李耀發(fā)，黨志紅，安靜杰，高占林，苑子夜，柳春紅，袁文龍，潘文亮

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北保定071000；2.河北省植保植檢站，河北石家莊050011）

綠盲蝽卵的染色方法及其在棉花和苜蓿上的分布

李耀發(fā)1，黨志紅1，安靜杰1，高占林1，苑子夜1，柳春紅1，袁文龍2，潘文亮1

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北保定071000；2.河北省植保植檢站，河北石家莊050011）

為了明確綠盲蝽在棉花和苜蓿植株上的產(chǎn)卵特性，采用改進(jìn)的酸性品紅染色法，調(diào)查了綠盲蝽在棉花和苜蓿植株不同部位上的產(chǎn)卵情況。結(jié)果表明：綠盲蝽在棉花植株上的產(chǎn)卵部位與其趨嫩特性密切相關(guān)，主要產(chǎn)卵部位是嫩葉和腋芽，其次是幼蕾和嫩葉柄，這4個(gè)幼嫩部位上的產(chǎn)卵量占棉花植株總卵量的79.57%，而在其他部位上的產(chǎn)卵量較少；但是在苜蓿植株上，綠盲蝽的主要產(chǎn)卵部位是剛收割后的新茬和嫩尖，2個(gè)部位的產(chǎn)卵量分別占苜蓿植株總卵量的43.90%和25.30%，并且在舊茬上也有11.59%的產(chǎn)卵量，而在嫩葉上產(chǎn)卵量卻很少（僅占總卵量的0.91%）。綠盲蝽在植株上的產(chǎn)卵部位與其趨嫩習(xí)性有關(guān)，但也會(huì)因寄主種類的不同而存在差異。

綠盲蝽；產(chǎn)卵部位；酸性品紅染色法；棉花；苜蓿

綠盲蝽（Apolygus lucorum）屬半翅目盲蝽科，自21世紀(jì)以來(lái)，首先在棉田由次要害蟲(chóng)演變成了主要害蟲(chóng)[1，2]。綠盲蝽具有寄主植物種類多、成蟲(chóng)飛行擴(kuò)散能力強(qiáng)等特點(diǎn)，其為害從棉田逐漸波及到同一種植區(qū)內(nèi)的其他多種農(nóng)作物、果樹(shù)和蔬菜[2～5]。近年來(lái)，科研人員對(duì)綠盲蝽的人工飼養(yǎng)技術(shù)、個(gè)體發(fā)育與繁殖、食性、寄主選擇行為、取食行為、性信息素通訊行為、交配與產(chǎn)卵行為、飛行與擴(kuò)散能力、滯育與越冬習(xí)性、年生活史等生物學(xué)習(xí)性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究[6~13]，但是對(duì)綠盲蝽的產(chǎn)卵習(xí)性更多的是關(guān)注于綠盲蝽越冬卵的研究，而對(duì)綠盲蝽在棉花和苜蓿2種主要寄主植物上的產(chǎn)卵部位研究報(bào)道卻較少。

酸性品紅染色法是一種常見(jiàn)的昆蟲(chóng)染色方法，該方法可操作性強(qiáng)、易于掌握，且鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性較高。高源等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在對(duì)較大群體大豆孢囊線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定時(shí)，與塑料缽柱法相比，采用酸性品紅染色法更加便捷，且鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。張玉茹等[15]在研究?jī)?chǔ)糧害蟲(chóng)感染菜豆象的檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，酸性品紅染色法操作簡(jiǎn)便易行，適于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。王殿軒等[16]也應(yīng)用酸性品紅溶液染色進(jìn)行了儲(chǔ)糧米象卵的檢測(cè)。綠盲蝽的卵產(chǎn)于植物組織內(nèi)，只有卵蓋露在組織外，因此，很難用肉眼進(jìn)行鑒定和調(diào)查?；诖?，作者初步介紹了適用于綠盲蝽卵檢測(cè)的改進(jìn)的酸性品紅染色法，并應(yīng)用該方法調(diào)查了綠盲蝽卵在棉花和苜蓿植株上的分布情況。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試劑有酸性品紅（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）和冰乙酸（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）。

供試作物為紫花苜蓿（鄭州華豐草業(yè)科技有限公司）和棉花（品種為魯研棉21，山東苗寶種業(yè)有限公司）。

供試綠盲蝽采自河北省滄州市獻(xiàn)縣棉田，在養(yǎng)蟲(chóng)室［溫度（26±1）℃，相對(duì)濕度60%～80%］內(nèi)，以豇豆為飼料進(jìn)行飼養(yǎng)。成蟲(chóng)羽化后5 d，選取生理狀態(tài)一致的成蟲(chóng)進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 酸性品紅染色的方法取0.1 g酸性品紅溶于95 mL蒸餾水中，然后加入5 mL冰乙酸，配制成0.1%酸性品紅溶液。將待染色材料放入40～60℃溫水中浸泡5 min，浸泡幼嫩組織如生長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)水溫要低一些（溫度過(guò)高，會(huì)造成幼嫩葉子變色，影響觀察效果）。將處理好的材料放入0.1%酸性品紅溶液中浸泡15 min。染色完成后，用蒸餾水將多余的染料沖洗干凈，用吸水紙吸干多余的水分。

1.2.2 綠盲蝽在棉株不同部位的產(chǎn)卵情況調(diào)查試驗(yàn)在河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所棉花試驗(yàn)田進(jìn)行。7月中旬，用40目的紗網(wǎng)罩（1 m×1 m×1 m）將棉株（蕾鈴期）罩住，以防其他昆蟲(chóng)為害。每個(gè)紗網(wǎng)罩內(nèi)接入綠盲蝽雌、雄成蟲(chóng)各15頭，3次重復(fù)。產(chǎn)卵3 d后，取棉株各組織（嫩葉、腋芽、幼蕾、嫩葉柄、老葉脈、老葉柄、葉脫處），采用酸性品紅染色法染色，在體視顯微鏡下目測(cè)觀察并統(tǒng)計(jì)棉株不同部位上的綠盲蝽卵數(shù)量。

1.2.3 綠盲蝽在苜蓿不同部位的產(chǎn)卵情況調(diào)查試驗(yàn)在河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)進(jìn)行。10月中旬，將收割2茬后的紫花苜蓿用花盆栽培于溫室內(nèi)，1株/盆，苜蓿舊茬高4 cm左右（割后40 d）、新茬高5 cm左右（割后5 d）、新苗高10 cm左右。室內(nèi)光照時(shí)間18∶6（L∶D），平均溫度27℃，相對(duì)濕度60%～70%。用紗網(wǎng)罩（直徑20 cm，高30 cm）將苜蓿罩住。每個(gè)紗網(wǎng)罩內(nèi)接入綠盲蝽雌、雄成蟲(chóng)各15頭，3次重復(fù)。產(chǎn)卵3 d后，取苜蓿各組織（舊茬、新茬、嫩莖、嫩尖、嫩葉），采用酸性品紅染色法染色，在體視顯微鏡下目測(cè)觀察并統(tǒng)計(jì)苜蓿植株不同部位上的綠盲蝽卵數(shù)量。

1.3 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)公式，分別計(jì)算綠盲蝽卵在棉花、苜蓿植株上的分布率：

卵分布率=植株某組織卵數(shù)/每籠或盆植株總卵數(shù)×100%

利用DPS v6.55軟件，采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行結(jié)果的顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 綠盲蝽卵染色

根據(jù)綠盲蝽的產(chǎn)卵特點(diǎn)及其卵的特性，篩選確定用于染色的酸性品紅的適宜濃度為0.1%，并根據(jù)寄主植物棉花和苜蓿植株部位的不同，確定染色溫度為40～60℃，且根據(jù)植株組織材料的幼嫩程度不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏囟日{(diào)整。從染色結(jié)果（圖1）來(lái)看，采用0.1%酸性品紅染色后，露在棉花和苜蓿植株表面的綠盲蝽卵蓋均被染成淺粉紅色，且清淅可見(jiàn)，易于肉眼觀察。

2.2 綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布情況

調(diào)查結(jié)果（表1）顯示，綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布數(shù)量差異較大，其中，嫩葉上的產(chǎn)卵量最多，嫩葉和腋芽上的產(chǎn)卵量顯著＞其他部位。嫩葉、腋芽、幼蕾和嫩葉柄上4個(gè)部位的產(chǎn)卵量占棉株總產(chǎn)卵量的79.57%，這與該蟲(chóng)的趨嫩特性相符合。該蟲(chóng)在老熟組織上的產(chǎn)卵量相對(duì)較少，即使將卵產(chǎn)在老葉上，也是產(chǎn)在相對(duì)較幼嫩的部位如葉脈或葉片基部葉柄上部。此外，有少數(shù)卵產(chǎn)在莖稈的葉片脫落處或傷口處。

2.3 綠盲蝽卵在苜蓿不同部位上的分布情況

調(diào)查結(jié)果（表2）顯示，在紫花苜蓿生長(zhǎng)期，綠盲蝽非越冬代的卵主要分布在苜蓿新茬、嫩尖、嫩莖以及上次收割時(shí)留下的舊茬等部位。其中，苜蓿剛收割時(shí)所產(chǎn)生新茬上的產(chǎn)卵量最多，占總產(chǎn)卵量的43.90%；其次是苜蓿嫩尖，所占比例為25.30%；在舊茬上也發(fā)現(xiàn)有11.59%的卵，說(shuō)明干枯的苜蓿舊茬也是綠盲蝽的產(chǎn)卵場(chǎng)所。

圖1 酸性品紅染色后植株組織上的綠盲蝽卵Fig.1A.lucorumeggs dyed by acid fuchsin in plant tissue

表1 綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布情況Table1 Distribution ofA.lucorumeggs in different parts of cotton plant

表2 綠盲蝽卵在苜蓿植株不同部位上的分布情況Table2 Distribution ofA.lucorumeggs in different parts of alfalfa plant

3 結(jié)論與討論

綠盲蝽的越冬寄主種類繁多，大約80種，包括紫花苜蓿、紅豆草等多種多年生牧草，棗、蘋果等果樹(shù)[17]，以及某些田間雜草。目前，在果樹(shù)上已經(jīng)明確的主要越冬產(chǎn)卵部位為傷口、剪枝殘茬、鱗芽、皮縫或病殘?bào)w上[18，19]。綠盲蝽的卵產(chǎn)在植物組織內(nèi)，在非越冬寄主上多為散產(chǎn)。董吉衛(wèi)等[20]研究了綠盲蝽的產(chǎn)卵行為和產(chǎn)卵習(xí)性，并選取鈴期田間長(zhǎng)勢(shì)良好的棉株，于室內(nèi)采用1%曙紅溶液染色，調(diào)查了綠盲蝽的產(chǎn)卵部位，認(rèn)為在棉株上綠盲蝽的產(chǎn)卵部位多集中在第4～7果枝上，但其對(duì)試驗(yàn)棉株上綠盲蝽的發(fā)生情況、試驗(yàn)田情況介紹不甚詳細(xì)。

酸性品紅染色法是一種較為常見(jiàn)的昆蟲(chóng)卵的染色方法，尤其針對(duì)產(chǎn)于植物組織內(nèi)部的卵的染色和鑒別，該方法因寄主植物種類或昆蟲(chóng)種類的不同而有所調(diào)整，如品紅含量的變化、處理溫度的選擇等。作者根據(jù)綠盲蝽的產(chǎn)卵特點(diǎn)及其卵的特性，篩選確定了酸性品紅染色的適宜濃度為0.1%；并根據(jù)寄主植物棉花和苜蓿植株部位的不同，確定了染色溫度為40～60℃，且根據(jù)植株組織材料的幼嫩程度不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏囟日{(diào)整。采用酸性品紅染色法對(duì)綠盲蝽在2種主要寄主作物棉花和苜蓿不同部位上的產(chǎn)卵情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示，綠盲蝽在棉花植株上的產(chǎn)卵部位與其趨嫩特性密切相關(guān)，主要產(chǎn)卵部位是嫩葉和腋芽，其次是幼蕾和嫩葉柄，這4個(gè)幼嫩部位上的產(chǎn)卵量占棉株總產(chǎn)卵量的79.57%，而在其他部位上綠盲蝽產(chǎn)卵量較少；但是在苜蓿植株上，綠盲蝽的主要產(chǎn)卵部位是剛收割后的新茬和嫩尖，2個(gè)部位上的產(chǎn)卵量分別占總卵量的43.90%和25.30%，在舊茬上也有11.59%的產(chǎn)卵量，但是在嫩葉上產(chǎn)卵量（僅占總卵量的0.91%）卻很低。由于綠盲蝽的卵產(chǎn)在植株組織內(nèi)，因而可以看出，綠盲蝽產(chǎn)卵除趨嫩外，對(duì)植株的組織部位也有不同的需求。綜合來(lái)看，綠盲蝽在不同寄主植物上的產(chǎn)卵部位不同，本研究結(jié)果為不同作物田內(nèi)綠盲蝽的防治提供了不同的防治思路。

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Egg Dyeing Method and Oviposition Site in Cotton and Alfalfa of Adult Female Apolygus lucorum

LI Yao-fa1，DANG Zhi-hong1，AN Jing-jie1，GAO Zhan-lin1，YUAN Zi-ye1，LIU Chun-hong1，YUAN Wenlong2，PAN Wen-liang1
（1.Plant Protection Institute of Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences，IPM Center of Hebei Province，Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northern Region of North China，Ministry of Agriculture，P.R.China，Baoding 071000，China；2.Plant Protection and Quarantine Station of Hebei Province，Shijiazhuang 050011，China）

In order to clear the oviposition behavior ofApolygus lucorumin cotton and alfalfa.The distribution of A.lucorum laid eggs in different parts of cotton and alfalfa plants were investigated by using acid magenta dyeing methods.The oviposition site of A.lucorum in cotton was closely related to its’behavior of tendency to the tender.In cotton plants，the main oviposition sites of A.lucorum were the tender leaf and axillary buds，followed by the young buds and the petioles.The amount eggs of the four parts was more than 79%of the total amount eggs.But in alfalfa plants，the new stubbles and tender tips were the main oviposition parts，the amount eggs of the two parts was respectively 43.90%and 25.30%of the total amount eggs.The amount eggs in old stubble was 11.59%，but the eggs in tender leaves was the lowest one，which was only 0.91%.The spawning site in host plants of A.lucorum was related to the behavior of tendency to tender，but it could also be changed as the different kinds of host plants.

Apolygus lucorum；Oviposition site；Acid magenta dyeing method；Cotton；Alfalfa

S433.3

：A

：1008-1631（2016）06-0062-04

2016-02-03

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201103012）

李耀發(fā)（1977-），男，河北高碑店人，副研究員，博士，主要從事農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治研究。Tel：0312-5915665；E-mail：liyaofa@126.com。

潘文亮（1958-），男，河北霸州人，研究員，博士，主要從事農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治研究。Tel：0312-5915191；E-mail：pwenliang@163.com。