蘇碧麗　胡娟　龐文生

【摘要】目的：考察不同產(chǎn)地粉葛中葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，為制定粉葛藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。方法：采用RP-HPLC法，色譜柱Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脫；流速1.0 ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長250 nm。結(jié)果：葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的線性范圍分別為12.4～620ng、1.52～76ng、2.4～120ng、3.28～164 ng，四種成分的平均加樣回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結(jié)論：該方法簡便快速，重復(fù)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于不同產(chǎn)地粉葛藥材中四種異黃酮類成分的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】HPLC；葛根素；3'-甲氧基葛根素；大豆苷；大豆苷元

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）03-0010-02

粉葛為豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根，載于《中國藥典》[1]，具有解肌退熱、生津止渴的功效、臨床主要用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、口渴等癥狀。粉葛的主要化學(xué)活性成分有葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元等異黃酮類化合物[2]，具有降血壓、降血糖、保護(hù)肝臟、治療頸椎病等作用[3-4]；同時(shí)粉葛富含淀粉，因此具有較高的醫(yī)用和食用價(jià)值。近年來，文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)粉葛異黃酮多指標(biāo)成分的含量測(cè)定[5-8]，但是隨著粉葛栽培面積的不斷擴(kuò)大，出現(xiàn)了許多栽培品種，因此不同產(chǎn)地藥材之間的有效成分含量存在著一定的差異，進(jìn)而影響了藥材的質(zhì)量。研究采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)廣東、廣西、安徽粉葛中四種異黃酮成分的含量，為粉葛藥材質(zhì)量控制提供方法和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜系統(tǒng)（2998型二極管陣列檢測(cè)器）；KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超市儀器有限公司）；Thermo超純水設(shè)備；電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；FW135中草藥粉碎機(jī)（天津市泰勒特儀器有限公司）。

[JP+2]1.2 藥品與試劑 3'-甲氧基葛根素對(duì)照品（批號(hào)：141217，成都普菲德生物技術(shù)有限公司）；葛根素對(duì)照品（批號(hào)：10752-201313）、大豆苷對(duì)照品（批號(hào)：111738-201302）、大豆苷元（批號(hào)：111502-200402）均購自中國食品藥品檢定研究院；粉葛（批號(hào)：150420，安徽本草國藥飲片有限公司；批號(hào)：150302，安徽省金芙蓉中藥飲片有限公司；批號(hào)：1504005，江西樟樹天齊堂中藥飲片有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取各對(duì)照品適量，分別用甲醇制成每毫升中含有葛根素0.062 mg、3'-甲氧基葛根素0.0076 mg、大豆苷0.012 mg、大豆苷元0.0164 mg即可。

2.2 供試品溶液的制備 取不同產(chǎn)地的粉葛粉末（過三號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.3 色譜條件 色譜柱Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測(cè)波長：250 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；梯度洗脫條件見表1。色譜見圖1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍考察 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2、0.5、1、2、5、10 ml，置于10 ml容量瓶內(nèi)，以甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過。分別按“2.3”項(xiàng)下條件測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X，ng）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的回歸方程，見表2。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)得葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積RSD分別為0.52%、1.36%、1.00%、0.35%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一來源的粉葛6份，分別按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分別為0.29%、0.04%、0.04%、0.03%，RSD分別為1.61%、1.98%、1.50%、1.62%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一來源的供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件，分別用于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣10 μL分別測(cè)定葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積，RSD分別為1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一粉葛根粉末約0.5 g，置于錐形瓶中，精密加入適當(dāng)量的對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，平行制備6份。按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算平均回收率和RSD，葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。[JP]

2.5 樣品含量測(cè)定 取不同產(chǎn)地的粉葛，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄各個(gè)成分的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量，結(jié)果見表3。

3 討論

不同產(chǎn)地粉葛藥材中四種異黃酮類成分含量比較，葛根素：廣東>安徽>廣西；3-甲氧基葛根素：安徽>廣東>廣西；大豆苷：廣東>安徽或廣西；大豆苷元：廣東>廣西>安徽；不同產(chǎn)地之間含量相差較大的是3'-甲氧基葛根素，進(jìn)一步的說明不同產(chǎn)地的環(huán)境、氣候、土壤、降水等條件對(duì)粉葛根藥材有效成分還是存在一定的影響。

本實(shí)驗(yàn)通過高效液相色譜法建立對(duì)不同產(chǎn)地的粉葛多指標(biāo)成分的含量測(cè)定，能夠更全面的控制粉葛飲片的質(zhì)量，為粉葛藥材的選擇提供了一定的依據(jù)。

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（收稿日期：2015.12.19）