唐德智

【摘要】目的：建立同時測定正胃片中沒食子酸、橙皮苷含量的HPLC方法。方法：采用Waters SunFireTM C18（4.6×150mm， 5μm ）色譜柱；流動相為甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）系統(tǒng)梯度洗脫；流速為1.0ml/min；檢測波長：272 nm（0～6 min，沒食子酸），283 nm（6～30 min，橙皮苷）。結(jié)果： 沒食子酸進樣量在0.128～2.302 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999，n=6），平均回收率為99.64%，RSD為1.2%（n=9） ；橙皮苷進樣量在0.099～1.777μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9997，n=6），平均回收率為99.84%，RSD為0.8%（n=9）。結(jié)論：該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】正胃片；沒食子酸；橙皮苷；HPLC

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）03-0012-02

正胃片是由猴耳環(huán)、陳皮、木香、七葉蓮、甘草、次硝酸鉍、氧化鎂、氫氧化鋁等制成的中西藥復(fù)方制劑，具有清熱涼血、健脾和胃、制酸止痛的功效，臨床用于胃熱燒灼、脘腹刺痛、嘔惡吞酸、食少倦怠、慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等疾病，并收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十七冊[1]。方中猴耳環(huán)、陳皮為君藥，猴耳環(huán)的主要有效成分為沒食子酸[2]，陳皮的主要有效成分為橙皮苷[3]。正胃片中沒食子酸、橙皮苷的含量測定方法已有文獻報道[4-5]，但同時測定這2種成分尚無報道。研究建立高效液相色譜法同時測定正胃片中沒食子酸、橙皮苷含量。該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters 2695 高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測器（美國沃特斯公司）；UV-2501紫外可見分光光度計（日本島津公司）；S180H型超聲波清洗器（德國Elma公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 材料 沒食子酸對照品（批號：110831-201204）、橙皮苷對照品（批號：110721-201316）均購自中國食品藥品檢定研究院；正胃片（批號：20120706、20120815、20130101、20130326、20130514，廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠）。甲醇、磷酸為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱： Waters SunFireTM C18 （4.6mm×150mm，5μm ）；流動相：A為甲醇，B為0.2%的磷酸水溶液；0～6 min，19%A，6～10 min，19%→40%A；檢測波長：272 nm（0～6 min，沒食子酸），283 nm（6～30 min，橙皮苷）；流速為 1.0 ml/min；柱溫為30℃；進樣量：10μl。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品和橙皮苷對照品適量，置于50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成1ml含沒食子酸255.8μg、橙皮苷197.4μg 的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細，取約0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加入50%甲醇溶液約20 ml，超聲處理（功率300W，頻率33kHz）30 min，放置至室溫，加50%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按正胃片處方及制備工藝，分別制備缺猴耳環(huán)和陳皮的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 分別精密吸取供試品溶液、混合對照品溶液的稀釋液和陰性樣品溶液各10μl，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄液相色譜圖。由圖1可見，在與對照品色譜峰相應(yīng)的位置上供試品具有相同保留時間的色譜峰，陰性樣品對測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，按照上述色譜條件，每個質(zhì)量濃度分別測定3次，每次進樣10μl，記錄峰面積。以峰面積的平均值Y 為縱坐標(biāo)，進樣量x（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程，結(jié)果沒食子酸的回歸方程為：Y=3.415×10.6x +5.14.6×10.4，r=0.999 9，橙皮苷的回歸方程為：Y=2.046×10.6x+3.367×10.4，r=0.9997。表明沒食子酸進樣量在0.128～2.302 μg范圍內(nèi)，橙皮苷進樣量在0.099～1.777 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 儀器精密度試驗 精密吸取“2.4”項下中間質(zhì)量濃度的混合對照品溶液10μl，在上述色譜條件下， 重復(fù)進樣6次，記錄色譜峰峰面積，結(jié)果沒食子酸、橙皮苷峰面積的RSD分別為1.2%、0.9%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號：20130101），按上述色譜條件，分別于配制后0、2、4、8、12、24h進樣，記錄色譜峰面積，結(jié)果沒食子酸、橙皮苷峰面積的RSD分別為1.6%、1.3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 稱取同一批樣品（批號：20130101）0.5 g，平行稱取6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，測得沒食子酸平均含量為6.44 mg/g，RSD為1.5%；橙皮苷平均含量為4.83 mg/g，RSD為1.3%。

2.8 回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批號樣品（批號：20130101 ）約0.25g，平行稱取9份，置25 ml量瓶中，分別加入沒食子酸和橙皮苷混合對照品溶液（含沒食子酸0.3268mg/ml、含橙皮苷0.2434mg/ml）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果沒食子酸平均回收率為99.64%，RSD為1.2%；橙皮苷平均回收率為99.84%，RSD為0.8%。

2.9 樣品測定 取5批正胃片，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件測定，將測得峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中沒食子酸、橙皮苷含量，結(jié)果見表1。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取條件的選擇 實驗對不同濃度的甲醇和乙醇進行了提取效率的比較實驗，結(jié)果表明甲醇提取效果優(yōu)于乙醇。采用不同濃度的甲醇提取，考察結(jié)果表明：采用50%甲醇提取，提取效率最高。另對比了不同提取方法（超聲、回流、索氏提?。φ钙奶崛⌒ЧY(jié)果表明：超聲提取的效率高，方法簡便。

3.2 提取時間的選擇 以沒食子酸、橙皮苷為指標(biāo)，對提取時間進行了考察，結(jié)果表明：提取30min后有效成分峰面積達到最大，確定提取30min作為提取時間。

3.3 檢測波長的確定 分別取沒食子酸、橙皮苷對照品溶液在200～400nm波長范圍進行紫外光譜掃描，結(jié)果顯示沒食子酸和橙皮苷分別在272nm和283nm處有最大吸收。為提高分析靈敏度和準(zhǔn)確度，宜盡量選擇在最大吸收波長下測定沒食子酸和橙皮苷的含量。實驗采用程序波長切換技術(shù)，根據(jù)各組分的出峰順序，在不同時間段分別用其相應(yīng)的最大吸收波長同時測定含量。

3.4 流動相的選擇 參考藥典及相關(guān)文獻中沒食子酸、橙皮苷的含量測定方法[6-7]，采用等度洗脫法進行實驗，但分離結(jié)果均不理想，故考慮梯度洗脫。實驗分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液等不同比例的流動相，最終采用甲醇-0.2%水磷酸溶液作為流動相進行梯度洗脫，可將2個組分完全分離，且基線穩(wěn)定，峰形好，出峰快。

參考文獻

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑.第17冊.1998：58-59.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[S].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：1183-1184.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4]何連枝， 丘振文， 羅丹冬. HPLC法測定正胃片中橙皮苷的含量[J].中華實用中西醫(yī)雜質(zhì)，2007，20（17） ：1549-1550.

[5]陳業(yè)光，李德潮.HPLC法測定正胃片中沒食子酸的含量[J].中成藥，2008，30（9）：13-14.

[6]徐海燕，金藝，張紅霞，等.HPLC同時測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷與新橙皮苷的含量[J].中成藥，2010，32（8）：1355-1356.

[7]陳艷偉，張歡，楊世磊，等.HPLC同時測定猴耳環(huán)消炎膠囊中沒食子酸與槲皮素的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（9）：126-127.

（收稿日期：2015.12.17）