韋建喬

（廣西壯族自治區(qū)河池食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 河池 574000）

高效液相色譜法測(cè)定咳特靈片中牡荊素含量

韋建喬

（廣西壯族自治區(qū)河池食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 河池 574000）

目的建立測(cè)定咳特靈片中牡荊素含量的高效液相色譜法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent SB－C18柱(250 mm× 4．6 mm，5 m)，流動(dòng)相為乙腈－0．2%醋酸水溶液（14∶86），流速為1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm，柱溫為30℃。結(jié)果牡荊素質(zhì)量濃度在0．071 3～0．428 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r＝0．999 7），平均回收率為97．84%，RSD＝1．01%(n＝5)。結(jié)論所建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于咳特靈片的含量測(cè)定。

含量測(cè)定；牡荊素；高效液相色譜法；咳特靈片

小葉榕，也稱雅榕 Ficus concinna(Miq．)Miq．，榕屬植物，根、葉、果實(shí)可入藥，具有清熱、解表、化濕功效，用于流行性感冒、瘧疾、支氣管炎、急性腸炎、細(xì)菌性痢疾、百日咳以及瘀血阻脈所致的胸痹，癥見(jiàn)胸悶憋氣、心前區(qū)刺痛[1]。其化學(xué)成分主要含黃酮類化合物牡荊素，牡荊素主要藥理作用為抗炎、抑菌、解痙、抗癌[2]?？忍仂`片主要由小葉榕干浸膏制成，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、消炎功效，主治咳喘及慢性支氣管炎[3]。目前，尚未見(jiàn)測(cè)定咳特靈片中牡荊素含量的報(bào)道[4－10]。為此，筆者建立了采用高效液相色譜法對(duì)方中牡荊素進(jìn)行含量測(cè)定的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀；AUW220D型電子分析天平；KQ－400KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗器。牡荊素對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)為111687－200602，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；咳特靈片（批號(hào)150101，150102，150103，廣西潤(rùn)達(dá)制藥有限公司）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent SB－C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈 －0．2%醋酸水溶液（14∶86）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；溫度：30℃，進(jìn)樣量：20 μL。在擬訂色譜條件下，牡荊素峰的保留時(shí)間約為22 min，理論板數(shù)為16 833，與相鄰峰的分離度為大于1．5，拖尾因子為1．05。供試品溶液與對(duì)照品溶液在同一保留時(shí)間有相同的波峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照品溶液則無(wú)相應(yīng)的峰，陰性對(duì)照品無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取牡荊素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含23．78 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取樣品10片，研細(xì)，取約 0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加60%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲波振蕩15 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。制備不含小葉榕的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取牡荊素對(duì)照品適量，分別配制成質(zhì)量濃度為0．071 3，0．142 7，0．214 0，0．285 4，0．356 7，0．428 0 g／L標(biāo)準(zhǔn)液，按擬訂色譜條件注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝2 385 329．736 5X－13639．413 0，r＝0．9997(n＝6)。結(jié)果表明，牡荊素質(zhì)量濃度在0．071 3～0．428 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一牡荊素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定牡荊素的峰面積。結(jié)果的 RSD為 1．46% (n＝5)，表明儀器精密度良好，詳見(jiàn)表1。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為150101）溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)測(cè)定牡荊素峰面積。結(jié)果的 RSD為1．34%（n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，詳見(jiàn)表2。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

重復(fù)性試驗(yàn)：對(duì)同一批（批號(hào)為150101）樣品5份，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件平行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為0．156 mg／g，RSD為2．17%(n＝5)，表明方法的重復(fù)性較好，詳見(jiàn)表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的供試品約0．25 g（批號(hào)為150101），共5份，分別精密加入牡荊素對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度0．05 g／L）1 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算出含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 牡荊素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)分別為150101，150102，150103）依法測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3)

3 討論

3．1 提取溶劑試驗(yàn)

對(duì)不同溶劑提取樣品進(jìn)行考察，取供試品共6份，每份0．5 g，置具塞錐形瓶中，分別加入乙醇、甲醇、30%乙醇、30%甲醇、60%乙醇、60%甲醇，各25 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果60%甲醇溶液提取時(shí)得到的含量高，故選擇60%甲醇溶液為提取溶劑。

3．2 提取時(shí)間試驗(yàn)

對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行考察，取供試品共4份，每份0．5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，分別超聲15 min，30 min，1 h，2 h，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果超聲15 min，30 min，1 h，2 h的提取率相當(dāng)，表明超聲15 min基本可以將樣品中的牡荊素提取完全，故選擇超聲時(shí)間為15 min。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)．中華本草[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：1 034－1 036．

[2]孫文基．天然活性成分簡(jiǎn)明手冊(cè)[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1998：597．

[3]WS3－B－2743－97．中藥成方制劑(第十四冊(cè))[S]．

[4]張 鋒．大鼠血漿中牡荊素鼠李糖苷的質(zhì)量濃度測(cè)定[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19(12)：33－34．

[5]王兆龍，楊 蕾，孫 爽．咳特靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)藥業(yè)，2007，16（13）：16－17．

[6]鐘 英，楊尚軍，王 菊，等．高效液相色譜法測(cè)定山楂葉總黃酮中牡荊素含量[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，10（11）：26－28．

[7]羅婭君，邊清泉，陳 佳，等．高效液相色譜法測(cè)定牡荊中牡荊素含量[J]．廣西植物，2011，31（3）：418－421．

[8]楊冬梅，楊世友．高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方葛酮顆粒中葛根素含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19(5)：19－20．

[9]曹 健，王 芳，陳 琳，等．高效液相色譜法測(cè)定眩痛定膠囊中延胡索乙素含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19（3）：26－27．

[10]馬春婷，李紅艷，鄧智懷．高效液相色譜法測(cè)定咳特靈片中馬來(lái)酸氯苯那敏含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2008，17(15)：39－40．

Content Determination of Apigenin8－C－glucoside in Keteling Tablets by RP－HPLC

Wei Jianqiao
(Guangxi Hechi Food and Drug Control,Hechi,Guangxi,China 574000)

Objective To establish an HPLC method for determination the content of Apigenin8－C－glucoside in Keteling tablets．M ethods HPLC method was used．The column type was Agilent SB－C18(250 mm×4．6 mm,5 μm)．The mobile phase was acetonitrile－0．2%acetic acid(14∶86)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detective wavelength was 340 nm and column temperature was 30℃．Results The linear range of quercetin was 0．713－0．428 g／L(r＝0．999 7),the average recovery was 97．84% and the RSD＝1．01%(n＝5)．Conclusion The method is simple and accurate,and can be used reliably for the quality control of Apigenin8－C－glucoside．

content determination;apigenin8－C－glucoside;HPLC;Keteling Tablets

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0057－03

2015－07－13)