侯志平，何培元，劉景華，王春青，尹春英，李炳慶

（1.承德醫(yī)學院病理學教研室，河北承德 067000;2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;3.承德市中心醫(yī)院神經(jīng)外科）

河北省漢族人群IL-10基因多態(tài)性與慢性乙肝病毒感染的關(guān)系*

侯志平1，何培元2，劉景華3，王春青2，尹春英2，李炳慶2

（1.承德醫(yī)學院病理學教研室，河北承德 067000;2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;3.承德市中心醫(yī)院神經(jīng)外科）

目的:探討白細胞介素-10(IL-10)基因啟動子區(qū)-1082 G/A位點單核苷酸多態(tài)性與慢性乙型肝炎病毒感染的關(guān)系。方法:河北籍漢族患者310例，根據(jù)疾病類型分為慢性乙型肝炎肝硬化組42例、慢性乙型肝炎組124例、乙肝病毒(HBV)攜帶組56例、自限性感染組88例，采用ELISA法檢測患者血清IL-10水平，并檢測IL-10基因啟動子區(qū)-1082 G/A位點基因型和等位基因分布頻率。結(jié)果:慢性乙型肝炎感染組患者血清IL-10水平最高，明顯高于其它三個組(P＜0.05）;自限性感染組患者血清IL-10水平最低，明顯低于其它三個組(P＜0.05）。各組患者GG、GA基因型分布頻率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）;自限性感染組患者AA基因型頻率明顯低于慢性乙型肝炎肝硬化組和乙肝病毒攜帶組(P＜0.05）。并且，自限性感染組A等位基因頻率明顯低于其它三組(P＜0.05）。結(jié)論:IL-10啟動子區(qū)-1082 G/A位點AA基因型和A等位基因可能是河北漢族人群易感HBV的宿主基因。

IL-10;單核苷酸基因多態(tài)性;慢性乙肝病毒感染;河北省漢族人群

乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球性的公共衛(wèi)生問題，是急慢性肝病的主要原因[1]。不同個體感染HBV后可出現(xiàn)不同的后果，部分患者能自行清除HBV并產(chǎn)生保護性抗體，部分乙型肝炎患者會慢性化，最終死于肝硬化或肝癌[2]。目前研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)境、病毒和宿主因素與HBV感染和轉(zhuǎn)歸有關(guān)，尤其是宿主的免疫反應對HBV感染的預后具有舉足輕重的作用。白細胞介素-10(IL-10）是主要由Th2細胞分泌的抵制性細胞因子，在HBV感染慢性化過程中發(fā)揮重要作用[3]。文獻報道，IL-10基因啟動子區(qū)-1082G/A具有單核苷酸多態(tài)性(SNP)，并且其轉(zhuǎn)錄活性與血清中IL-10的水平相關(guān)[4]。但各實驗室對不同人種和民族乙肝患者IL-10表達水平的報道結(jié)果不盡一致，甚至出現(xiàn)相反的結(jié)果[5]。為此，本研究對河北省漢族人群IL-10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與HBV感染的關(guān)系進行了探討。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2010年1月-2012年1月在承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科就診的河北籍漢族患者310例，其中慢性乙型肝炎肝硬化42例、慢性乙型肝炎124例、HBV攜帶者56例、自限性感染者88例，年齡22-67歲，各疾病組患者性別、年齡具有可比性。

1.2 納入和排除標準 符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的準則[6]。排除合并HCV、HIV或HDV感染，自身免疫性肝病，代謝性肝病，酒精性肝病及藥物性肝病等。1.3 研究方法

1.3.1 檢測血清IL-10水平:采用ELISA法檢測患者血清IL-10水平(試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司），在波長450nm處讀取數(shù)值。

1.3.2 檢測等位基因和基因型頻率:EDTA抗凝管采集外周靜脈血2ml，采用全血基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，PCR擴增儀檢測IL-10基因啟動子區(qū)-1082 G/A位點的基因多態(tài)性。上下游引物及延伸引物由上海生物工程有限公司合成，具體序列見表1。擴增參數(shù)如下:95℃預變性10min，94℃ 30s，退火溫度60℃ 1min，35個循環(huán)，72℃延伸10min。貝克曼檢測分析儀檢測基因多態(tài)性。

表1 PCR擴增引物和延伸引物序列

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件行卡方檢驗和ANOVA單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-10水平 慢性乙型肝炎肝硬化組、慢性乙型肝炎感染組、乙肝病毒攜帶組、自限性感染組患者血清IL-10水平分別為(11.54±5.78）pg/ml、（23.65±10.32）pg/ml、（8.76±1.55）pg/ml、（4.57±0.22）pg/ml。慢 性乙型肝炎感染組患者血清IL-10水平最高，明顯高于其它三個組(P＜0.05）;自限性感染組患者血清IL-10水平最低，明顯低于其它三個組(P＜0.05）。

2.2 IL-10-1082G/A位點基因型和等位基因頻率 ⑴各組患者IL-10-1082G/A位點GG/GA/AA基因型分布頻率比較，差異具有統(tǒng)計學意義(x2=17.31，P＜0.05）:各組患者GG、GA基因型分布頻率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）;慢性乙型肝炎感染組AA基因型頻率明顯低于慢性乙型肝炎肝硬化組，自限性感染組AA基因型頻率明顯低于慢性乙型肝炎肝硬化組和乙肝病毒攜帶組(P＜0.05）。⑵各組患者等位基因G/A分布頻率比較，差異具有統(tǒng)計學意義(x2=34.35，P＜0.05）:自限性感染組A等位基因頻率明顯低于其它三組(P＜0.05）。見表2:

表2 IL-10-1082 G/A位點基因型和等位基因分布頻率[n(%）]

3 討論

據(jù)WHO報道，全球大約有35億人曾經(jīng)感染過HBV，其中2.4億為慢性HBV感染者，每年有約超過80萬HBV感染者死于并發(fā)癥，包括肝硬化和肝癌[7]。地理分布調(diào)查顯示，東亞地區(qū)成年人接觸HBV后有約10%-15%成為慢性感染者。

大量資料證明，宿主免疫系統(tǒng)對HBV感染的慢性化和進展程度有明顯影響[8]。IL-10主要由Th2細胞和單核巨噬細胞產(chǎn)生，具有較強的免疫調(diào)節(jié)活性，一方面能抑制活化的T細胞產(chǎn)生細胞因子，也因此被稱為細胞因子合成抑制因子，特別是抑制TH1細胞產(chǎn)生IL-2和IFN-γ等細胞因子，從而抑制細胞免疫應答;另外，IL-10還具有很強的抗炎活性，可抑制促炎介質(zhì)的合成和活性，并與抗炎介質(zhì)有協(xié)同作用。因此，普遍認為IL-10是一種重要的抗炎介質(zhì)及免疫抑制因子[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，自限性感染組患者血清IL-10水平最低，明顯低于慢性乙型肝炎肝硬化組、慢性乙型肝炎感染組、乙肝病毒攜帶組。一些學者認為IL-10高表達與肝病遷延不愈密切相關(guān)，機制可能是IL-10的高表達抑制了干擾素的合成，從而削弱了宿主抵抗HBV感染的免疫活性;但也有學者認為，IL-10表達與個體的遺傳背景有關(guān)，特別是啟動子區(qū)基因的多態(tài)性，在一定程度上可調(diào)控IL-10 mRNA的生成，從而影響血清IL-10的水平[10]。

本研究對310例患者IL-10啟動子區(qū)基因多態(tài)性的分析發(fā)現(xiàn)，各組患者IL-10-1082 G/A位點AA/AG/GG基因型分布頻率比較，差異具有統(tǒng)計學意義，并且，自限性感染組AA基因型和A等位基因頻率最低，提示，AA基因型和A等位基因可能與HBV感染的易感性有關(guān)。本研究結(jié)果與國內(nèi)外文獻報道的研究結(jié)果相似[11]。但Sofian等[5]報道，IL-10-1082 G/A位點基因多態(tài)性在伊朗人群中與HBV感染的風險無關(guān)。

總之，HBV感染是一個復雜的多因素共同作用的過程，其中宿主的免疫狀態(tài)是一個關(guān)鍵因素，其與宿主遺傳背景的相互作用直接決定了HBV感染后的轉(zhuǎn)歸。本研究初步揭示了IL-10啟動子區(qū)-1082 G/A位點AA基因型和A等位基因可能是河北漢族人群易感HBV的宿主基因。但由于不同人群的遺傳背景不同，為避免由于樣本量不足引起的偏倚，應該在不同人種、種族和地區(qū)間增大樣本量進一步深入研究。

,

[1]王立芹.慢性乙型肝炎發(fā)病趨勢及患者的生命質(zhì)量與相關(guān)影響因素的研究[D].石家莊:河北醫(yī)科大學，2010.

[2]韓瑩，丁惠國.抗病毒治療乙型肝炎肝硬化的過去、現(xiàn)在和將來[J].實用肝臟病雜志，2015，18(5):453-456.

[3]何文敏，蘇毅.IL-10和IL-17在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化以及肝硬化合并腹腔感染中的研究進展[J].世界華人消化雜志，2014，22(3):333-339.

[4]嚴艷，李卓，李洪權(quán)，等.白細胞介素-10基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒感染的關(guān)系[J].世界華人消化雜志，2006，14(36): 3529-3533.

[5]Talaat RM, Dondeti MF, El-Shenawy SZ, et al. Αssociation between IL-10 gene promoter polymorphism and hepatitis b viral infection in an Egyptian population[J]. Βiochem Genet, 201452(9-10): 387-402.

[6]中華醫(yī)學會肝病學分會，中華醫(yī)學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版[J].中華實驗和臨床感染病雜志，2011，5(1):79-100.

[7]Schilsky ML. Hepatitis Β “360”[J]. Transplantation Proceedings, 2013, 45(3): 982-985.

[8]Yu X, Zheng Y, Deng Y, et al. Serum Interleukin (IL)-9 and IL-10, but not T-Helper 9 (Th9) Cells, are Αssociated With Survival of Patients With Αcute-on-Chronic Hepatitis Β Liver Failure[J]. Medicine (Βaltimore), 2016, 95(16): e3405.

[9]張道杰，段朝霞.IL-10的研究進展[J].國外醫(yī)學(免疫學分)，2003，26(1):39-41.

[10]Thompson K, Maltby J, Fallowfield J, et al.Interleukin-10 expression and function in experimental murine liver inf ammation and f brosis[J]. Hepatology, 1998,28(6): 1597-1606.

[11]Srivastava M, Ranjan Α, Choudhary JK, et al. Role of proinflammatory cytokines (interferon gamma) and anti-inflammatory cytokine (interleukin-10) gene polymorphisms in chronic hepatitis Β infection: an Indian scenario[J]. J Interferon Cytokine Res, 2014,34(7):547-551.

（基礎(chǔ)醫(yī)學欄目編輯:陳志宏)

RELATIONSHIPS BETWEEN IL-10 GENE POLYMORPHISMS AND CHRONIC HEPATITIS B VIRUS INFECTION IN HAN POPULATION OF HEBEI PROVINCE

HOU Zhi-ping, HE Pei-yuan, LIU Jing-hua, et al
(PathoLogy Department of Chengde MedicaL CoLLege, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the relationships between the polymophisms of interleukin-10 (IL -10) promoter region at -1082 G/Α locus and chronic hepatitis Β virus (HΒV) infection.Methods:310 Han patients in Hebei province were divided into liver cirrhosis of chronic hepatitis Β group (n=42), chronic hepatitis Β group (n=124), HΒV carried group (n=56) and self-limited infection group (n=88). The serum IL-10 level, genotype and allele distribution frequency of IL -10 promoter region at -1082 G/Α locus were detected of all patients.Results:The serum IL-10 level of chronic hepatitis Β virus patients was the highest, while the serum IL-10 level of self-limited infection patients was the lowest (P＜0.05). There was no signif cant difference in genotype frequencies of GG and ΑΑ among the 4 groups (P＞0.05). The genotype frequencies of ΑΑ of self-limited infection group was obviously lower than liver cirrhosis of chronic hepatitis Β group and HΒV carried group (P＜0.05); Moreover, the allele distribution frequency of Α in self-limited infection group was obviously lower than other 3 groups(P＜0.05).Conclusions:ΑΑ genotype and Α alleles of IL-10 promoter region at -1082 G/Α maybe the host gene that susceptible to HΒV of Han population in Hebei province.

Interleukin-10; Gene polymorphism; Chronic HΒV infection; Han population of Hebei province

R512.6

A

1004-6879(2016）04-0278-03

2015-12-02）

* 河北省衛(wèi)生廳資助項目(20120112),河北省臨床優(yōu)秀人才項目(361008),河北省高校重點學科建設(shè)項目資助