成熟的SPF級(jí)昆明雌性小鼠300只，7周齡，體重(25±3)g；昆明雄性小鼠50只，10周齡，體重(33±2)g。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所[SCXK(京)2009-0007]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，光照明暗時(shí)間為12/12 h，室溫22℃。飼養(yǎng)動(dòng)物所需的籠具及飲水瓶均由專業(yè)飼養(yǎng)人員高壓滅菌后提供。昆明小鼠雌鼠用于模型小鼠的供體與受體，昆明雄性小鼠用于精子供體及假孕鼠制作。

2. 主要試劑和藥物：HTF和KSOM 培養(yǎng)液 (ARK-Resource，日本)；人絨毛膜促性腺激素(HCG)和孕馬血清促性腺激素(PMSG)均購自寧波第二激素廠；羧甲基纖維素鈉(Solarbio，北京)；礦物油(Sigma，德國)；嘴吹管及移植針(Sigma，德國)。其他實(shí)驗(yàn)材料、試劑及藥物(包括中藥)全部由廣安門醫(yī)院制劑室提供。其中HTF用于體外受精，KSOM用于培養(yǎng)受精卵直至囊胚期，培養(yǎng)液使用前于5%CO2、恒溫37℃、濕度飽和的培養(yǎng)箱中過夜預(yù)熱平衡。

中藥活血消異方由莪術(shù)、丹參、赤芍、雞內(nèi)金、生薏仁組成，由廣安門醫(yī)院制劑室提供。上述生藥加10倍量水，煎煮3次，每次1 h，合并煎液、過濾，放置24 h，濃縮。藥物濃度為1.8 g生藥/ml，藥液4℃冰箱保存。

二、研究方法

1. 實(shí)驗(yàn)分組：按照2細(xì)胞與假孕鼠(詳見后文描述)不同組別的來源，將實(shí)驗(yàn)小鼠分為9組進(jìn)行IVF-ET，具體分組情況見表1。

表1　實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行IVF-ET的分組

2. 內(nèi)異癥小鼠模型的建立及處理：將實(shí)驗(yàn)雌性昆明小鼠分為中藥組、模型組和假手術(shù)組進(jìn)行內(nèi)異癥小鼠模型的建立。選擇動(dòng)情周期正常的小鼠，通過內(nèi)膜碎片注射法[6-7]建立內(nèi)異癥模型小鼠，假手術(shù)組給予等量生理鹽水注射。模型建立2周后，開始進(jìn)行中藥干預(yù)。依據(jù)換算公式計(jì)算，小鼠等劑量的給藥量約為臨床成人每公斤體重用藥量的10倍。每只小鼠每次灌胃量為0.2 ml/10 g，連續(xù) 3個(gè)周期(5 d為1周期)。模型組、假手術(shù)組依據(jù)體重給予等量0.5%羧甲基纖維素鈉灌胃。

3. 促排卵及卵母細(xì)胞的采集：各組分別取供卵鼠腹腔注射PMSG 10 U/只，48 h后腹腔注射HCG 10 U/只。注射HCG 14 h后進(jìn)行取卵。脫頸處死供卵小鼠后打開小鼠腹腔，剝離組織，尋找子宮、輸卵管、卵巢和脂肪墊，這時(shí)可見子宮系膜，其連接生殖道和體腔壁，并帶有明顯的血管。用鑷子將輸卵管、卵巢和脂肪墊拉出，用小剪刀剪開輸卵管和卵巢，并將靠近輸卵管的子宮部剪下。將輸卵管攜帶子宮的部分置于培養(yǎng)滴中，移至體視顯微鏡(ZOOM2000，Leica，德國)下進(jìn)行操作，用16號(hào)針輕輕劃破輸卵管膨大的壺腹部，可見云霧狀的卵母細(xì)胞及卵丘團(tuán)釋放出來，將卵丘團(tuán)引入HTF培養(yǎng)滴中。將取出的卵母細(xì)胞置于5%CO2、恒溫37℃、濕度飽和的培養(yǎng)箱中待用。

4. 精子的采集：脫頸處死雄性小鼠，開腹進(jìn)入腹腔剪下睪丸及附睪，迅速分離出附睪尾和輸精管，并盡可能去除脂肪和血管。在體視顯微鏡下，使用26號(hào)針于附睪尾遠(yuǎn)端小管處刺破，慢慢擠出精子，挑出精子置于HTF培養(yǎng)滴中，將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中靜置1 h使精子獲能。受精時(shí)，調(diào)整精子濃度約為(1～2)×106個(gè)/ml。

5. IVF：精子獲能后，將精子加入卵母細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中靜置6 h。6 h后使用HTF沖洗受精卵2～3次，沖洗后將受精卵置于新鮮的KSOM培養(yǎng)液中，在倒置顯微鏡下對受精卵進(jìn)行計(jì)數(shù)后，重新置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。受精24 h后，可見到較早卵裂的2細(xì)胞。部分2細(xì)胞培養(yǎng)至囊胚，觀察卵裂及胚胎發(fā)育情況；部分進(jìn)行2細(xì)胞移植的2細(xì)胞供體。

6. 胚胎移植[8]：將性成熟的雌性小鼠與輸精管結(jié)扎術(shù)后的雄性小鼠合籠，次日上午9：00檢查雌鼠陰道涂片，見陰道栓者為假孕鼠，計(jì)為0.5 d。以此假孕鼠作為胚胎移植的受體鼠。挑選0.5 d假孕鼠，以0.9%水合氯醛進(jìn)行腹腔注射麻醉，刮凈假孕鼠脊背下部并進(jìn)行常規(guī)消毒。把小鼠移到體視顯微鏡下，距脊柱左側(cè)約1 cm處橫向切一小口，鈍性分離組織，暴露卵巢及脂肪墊，夾起脂肪墊，拉出左側(cè)卵巢、輸卵管及子宮，將輸卵管和卵巢留置體外。在移卵管吸入2細(xì)胞前，為了使移植時(shí)操作過程易于控制，首先吸入少量礦物油及氣柱，再拾入15枚2細(xì)胞，將2細(xì)胞從小鼠輸卵管傘端吹入后，將小鼠從顯微鏡臺(tái)上移下，將脂肪墊、子宮、輸卵管及卵巢放回體內(nèi)，1～2針縫合體壁。重復(fù)以上步驟轉(zhuǎn)移胚胎至右側(cè)輸卵管?？p合皮膚，放回籠中待蘇醒。每只假孕鼠每側(cè)子宮移植15枚2細(xì)胞。在胚胎移植7 d后，脫頸處死小鼠，觀察胚胎移植后小鼠的妊娠率及活胎率。

活胎及活胎率的判斷標(biāo)準(zhǔn)[9]：活胎數(shù)：妊娠7 d，孕體鮮明，判為存活。活胎率計(jì)算公式：活胎率=存活的胚胎數(shù)/移植胚胎數(shù)。

三、統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)總頻數(shù)n≥40且所有理論頻數(shù)≥5時(shí)，用Pearsonχ2統(tǒng)計(jì)量；在總頻數(shù)n>40但理論頻數(shù)≥1時(shí)，用校正χ2統(tǒng)計(jì)量；在總頻數(shù)n<40或理論頻數(shù)<1時(shí)，用Fisher確切概率法檢驗(yàn)，組間比較采用兩兩四格表的χ2檢驗(yàn)。按α=0.05水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、內(nèi)異癥小鼠模型建立

內(nèi)異癥模型小鼠可見皮下和腹腔均有病灶生成，且異位病灶生長良好。小鼠皮下病灶，肉眼觀多為白色、紅色或淡黃色米粒大小的結(jié)節(jié)或囊狀病灶，活動(dòng)度??；腹腔內(nèi)病灶，肉眼觀多為隆起囊狀，囊內(nèi)充滿淡黃色清亮透明或混濁粘稠積液，表面血管清晰可見，病灶2～5 mm3大小不等。小鼠皮下及腹腔有不同程度的黏連。內(nèi)異癥小鼠模型病灶組織HE染色結(jié)果見圖1：異位病灶中有血管生成，并有大量腺體和間質(zhì)存在。此前預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察，建模共14只小鼠，1只未在腹腔及皮下找到病灶，僅見腹腔及皮下黏連，成功建模13只。同時(shí)在本實(shí)驗(yàn)中觀察，90%以上的模型小鼠有上述異位病灶生成，提示“腹腔+皮下”注射法建立內(nèi)異癥模型小鼠的成功率約達(dá)90%以上。

A：正常小鼠子宮內(nèi)膜，箭頭所指為正常子宮內(nèi)膜腺體及血管；B：內(nèi)異癥模型小鼠子宮異位病灶，箭頭所指為異位病灶生成的腺體和血管圖1　正常小鼠子宮內(nèi)膜與內(nèi)異癥模型小鼠子宮異位癥灶 HE染色，×200

二、活血消異方對內(nèi)異癥模型小鼠IVF-ET妊娠率的影響

通過3組不同來源的胚胎和3組不同來源的假孕鼠進(jìn)行IVF-ET后，觀察其妊娠情況(表2)。通過Fisher精確概率法檢驗(yàn)，9組小鼠IVF-ET后的妊娠率比較具有顯著性差異(P=0.000)。

表2　各組小鼠IVF-ET后妊娠情況(n，%)

注：中藥-模型組與模型-模型組中分別有1只小鼠因腹腔內(nèi)嚴(yán)重黏連無法進(jìn)行移植

根據(jù)胚胎和假孕鼠的來源，進(jìn)行分組比較。假孕鼠來源于假手術(shù)組的3組進(jìn)行比較，通過Fisher精確概率法檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型-假手術(shù)組的妊娠率顯著低于中藥-假手術(shù)組和假手術(shù)-假手術(shù)組(P<0.05)；中藥-假手術(shù)組和假手術(shù)-假手術(shù)組的妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)(表3)。

表3　假孕鼠來自假手術(shù)組的各組IVF-ET

注：與中藥-假手術(shù)組和假手術(shù)-假手術(shù)組比較，*P<0.05

胚胎來源于假手術(shù)組的3組進(jìn)行比較，通過Fisher精確概率法檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)-模型組的妊娠率顯著低于假手術(shù)-中藥組和假手術(shù)-假手術(shù)組(P<0.05)；假手術(shù)-中藥組和假手術(shù)-假手術(shù)組的妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

表4　胚胎來源于假手術(shù)組的各組IVF-ET

注：與假手術(shù)-中藥組和假手術(shù)-假手術(shù)組比較，*P<0.05

三、活血消異方對內(nèi)異癥模型小鼠IVF-ET活胎率的影響

通過IVF-ET技術(shù)觀察并比較各實(shí)驗(yàn)組的活胎率，因百分率資料不服從正態(tài)分布，采用Kruskal-Wallis H非參數(shù)檢驗(yàn)，9組小鼠的活胎率比較有顯著性差異(Chi-Squareχ2=40.226，P=0.000)。根據(jù)平均秩次，9組小鼠的活胎率由高到低依次為假手術(shù)-假手術(shù)組、假手術(shù)-中藥組、中藥-中藥組、中藥-假手術(shù)組、中藥-模型組、假手術(shù)-模型組、模型-假手術(shù)、模型-中藥組、模型-模型組(表5)。

討論

古代中醫(yī)文獻(xiàn)中未對內(nèi)異癥的病名進(jìn)行記載，但根據(jù)內(nèi)異癥的病因、病理機(jī)制及臨床表現(xiàn)可歸于“痛經(jīng)”、“癥瘕”、“不孕”和“月經(jīng)不調(diào)”等疾病的范疇。中醫(yī)認(rèn)為血瘀為內(nèi)異癥的病理機(jī)制，瘀血是內(nèi)異癥的主要致病因素和病理產(chǎn)物。瘀血阻滯，不通則痛；血瘀日久，可成癥積。我院李光榮教授以“離經(jīng)之血”立論，組成系列方藥，其中以核心藥物(丹參、赤芍、莪術(shù)等)組成活血消異方，臨床療效顯著[5，10]。方中丹參，或癥瘕積聚而脹悶痞塞[11]，有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛之功效。赤芍出自《神農(nóng)本草經(jīng)》，有活血祛瘀、散瘀止痛之功。素杲云“赤芍藥破瘀血療腹痛”[12]。莪術(shù)，用于血瘀或氣滯血瘀之經(jīng)閉腹痛、瘀阻、癥瘕積聚[13]，始載于《藥性論》，能入氣分血而行氣血之滯，有破血祛瘀、行氣消積止痛之功?；钛惙揭缘?、赤芍、莪術(shù)相伍，共奏活血化瘀、散結(jié)止痛之效。

目前，國內(nèi)外內(nèi)異癥模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要有兔、鼠及靈長類動(dòng)物等，主要的建模方法包括傳統(tǒng)的自發(fā)性動(dòng)物模型和誘發(fā)性動(dòng)物模型(包括自體移植和異體移植)以及一些新型的特殊內(nèi)異癥動(dòng)物模型[14]。本研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇現(xiàn)階段國內(nèi)內(nèi)異癥相關(guān)研究最為常用的小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，其動(dòng)情周期短而規(guī)律，性成熟早，繁殖力強(qiáng)。由于實(shí)驗(yàn)程序相對復(fù)雜且時(shí)間較長，本研究選擇子宮內(nèi)膜“皮下+腹腔”注射法建立模型，保留小鼠完整的子宮，便于觀察病灶，并能減少手術(shù)操作的刺激和對盆腔微環(huán)境的影響，同時(shí)也能減少動(dòng)物感染的幾率和對其生命力的損傷，保證實(shí)驗(yàn)的可實(shí)施性，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供保障。利用動(dòng)物模型可以探討內(nèi)異癥影響妊娠功能的可能機(jī)理、藥物對妊娠功能相關(guān)的分子生物學(xué)影響以及改善妊娠功能的治療等。

有文獻(xiàn)指出，小鼠行胚胎異體移植并不影響妊娠結(jié)局[15]，本研究亦是基于胚胎異體移植不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果來進(jìn)行交叉分組設(shè)計(jì)。本研究通過建立內(nèi)異癥小鼠模型，結(jié)合IVF-ET技術(shù)，觀察活血消異方對內(nèi)異癥模型小鼠行IVF-ET后妊娠率和活胎率的影響，通過3組不同來源的胚胎和3組不同來源的假孕鼠進(jìn)行IVF和ET，觀察9組小鼠胚胎移植后7 d的妊娠率及活胎率。結(jié)果顯示，內(nèi)異癥可能影響小鼠的胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜環(huán)境，進(jìn)而降低IVF-ET后的妊娠率及活胎率，活血消異方可以提高內(nèi)異癥模型小鼠IVF-ET后的妊娠率及活胎率，提示其可能有助于改善胚胎質(zhì)量及子宮內(nèi)膜環(huán)境，提高子宮內(nèi)膜容受性，促進(jìn)胚胎著床和胚胎生長發(fā)育。

越來越多的證據(jù)表明，內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥與胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜容受性有密切關(guān)系。中醫(yī)治療在改善子宮內(nèi)膜容受性和胚胎質(zhì)量上取得了一定肯定的效果。有研究報(bào)道，補(bǔ)腎活血治療可以提高內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜容受性，誘發(fā)成熟卵泡排卵，促進(jìn)黃體發(fā)育，提高黃體功能[16-17]。王艷妮等[18]研究發(fā)現(xiàn)對內(nèi)異癥患者IVF-ET周期的各階段采用補(bǔ)腎活血法治療，可獲得良好的妊娠率。隨著ART的應(yīng)用普及，為一些內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥患者帶來福音，有研究者認(rèn)為，輕度內(nèi)異癥患者通過適當(dāng)?shù)钠诖焉锖笕晕慈焉镎?，就可以積極采取ART助孕治療[19]，但臨床實(shí)際中ART并不能解決所有問題，它可能繞過某些與內(nèi)異癥相關(guān)的基礎(chǔ)疾病，但疾病本身可能影響助孕治療的結(jié)局。因此，如何安全、有效地提高內(nèi)異癥患者助孕治療的妊娠率，是中西醫(yī)領(lǐng)域共同面臨的難題。

綜上所述，本研究結(jié)果提示活血消異方可以有效改善內(nèi)異癥相關(guān)不孕癥患者的妊娠結(jié)局，為中醫(yī)藥治療提高內(nèi)異癥患者的臨床妊娠率提供科學(xué)依據(jù)，并為進(jìn)一步探討中醫(yī)藥在內(nèi)異癥輔助生殖領(lǐng)域中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，但后續(xù)仍需進(jìn)一步的深入研究其可能的作用機(jī)理及分子生物學(xué)調(diào)控機(jī)制。

【參考文獻(xiàn)】

[1]張惜陰. 實(shí)用婦產(chǎn)科學(xué)[M]. 第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版，2003：745-749.

[2]Birmingham A. Endometriosis and infertility [J]. Fertil Steril，2004，81：1441-1446.

[3]Buyalos RP，Agarwal SK. Endometriosis-associated infertility [J]. Curr Opin Obstet Gynecol，2000，12：377-381.

[4]Barnhart K，Dunsmoor-Su R，Coutifaris C. Effect of endometriosis on in vitro fertilization [J]. Fertil Steril，2002，77：1148-1155.

[5]趙瑞華，楊艷環(huán)，李敏，等. 活血消異方對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠 ICAM-1、MMP-9 及 VEGF 的影響 [J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35：826-829.

[6]馬麗，謝淑武，朱焰，等. 注射法小鼠皮下子宮內(nèi)膜異位癥模型及組織學(xué)觀察 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2008，16：192-195.

[7]郭方，徐叢劍. 腹腔注射甲氨蝶呤對小鼠異位內(nèi)膜生長的影響 [J]. 中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2007，23：692-694.

[8]Achache H，Revel A. Endometrial receptivity markers，the journey to successful embryo implantation [J]. Hum Reprod Update，2006，12：731-746.

[9]劉光芒，吳德，張明，等. 鐵與維生素A水平對小鼠子宮分泌蛋白及胚胎存活率影響 [J]. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2007，19：392-400.

[10]楊艷環(huán)，趙瑞華，徐彩. 活血消異方對子宮內(nèi)膜異位癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)大鼠模型的影響 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2012，27：1911-1913.

[11]吳昌國. 中醫(yī)歷代藥論選[M]. 北京：中國中醫(yī)藥出版社，2010：102-103.

[12]苗明三，王智民. 對藥的化學(xué)藥理與臨床[M]. 第1版. 北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2002：912.

[13]翁維健，龐俊忠，沈連生. 臨床用藥鑒別[M]. 北京：北京中醫(yī)學(xué)院，1981：150-151.

[14]崔陽陽，孫偉偉，趙瑞華. 子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型研究進(jìn)展 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2013，21：86-89.

[15]王敏康，劉冀瓏，李勁松，等.小鼠的胚胎移植方法 [J]. 動(dòng)物學(xué)雜志，2000，35：31-34.

[16]楊桂云，劉紅林. 補(bǔ)腎活血方對子宮內(nèi)膜異位癥不孕腹腔液微環(huán)境改善作用的實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21：57-59.

[17]具春花，陳玲. 補(bǔ)腎活血方對內(nèi)異癥伴不孕患者子宮內(nèi)膜的影響 [J]. 遼寧中醫(yī)雜志，2008，35：722-723.

[18]王艷妮，談?dòng)? 補(bǔ)腎活血法在子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者行試管嬰兒術(shù)中的應(yīng)用體會(huì) [J]. 實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2010，26：264.

[19]李脈，周黎明，孫亦婷，等. 子宮內(nèi)膜異位癥患者行體外受精-胚胎移植結(jié)局分析 [J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2015，24：386-391.

[編輯：陸彩玲]

本刊有關(guān)錄用論文版權(quán)轉(zhuǎn)讓的聲明

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事實(shí)證明，順應(yīng)網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下期刊出版的新要求，在著作權(quán)法的框架內(nèi)，期刊出版單位與作者簽署論文版權(quán)轉(zhuǎn)讓合同，是新形勢下推進(jìn)期刊網(wǎng)絡(luò)出版?zhèn)鞑?，正確處理作者、期刊編輯部和網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫出版單位之間關(guān)系的行之有效的方式。因此，凡本刊所錄用論文，則需將該論文的復(fù)制權(quán)、發(fā)行權(quán)、信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)、翻譯權(quán)、匯編權(quán)等權(quán)利在全世界范圍內(nèi)轉(zhuǎn)讓給本刊。本刊已加入萬方數(shù)據(jù)數(shù)字化期刊群，被中國核心期刊(遴選)數(shù)據(jù)庫收錄。凡被本刊錄用的稿件將同時(shí)通過因特網(wǎng)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)出版或提供信息服務(wù)，稿件一經(jīng)刊用，將一次性支付作者著作權(quán)使用報(bào)酬(即包括印刷版、光盤版和網(wǎng)絡(luò)版各種使用方式的報(bào)酬)。凡有不同意者，請另投它刊。特此聲明。

本刊編輯部

Effects of Huoxue Xiaoyi Fang on embryo development after IVF-ET in endometriosis model mice

CUIYang-yang1，SUNWei-wei1，ZHAORui-hua1*，XUCai1，WUTian-si1,2

1.DepartmentofGynecology，Guang’anmenHospital，ChinaAcademyofChieseMedicalSciences，Beijing100053

2.BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029

【Abstract】

Objective： To evaluate the effect of Huoxue Xiaoyi Fang on pregnancy outcome after IVF-ET in endometriosis (EM) model mice.

Methods： According to the sources [traditional Chinese medicine (TCM) group，EM model group，Sham-operation group] of mice of embryos donor and pseudopregnant mice accepted embryos transfer，the mice were divided into nine groups for IVF-ET after One-to-one cross combination. The pregnancy rate and the live embryo rate after 7 days of embryo transplantation (ET) were observed and compared among the nine groups.

Results： The pregnancy rate of nine groups were significantly different (P<0.05). The pregnancy rate after IVF-ET was significantly different among TCM-Sham operation group，EM model-Sham operation group and Sham operation-Sham operation group (P<0.05). The pregnancy rate after IVF-ET were significantly different among Sham operation-TCM group，Sham operation-EM model group and Sham operation-Sham operation group (P<0.05). The live embryo rate of nine groups were sequenced from high to low as follows：Sham operation-Sham operation group，Sham operation-TCM group，TCM-TCM group，TCM-Sham operation group，TCM-EM model group，Sham operation-EM model group，EM model-Sham operation group，EM model-TCM group and EM model-EM model group，and the differences were significant among the groups(P<0.05).

Conclusions： Huoxue Xiaoyi Fang can improve the pregnancy rate and the live embryo rate after IVF-ET.

Key words：Endometriosis；Infertility；IVF-ET

【作者簡介】崔陽陽，女，山西太原人，碩士，中醫(yī)婦科學(xué)專業(yè).(*通訊作者，Email：rhzh801@126.com)

【基金項(xiàng)目】國家自然科學(xué)基金(No. 81173297)

【收稿日期】2015-05-25；【修回日期】2015-07-12

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.2.012