国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和CCL5在胃癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究①

2016-02-24 00:51丁海霞趙連梅單保恩
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2016年1期
關(guān)鍵詞:胃癌

丁海霞 趙連梅 單保恩

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤研究中心,石家莊050000)

?

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和CCL5在胃癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究①

丁海霞趙連梅單保恩②

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤研究中心,石家莊050000)

指導(dǎo)教師:趙連梅(1981年-),女,醫(yī)學(xué)博士,助理研究員,主要從事免疫基礎(chǔ)研究。

[摘要]目的:研究胃癌中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)與CCL5的表達(dá)及其相關(guān)性。方法:選擇臨床病理資料齊全的胃癌蠟塊標(biāo)本48例,癌旁組織作為對(duì)照,采用SP免疫組化法檢測(cè)CD68和CCL5在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá),并采用Spearman相關(guān)性統(tǒng)計(jì)方法對(duì)其相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果:CD68和CCL5在胃癌組織中均呈陽(yáng)性表達(dá),且明顯高于癌旁組織(P<0.01);CD68和CCL5與胃癌組織浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期情況及腫瘤分化程度均具有相關(guān)性(P<0.001),且胃癌中CD68和CCL5的表達(dá)程度呈正相關(guān)(P<0.01,r=0.759)。 結(jié)論:CD68和CCL5 對(duì)胃癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移起重要的促進(jìn)作用,提示TAM分泌的CCL5可能促進(jìn)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移。

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一,生長(zhǎng)迅速,晚期預(yù)后差,研究顯示腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞參與癌癥發(fā)病的各個(gè)環(huán)節(jié)[1],CD68陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞可作為胃癌根治性切除術(shù)后預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。胃癌微環(huán)境能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分化,而活化的巨噬細(xì)胞,尤其是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌多種活性物質(zhì)在局部促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移,在其分泌的活性物質(zhì)中,細(xì)胞因子和趨化因子扮演了重要的角色。Wu等[3]報(bào)道了腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)VEGF 和VEGF-C的表達(dá)促進(jìn)胃癌的血管新生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可能通過(guò)分泌CCL2和CCL5促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移[4],而后逐漸在血液系統(tǒng)惡性腫瘤、淋巴瘤、大量實(shí)體瘤中發(fā)現(xiàn)了趨化因子及其配體[5-9],CCL5作為趨化性細(xì)胞因子CC 亞族的成員之一,能夠趨化腫瘤細(xì)胞及其他炎性細(xì)胞,并可調(diào)節(jié)金屬蛋白酶及黏附分子表達(dá)增加細(xì)胞侵襲性[8]。國(guó)外有學(xué)者對(duì)胃癌患者血清中CCL5的表達(dá)進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)血清中CCL5的表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10],而國(guó)內(nèi)尚無(wú)此類報(bào)道。CD68是胃癌腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物,本研究應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)CCL5在胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的表達(dá),通過(guò)對(duì)CCL5與CD68的關(guān)系進(jìn)行探討,證明CCL5可能是TAM促進(jìn)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要趨化因子之一,從而為胃癌的治療提供新的靶點(diǎn)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1一般資料胃癌組織取材于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2013年48例胃癌患者,其中男28例,女20例,年齡50~75歲。術(shù)前均未行放化療及其他抗腫瘤治療,術(shù)后依照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)制定的胃癌TNM分期第七版標(biāo)準(zhǔn)記錄病理類型、臨床分期及分化類型。

1.1.2主要試劑CD68兔抗人單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology corporation,SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自中杉金橋科技公司,CCL5兔抗人單克隆抗體購(gòu)自上海拜力生物科技有限公司,SP免疫組化試劑盒,DAB顯色試劑盒均購(gòu)自中杉金橋科技公司。

1.2方法常規(guī)HE染色,確定標(biāo)本的組織分化程度,采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接(SP)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD68和CCL5在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)。石蠟切片,常規(guī)脫蠟、水化組織切片,采用枸櫞酸鹽緩沖液煮沸熱修復(fù)30 min后冷卻至室溫,3%H2O237℃孵育10 min,PBS沖洗2×3 min;1∶100滴加一抗4℃冰箱過(guò)夜,PBS沖洗2×3 min;滴加二抗,37℃30 min,PBS沖洗2×3 min;DAB顯色,充分沖洗后,常規(guī)脫水,透明,干燥,封片。

結(jié)果判定:依照細(xì)胞陽(yáng)性著色程度(抗原含量),可分為:弱陽(yáng)性(+)┅1分;中等陽(yáng)性(++)┅2分;強(qiáng)陽(yáng)性(+++)┅3分。依照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,可分為:弱陽(yáng)性(+ ,指陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)在25%以下);中等陽(yáng)性(++,指陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)在25%~49%);強(qiáng)陽(yáng)性(+++ ,指陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)在50%以上)。 目前多采用積分綜合計(jì)量。計(jì)算公式為:(+)%×1 +(++)%×2+(+++)%×3;總數(shù)值<1.0者為(+)記為1分,1.0~1.5者為(++)記為2分,>1.5者為(+++)記為3分,表達(dá)陰性者記為0分。至少隨機(jī)觀察5~10個(gè)HPF。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,CD68和CCL5在癌和癌旁組織的表達(dá)差異采用配對(duì)設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn),與病理因素的相關(guān)性采用R×C的χ2進(jìn)行檢驗(yàn),組間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析,P<0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1CD68在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)CD68在胃癌組織的巨噬細(xì)胞均呈陽(yáng)性表達(dá),胞漿內(nèi)含清晰的黃色或黃褐色顆粒者視為陽(yáng)性,見圖1箭頭所示。在癌旁組織中僅1例呈弱陽(yáng)性表達(dá),根據(jù)病理評(píng)分,行配對(duì)t檢驗(yàn),具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),CD68的陽(yáng)性表達(dá)程度與胃癌組織大小、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性,與年齡、性別無(wú)相關(guān)性,見表1。

表1CD68在胃癌中的表達(dá)及與病理因素的關(guān)系[n(%)]

Tab.1Relationship between expression and pathological factors of CD68 in gastric cancer[n(%)]

FeaturenExpressiondegreesandProportionofCD68++++++Pχ2Age(year)≤6520866>0.010.223>652811710GenderMale289109>0.012.817Female207310Tumorsize(cm)≤5221363<0.0114.422>5264517InvasiondepthT1+T2221642<0.0126.757T3+T4263221DegreeofdifferentiationHigh241572<0.0111.297Low245811LymphnodemetastasisNo201361<0.0119.360Yes285419PathologicalgradeⅠ-Ⅱ211452<0.0121.423Ⅲ-Ⅳ274320TumorthrombusNo181242<0.019.695Yes308616EnvelopWithout93420.0197.109Witp94827

圖1 CD68在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況(SP,×200)Fig.1 Expression of CD68 in gastric cancer and precancerous tissues(SP,×200)Note: A.Grade-;B.Grade+;C.Grade++;D.Grade+++.A for precancerous tissues;B-D for cancer tissues.

圖2 CCL5在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況(SP,×200)Fig.2 Expression of CCL5 in gastric cancer and precancerous tissues(SP,×200)Note: A.Grade-;B.Grade+;C.Grade++;D.Grade+++.A for precancerous tissues;B-D for cancer tissues.

表2CCL5在胃癌中的表達(dá)及與病理因素的關(guān)系[n(%)]

Tab.2Relationship between expression and pathological factors of CCL5 in gastric cancer[n(%)]

FeaturenExpressiondegreesandproportionofCCL5++++++Pχ2Age(year)≤6520956>0.010.423>652810810GenderMale289910>0.012.313Female201037Tumorsize(cm)≤5221264<0.0113.206>5263617InvasiondepthT1+T2221651<0.0132.510T3+T4262321DegreeofdifferentiationHigh241563<0.0110.477Low245712LymphnodemetastasisNo201271<0.0118.467Yes284618PathologicalgradeⅠ-Ⅱ211443<0.0119.924Ⅲ-Ⅳ273420TumorthrombusNo181152<0.019.937Yes308517EnvelopWithout94230.0644.636Witp95925

圖3 CCL5與CD68在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性(r=0.759)Fig.3 Correlation between CCL5 and CD68 in gastric cancer(r=0.759)Note: Spearman correlation analysis suggested the expression of CD68 and CCL5 in gastric carcer tissues was positively correlated(r=0.759,P<0.01).

2.2CCL5在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)CCL5在胃癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá),胞漿內(nèi)含清晰的黃色或黃褐色顆粒者視為陽(yáng)性,癌旁組織中為陰性表達(dá),見圖2箭頭所示。根據(jù)病理評(píng)分,行配對(duì)t檢驗(yàn),具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),CCL5的陽(yáng)性表達(dá)程度與胃癌組織浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期情況及腫瘤分化程度呈正相關(guān)性,與年齡、性別、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性,見表2。

2.3CCL5與CD68在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性研究經(jīng)Spearman相關(guān)分析,胃癌組織中CCL5與CD68的表達(dá)有顯著的相關(guān)性,且呈正相關(guān)(r=0.759),見圖3。

3討論

侵襲、轉(zhuǎn)移使得胃癌死亡率不斷上升,而且行胃癌根治性切除術(shù)后患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的幾率仍然很大[11]。因此目前對(duì)胃癌的靶向治療逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。而靶向治療的關(guān)鍵是尋找到新的靶點(diǎn),對(duì)其進(jìn)行阻斷或增強(qiáng)其功能使其發(fā)揮抗腫瘤作用。吉非替尼(gefitinib)可通過(guò)減少由間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的CCL5的數(shù)量負(fù)性影響表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶,抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),抑制血管生成因子的侵入和分泌[12]。而CCL5在胃癌中的作用研究相對(duì)較少。本文通過(guò)CCL5與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD68在胃癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性進(jìn)行研究,期望為胃癌的靶向治療提供重要的理論依據(jù)。

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor associated macroph-ages,TAM)是腫瘤間質(zhì)免疫細(xì)胞的重要部分,可分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子導(dǎo)致發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),即上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)[13]。研究發(fā)現(xiàn),微環(huán)境中大量TAM有利于胃癌的生長(zhǎng)并導(dǎo)致患者預(yù)后不良[14]。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)一致,CD68的表達(dá)與胃癌組織大小、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性,與年齡、性別無(wú)相關(guān)性。

CCL5即調(diào)節(jié)活化正常 T 細(xì)胞表達(dá)與分泌的趨化因子(Regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES),是分子量為8 kD的小分子蛋白,主要由CD8+T 淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌,能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞向炎癥部位浸潤(rùn)。RANTES 特異性受體包括 CCRl、CCR3、CCR4 和 CCR5。CCR1 和 CCR5 是高親和力受體[15]。CCL5通過(guò)其受體發(fā)揮作用,當(dāng)兩者結(jié)合后激活G蛋白并最終引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度上升及蛋白激酶C的活化,趨化白細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、單核細(xì)胞的遷移和增殖,有研究顯示CCR5-CCL5軸與癌癥轉(zhuǎn)移密切相關(guān),天然中藥DT-13通過(guò)CCR5-CCL5軸抑制胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[16],Yanagie等[17]在胃癌研究中對(duì)趨化因子受體不同的cDNA基因比較發(fā)現(xiàn),趨化因子CCL5上調(diào),其受體CCR5涉及到胃癌的擴(kuò)散,其表達(dá)水平同樣可作為胃癌患者生存的一個(gè)不良因素,阻斷CCR5后胃癌患者的生存期明顯延長(zhǎng)[18]。而在本研究中發(fā)現(xiàn)CCL5在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織浸潤(rùn)、分化程度呈正相關(guān)性,與年齡、性別、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性,符合上述結(jié)果。

CD68是TAM的表面標(biāo)志,本研究顯示CCL5與CD68的表達(dá)呈正相關(guān),說(shuō)明CCL5的分泌可能是TAM促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移重要原因之一,該結(jié)論將為胃癌的治療提供新的治療靶點(diǎn)。在將來(lái)的動(dòng)物試驗(yàn)中將應(yīng)用藥物下調(diào)或封閉CCL5的受體CCR5后觀察腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移情況,為臨床提供理論依據(jù)。

綜上所述,CD68和 CCL5對(duì)胃癌組織的大小、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度起重要的促進(jìn)作用,這一結(jié)論與胃癌血清中CCL5濃度的檢測(cè)結(jié)果一致[11]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,CCL5可能成為胃癌治療的新靶點(diǎn),為胃癌的靶向治療提供生物學(xué)依據(jù),為胃癌的治療提供新的手段。

參考文獻(xiàn):

[1]Mukhtar RA,Nseyo O,Campbell MJ,etal.Tumor-associated macrophage in breast cancer as potential biomarkers for new treatments and diagnostics [J].Expert Rev Mol Diagn,2011,11(1):91-100.

[2]Wang B,Xu D,Yu X,etal.Association of intra-tumoral infiltrating macrophages and regulatory T cells is an independent prognostic factor in gastric cancer after radical resection [J].Ann Surg Oncol,2011,18(9):2585-2593.

[3]Wu H,Xu JB,He YL,etal.Tumor-associated macrophages promote angiogenesis and lymphangiogenesis of gastric cancer [J].Surg Oncol,2012,106(4):462-468.

[4]Soria G,Ben-Baruch A.The inflammatory chemokines CCL2 and CCL5 in breast cancer [J].Cancer Lett,2008,267(2):271-285.

[5]Vallet S,Pozzi S,Patel K,etal.A novel role for CCL3 in myeloma-induced bone disease via osteocalcin downregulation and inhibition of osteoblast function[J].Leukemia,2011,25(7):1174-1181.

[6]Dairaghi DJ,Oyajobi BO,Gupta A,etal.CCR1 blockade reduces tumor burden and osteolysis in vivo in a mouse model of myeloma bone disease[J].Blood,2012,120(7):1449-1457.

[7]Lv D,Zhang Y,Kim HJ,etal.CCL5 as a potential immunotherapeutic target in triple-negative breast cancer [J].Cell Mol Immunol,2013,10(4):303-310.

[8]Lin S,Wan S,Sun L,etal.Chemokine C-C motif receptor 5 and C-C motif ligand 5 promote cancer cell migration under hypoxia [J].Cancer Sci,2012,103(5):904-912.

[9]Zhang Y,Lv D,Kim HJ,etal.A novel role of hematopoietic CCL5 in promoting triple-negative mammary tumor progression by regulating generation of myeloid-derived suppressor cells[J].Cell Res,2013,23(3):394-408.

[10]Sima AR,Sima HR,Rafatpanah H,etal.Serum chemokine ligand 5(CCL5/RANTES)level might be utilized as a predictive marker of tumor behavior and disease prognosis in patients with gastric adenocarcinoma[J].J Gastrointest Cancer,2014,45(4):476-480.

[11]Zhao ZJ,Zhang RP,Wang G,etal.Prognosis of patients with recurrence after curative resection of advanced gastric cancer[J].Chin J Gastrointest Surg,2011,14(2):107-110.

[12]Borghese C,Cattaruzza L,Pivetta E,etal.Gefitinib inhibits the cross-talk between mesenchymal stem cells and prostate cancer cells leading to tumor cell proliferation and inhibition of docetaxel activity[J].J Cell Biochem,2013,114(5):1135-1144.

[13]Galdiero MR,Garlanda C,Jaillon S,etal.Tumor associated macrophage and neutrophils in tumor progression[J].J Cell Physiol,2013,228(7):1404-1412.

[14]Zhang QW,Liu L,Gong CY,etal.Prognostic signicance of tumor-associated mac-rophages in solid tumor:a meta-analysis of the literature[J].PLoS One,2012,7(12):483-496.

[15]Sigrist S,Oberholzer J,Bohbot A,etal.Activation of human macrophages by allogeneic islets preparations:inhibition by AOP-RANTES and heparinoids[J].Immunology,2004,111(4):416-421.

[16]Lin Sen-Sen,Fan Wei,Sun Li,etal.The saponin DT-13 inhibits gastric cancer cell migration through down-regulation of CCR5-CCL5 axis[J].Chin J Nat Med,2014,12(11):833-840.

[17]Yanagie H,Hisa T,Ono M,etal.Chemokine and chemokine receptor related to cancer metastasis[J].Gan To Kagaku Ryoho,2010,37(11):2052-2057.

[18]Mencarelli A,Graziosi L,Renga B,etal.CCR5 antagonism by maraviroc reduces the potential for gastric cancer cell disse mination[J].Transl Oncol,2013,6(6):784-793.

[收稿2015-04-07修回2015-07-16]

(編輯張曉舟)

[關(guān)鍵詞]胃癌;TAM;CCL5

Expression and correlation of tumor-associated macrophages and CCL5 in ganstric cancer

DINGHai-Xia,ZHAOLian-Mei,SHANBao-En.DepartmentofInstituteofCancerResearch,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050000,China

[Abstract]Objective:To study the expression and correlation of tumor-associated macrophages(TAM) and CCL5 in ganstric cancer.Methods: 48 cases patients with completed clinical and pathological data of gastric cancer paraffin block specimens were selected.Cancer tissues and adjacent tissues were used as control,using SP immunohistochemical method to detect CD68 and CCL5 in gastric cancer tissues and adjacent tissues,and using the Spearman correlation statistics statistical methods for the correlation.Results: CD68 and CCL5 showed positive expression in gastric cancer tissue,significantly higher than those in the adjacent tissues(P<0.01),CD68 and CCL5 were related with gastric cancer invasion depth,lymph node metastasis,TNM stage and tumor differentiation(P<0.001).There was positive relation between the expression of CD68 and CCL5 in gastric cancer(P<0.01,r=0.759).Conclusion: CD68 and CCL5 played a driving role to the invasion and metastasis of gastric cancer occurrence,suggesting that the secretion CCL5 by TAM may promote the invasion and metastasis of gastric cancer.

[Key words]Ganstric cancer;Tumor associated macrophages(TAM);CCL5

作者簡(jiǎn)介:丁海霞(1981年-),女,碩士,主治醫(yī)師,主要從事內(nèi)分泌與免疫機(jī)制的研究。

通訊作者②。

中圖分類號(hào)R735.2
①本文為河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.H2015206376)。

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)01-0074-05

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.01.016

猜你喜歡
胃癌
碘-125粒子調(diào)控微小RNA-193b-5p抑制胃癌的增殖和侵襲
miR-628-3p對(duì)胃癌細(xì)胞HGC-27增殖和遷移能力的影響
青年胃癌的臨床特征
UBE2C基因沉默表達(dá)對(duì)人胃癌AGS細(xì)胞增殖和遷移的影響
姜黃素對(duì)人胃癌AGS細(xì)胞自噬流的作用
腹腔鏡胃癌根治術(shù)治療老年進(jìn)展期胃癌的臨床療效分析
內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)在早期胃癌診療中的應(yīng)用
P53及Ki67在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義
胃癌組織中LKB1和VEGF-C的表達(dá)及其意義
胃小彎全切術(shù)治療遠(yuǎn)端胃癌的隨機(jī)對(duì)照研究
景宁| 饶平县| 西青区| 轮台县| 平昌县| 梅州市| 亳州市| 勐海县| 湖州市| 资阳市| 密云县| 上虞市| 舞钢市| 绥德县| 九龙城区| 睢宁县| 泰兴市| 宜城市| 襄樊市| 武城县| 巴东县| 桂林市| 汶上县| 宜章县| 武平县| 永泰县| 长武县| 金湖县| 昂仁县| 来安县| 泸水县| 达拉特旗| 观塘区| 六安市| 汨罗市| 开江县| 杂多县| 丰镇市| 繁昌县| 鸡东县| 阿鲁科尔沁旗|