陳君良 ,孫鴻強(qiáng),樊生豐,李麗,師桂英,屈星,楊宏羽
(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)
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蘭州百合根系分泌物對(duì)百合幼苗自毒作用的研究
陳君良 ,孫鴻強(qiáng),樊生豐,李麗,師桂英,屈星,楊宏羽
(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)
【目的】 研究蘭州百合根系分泌物的自毒效應(yīng).【方法】 采用水培法收集30 d蘭州百合根系分泌物,通過(guò)營(yíng)養(yǎng)缽栽試驗(yàn)來(lái)研究不同體積分?jǐn)?shù)蘭州百合根系分泌物對(duì)百合幼苗生長(zhǎng)、根系形態(tài)、幼苗葉片葉綠素含量、抗氧化酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響.【結(jié)果】 隨著根系分泌物體積分?jǐn)?shù)的升高,百合幼苗生長(zhǎng)量逐漸減小,25%、50%的根系分泌物對(duì)幼苗生長(zhǎng)具有不同程度的促進(jìn)作用,75%、100%的根系分泌物對(duì)幼苗生長(zhǎng)表現(xiàn)出不同程度的抑制作用.根系分泌物處理導(dǎo)致百合幼苗葉片超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性上升,根系活力、葉綠素、丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)含量下降.【結(jié)論】 蘭州百合根系分泌物具有明顯的自毒效應(yīng),100%根系分泌物的抑制作用最大.
蘭州百合;根系分泌物;幼苗;自毒作用;連作障礙
蘭州百合(LiliumdavidiiDuch.var.unicolorCotton)屬川百合的一個(gè)變種,是極具地方特色的名優(yōu)蔬菜,具有很高的食用和藥用價(jià)值.近年來(lái),蘭州百合產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展,已經(jīng)成為當(dāng)?shù)氐奶厣a(chǎn)業(yè)和優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè),栽培蘭州百合是甘肅二陰山區(qū)貧困農(nóng)民現(xiàn)金收入的主要來(lái)源.蘭州百合為多年生植物,無(wú)性繁殖,狹域分布,僅適合于蘭州周邊二陰山區(qū)栽培[1].栽培過(guò)程中,母株上收獲的三級(jí)小種球長(zhǎng)成二級(jí)種球需要2~3 a,二級(jí)種球長(zhǎng)成商品種球需要3~4 a,生產(chǎn)中由于連作障礙引發(fā)的百合產(chǎn)量品質(zhì)下降、品種退化現(xiàn)象十分嚴(yán)重[2].連作障礙已成為困擾當(dāng)?shù)匕俸袭a(chǎn)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展的主要問(wèn)題.
連作障礙形成及加重的原因是復(fù)合因素相互作用的結(jié)果[3-4],包括土壤理化性狀惡化、土壤微生物區(qū)系的變化、根系分泌物和殘茬分解物等引起的自毒作用.越來(lái)越多的研究表明,作物連作障礙與根系分泌物中的化感自毒物質(zhì)有密切關(guān)系[5-10].自毒作用(autotoxicity)是化感作用的一種特殊形式,是同種作物的一些個(gè)體通過(guò)向環(huán)境中釋放某些代謝或分解的化學(xué)物質(zhì)而對(duì)同種其他個(gè)體生長(zhǎng)產(chǎn)生直接或間接的有害影響.蘭州百合根系發(fā)達(dá),生長(zhǎng)具有跳根現(xiàn)象,即每年新根發(fā)生,舊根衰老,殘存土壤中,根系自毒現(xiàn)象明顯.
目前有關(guān)百合化感方面的研究已有報(bào)道,由于百合無(wú)性繁殖,自然狀態(tài)下通常只開(kāi)花不結(jié)果,其種子收集難度大,因此大多學(xué)者采用蘿卜、萵苣等種子發(fā)芽試驗(yàn)來(lái)探究其化感組分的化感效應(yīng),而以百合種球?yàn)樽远臼荏w材料的研究未見(jiàn)報(bào)道.綜上所述,本試驗(yàn)以蘭州百合種球?yàn)椴牧希ㄟ^(guò)營(yíng)養(yǎng)缽栽試驗(yàn)來(lái)研究不同體積分?jǐn)?shù)百合根系分泌物對(duì)百合幼苗的自毒作用,以期揭示蘭州百合根系分泌物在連作機(jī)制中的作用,為合理制定蔬菜耕作制度提供理論依據(jù).
1.1 試驗(yàn)材料
使用蘭州百合二級(jí)種球(12~20 g)收集其根系分泌物;用蘭州百合三級(jí)種球(4~12 g)做為自毒受體材料.以上種球均購(gòu)于蘭州百合主產(chǎn)區(qū)甘肅省臨洮縣中鋪鎮(zhèn)蔣家山村,購(gòu)得的百合種球放于4 ℃冰箱保存.
1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
1.2.1 蘭州百合根系分泌物的收集 試驗(yàn)從2015年4月開(kāi)始,挑選大小均勻一致的蘭州百合二級(jí)種球,剪去舊根,用0.1%多菌靈浸泡30 min,自來(lái)水沖洗數(shù)次后,播于21孔穴盤中,育苗基質(zhì)選用滅菌的珍珠巖.待百合出苗后,選取長(zhǎng)勢(shì)一致的百合幼苗將其輕輕拔出,用水沖去附在根表面的珍珠巖,盡量不傷根,洗凈后用塑料泡沫板固定,置于6 L容積的塑料盆中(每盆12株).因百合鱗莖中貯存有豐富的養(yǎng)分,可滿足百合生長(zhǎng)發(fā)育所需,因此直接加入蒸餾水培養(yǎng).生長(zhǎng)期間每盆始終保持1.5 L蒸餾水,在室溫下連續(xù)通氣培養(yǎng)30 d.按照上述方法,分批次共收集55盆(第一批收集40盆,結(jié)束后進(jìn)行第二批收集15盆,共收集82.5 L),以滿足后期幼苗自毒試驗(yàn)的需求總量.30 d后合并其根系分泌物,雙層紗布過(guò)濾后裝入預(yù)先準(zhǔn)備的大桶中,收集物密封置于4 ℃冰箱中保存,用來(lái)做自毒作用檢測(cè).
1.2.2 蘭州百合幼苗自毒試驗(yàn) 2015年5~8月在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行幼苗試驗(yàn).挑選大小均勻一致的蘭州百合三級(jí)種球300個(gè),消毒后播于10 cm×10 cm(口徑×高)營(yíng)養(yǎng)缽,每缽1株,總共300盆,栽培基質(zhì)為蛭石∶珍珠巖=3∶1(V∶V).試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理,按體積比將百合根系分泌物用清水兌換成根系分泌物體積分?jǐn)?shù)為25%、50%、75%、100%的液體,分別記為T1、T2、T3、T4,以清水為對(duì)照(CK).待百合出苗后,每個(gè)處理選取長(zhǎng)勢(shì)基本一致的幼苗50盆,用以上不同體積分?jǐn)?shù)百合根系分泌物澆灌.每隔4~5 d澆灌一次,每缽澆50 mL,共澆灌12次.處理50 d后,各處理隨機(jī)取15株進(jìn)行形態(tài)指標(biāo)測(cè)定,取長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗葉片進(jìn)行各項(xiàng)生理生化指標(biāo)測(cè)定,重復(fù)3次.
1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法
用電子游標(biāo)卡尺測(cè)定株高、莖粗,用分析天平稱量根鮮質(zhì)量、莖葉鮮質(zhì)量.
根系形態(tài)及生理測(cè)定:用掃描儀(型號(hào)Epson7500,分辨率為400 bpi)對(duì)根系進(jìn)行掃描.掃描時(shí)將根系放入特制的透明托盤內(nèi),加入3~5 mL水以避免根系分支的互相纏繞.掃描后保存圖像,采用WinRhizo Pro Vision 5.0a對(duì)圖像進(jìn)行分析獲得總根長(zhǎng)、根表面積、平均直徑、根總體積、根尖數(shù)等形態(tài)指標(biāo);根系活力測(cè)定采用TTC法[11].
抗氧化酶SOD、CAT、POD活性的測(cè)定:稱取0.5 g葉片放入研缽中,加5 mL pH 7.8的磷酸緩沖液,冰浴研磨,勻漿倒入離心管中,冷凍離心20 min(10 000 r/min),取上清液冷藏備用.SOD、CAT活性按照Pinheiro等[12]的方法,POD 活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法[13].
MDA、脯氨酸、葉綠素的測(cè)定:采用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定MDA含量,酸性茚三酮顯色法測(cè)定脯氨酸含量[13];葉綠素含量采用丙酮浸提法[11].
1.4 數(shù)據(jù)處理
采用化感效應(yīng)指數(shù)(RI)對(duì)化感作用進(jìn)行分析[14-15].化感效應(yīng)指數(shù)計(jì)算式為:
當(dāng)T≥C,RI=1-C/T
當(dāng)T 式中,RI>0顯示促進(jìn)作用,RI<0顯示抑制作用,T表示處理值,C表示對(duì)照值.絕對(duì)值大小表示作用強(qiáng)弱.化感綜合效應(yīng)(SE)是株高、莖粗、莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量化感效應(yīng)指數(shù)的平均值. 采用Excel 2010進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理及圖表繪制,SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,用Duncan法進(jìn)行差異顯著性檢測(cè). 2.1 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗生長(zhǎng)的影響 25%、50%的蘭州百合根系分泌物處理促進(jìn)了百合幼苗株高、莖粗、莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量的生長(zhǎng),而75%、100%處理則表現(xiàn)出不同程度的抑制作用(表1).與對(duì)照相比,25%百合根系分泌物處理除莖粗未達(dá)到顯著水平外,株高、莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量均達(dá)到顯著水平.隨著根系分泌物體積分?jǐn)?shù)的升高,促進(jìn)作用開(kāi)始降低,當(dāng)根系分泌物體積分?jǐn)?shù)為75%時(shí),百合幼苗生長(zhǎng)表現(xiàn)出不同程度的抑制作用,其中莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量與對(duì)照達(dá)到顯著差異;體積分?jǐn)?shù)為100%時(shí),抑制作用進(jìn)一步加大,除莖粗外,其他指標(biāo)達(dá)到顯著差異. 化感效應(yīng)指數(shù)表明,25%百合根系分泌物處理對(duì)幼苗的促進(jìn)作用最大,對(duì)株高、莖粗、莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量的促進(jìn)作用分別為11.3%、3.7%、31.7%、39.3%,且促進(jìn)作用與對(duì)照相比均達(dá)到顯著差異.100%百合根系分泌物處理對(duì)幼苗的抑制作用最大,對(duì)株高、莖粗、莖葉鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量的抑制作用分別為13%、6.7%、60.7%、59%,抑制作用達(dá)到顯著水平. 2.2 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗根系生長(zhǎng)的影響 表2表明,隨著根系分泌物體積分?jǐn)?shù)的升高,幼苗總根長(zhǎng)、總根系表面積、平均直徑、總根系體積、根尖數(shù)、根系活力表現(xiàn)出不同程度的下降.與對(duì)照相比,25%、50%百合根系分泌物處理對(duì)根系的生長(zhǎng)表現(xiàn)為促進(jìn)作用,75%、100%百合根系分泌物處理對(duì)根系的生長(zhǎng)表現(xiàn)為抑制作用.其中25%百合根系分泌物處理對(duì)總根長(zhǎng)、根尖數(shù)的促進(jìn)作用分別達(dá)到12.7%、40.8%;100%處理對(duì)總根長(zhǎng)、總根系表面積、總根系體積、根尖數(shù)的抑制分別達(dá)到了39.1%、40.6%、35.8%、19.6%.各處理間除平均直徑變化幅度較小,相互無(wú)差異性,其他指標(biāo)均有顯著差異性. 表1 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗生長(zhǎng)的影響及化感綜合效應(yīng)Tab.1 Influence and allelopathic combined effect of root exudates on Lanzhou lily seedling growth 同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同的小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05). 表2 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗根系生長(zhǎng)的影響 Tab.2 Effect of root exudates on root growth of Lanzhou lily seedlings 處理總根長(zhǎng)/cm總根系表面積/cm2平均直徑/mm總根系體積/cm3根尖數(shù)根系活力/(μg·(g·h)-1)CK(清水)127.62±1.22c30.72±0.50a0.7±0.03a0.534±0.01bc250±2.00c30.6±0.90cT1143.83±1.12a31.04±1.08a0.8±0.02a0.591±0.01a352±1.73a46.32±1.09aT2135.8±1.10b29.67±0.90a0.77±0.08a0.557±0.01b279±2.31b39.33±0.78bT3103.1±0.80d26.64±0.79b0.74±0.02a0.516±0.02c236±2.68d27.59±0.83dT477.75±0.64e18.25±0.77c0.69±0.05a0.344±0.02d201±2.52e24.26±0.94e 2.3 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗葉片抗氧化酶活性的影響 超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)是植物體內(nèi)主要的ROS酶促清除系統(tǒng)[16].由表3可知,隨著根系分泌物體積分?jǐn)?shù)的升高,蘭州百合幼苗葉片中的SOD、POD和CAT活性顯著升高,自毒作用加劇.100%百合根系分泌物處理有最高的SOD活性859.94 U/g、POD活性33.05 U/(min·g)、CAT活性53.16 U/(min·g),較之對(duì)照,SOD、POD和CAT活性分別升高了9.2%、47.1%、25.5%,差異達(dá)到了顯著水平.同樣,75%百合根系分泌物處理雖對(duì)抗氧化酶活性的提升較小,但差異均達(dá)到顯著水平.25%百合根系分泌物處理的SOD、POD和CAT活性最小,其中SOD活性與對(duì)照差異顯著,POD和CAT 活性與對(duì)照差異不顯著.50%百合根系分泌物處理的3種酶活性與對(duì)照均無(wú)顯著差異. 表3 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗葉片抗氧化酶活性的影響 Tab.3 Effect of root exudates on SOD,POD,CAT activity in leaves of Lanzhou lily seedlings 處理SOD/(U·g-1)POD/(U·(min·g)-1)CAT/(U·(min·g)-1)CK(清水)787.11±1.257c22.77±0.72c42.36±0.810cT1775.31±2.340d20.54±0.516c41.35±1.414cT2783.64±1.822c22.58±0.801c42.52±1.078cT3798.31±2.477b28.73±0.884b47.20±0.915bT4859.94±2.274a33.05±0.797a53.16±1.322a 2.4 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗葉片葉綠素及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響 不同體積分?jǐn)?shù)根系分泌物處理下,葉片葉綠素含量呈明顯下降趨勢(shì).當(dāng)體積分?jǐn)?shù)為75%時(shí),葉片葉綠素含量已低于對(duì)照,100%處理后,葉綠素含量最低,為2.12 mg/g,較之對(duì)照下降了16.5%;25%百合根系分泌物處理的葉綠素含量最高,為2.96 mg/g,較之對(duì)照提高了16.5%.25%、100%處理均與對(duì)照差異顯著. 表4 根系分泌物對(duì)蘭州百合幼苗葉片葉綠素、脯氨酸和MDA含量的影響 Tab.4 Effect of root exudates on chlorophyll,proline and MDA content in leaves of Lanzhou lily seedlings 處理葉綠素/(mg·g-1)脯氨酸/(μg·g-1)MDA/(mmol·g-1)CK(清水)2.54±0.029bc7.27±0.172c2.36±0.061bcT12.96±0.177a5.12±0.118c2.26±0.036cT22.64±0.017b7.03±1.707c2.30±0.021cT32.33±0.055cd14.46±0.732b2.45±0.075bT42.12±0.047d21.87±0.935a2.72±0.035a 由表4可以看出,不同體積分?jǐn)?shù)百合根系分泌物處理均導(dǎo)致百合幼苗葉片脯氨酸、MDA含量升高.其中,25%、50%處理的脯氨酸、MDA含量均低于對(duì)照,但無(wú)差異性.75%、100%處理的脯氨酸、MDA含量均高于對(duì)照,100%處理的脯氨酸含量較之對(duì)照分別提高了98.9%、200.8%,差異顯著. 蘭州百合根系分泌物所導(dǎo)致的自毒作用是蘭州百合連作障礙發(fā)生的重要成因之一.現(xiàn)有研究結(jié)果顯示,只有當(dāng)水溶液的濃度達(dá)到某一臨界濃度時(shí),才能產(chǎn)生化感抑制作用,低于這一濃度時(shí)植物不受損壞,且部分化感物質(zhì)會(huì)產(chǎn)生促進(jìn)植物生長(zhǎng)的效應(yīng),表現(xiàn)出“低促高抑”的現(xiàn)象[17].本試驗(yàn)結(jié)果表明,蘭州百合根系分泌物對(duì)百合幼苗的生長(zhǎng)呈現(xiàn)低體積分?jǐn)?shù)(25%、50%)下具有一定的促進(jìn),高體積分?jǐn)?shù)(75%、100%)下具有一定的抑制作用,證明了蘭州百合根系分泌物自毒作用的存在.這與徐寧等[18]研究的大蔥根系分泌物處理黃瓜種子、曹子林等[19]研究的藍(lán)桉枝葉氣態(tài)揮發(fā)物處理其種子、余婷等[20]研究的白三葉根系分泌物處理5種草坪草的結(jié)果相一致.但與徐鵬等[21]研究的西伯利亞百合根系分泌物對(duì)蘿卜苗高和苗鮮質(zhì)量均表現(xiàn)出抑制效應(yīng)的結(jié)果有所不同.上述結(jié)果的差異,可能由于作物種類(包括供體和受體)不同,而且采用不同的根系分泌物收集方法,獲得根系分泌物的物質(zhì)構(gòu)成和濃度也不一樣. 一般植物在自毒脅迫下體內(nèi)的活性氧會(huì)大量增加,導(dǎo)致植物內(nèi)發(fā)生代謝紊亂,從而對(duì)植物的生長(zhǎng)和產(chǎn)量產(chǎn)生不利影響.植物將采取各種措施消除活性氧,如不斷提高各種抗氧化酶的活性[22].本研究表明,隨著根系分泌物體積分?jǐn)?shù)的升高,SOD、POD和CAT活性均成上升趨勢(shì),75%、100%處理下3種抗氧化酶活性與對(duì)照均達(dá)到了顯著差異,表明越高體積分?jǐn)?shù)的根系分泌物對(duì)百合幼苗的傷害越大,致使幼苗體內(nèi)產(chǎn)生更多的SOD、POD和CAT來(lái)清除過(guò)多的超氧陰離子和防止H2O2(過(guò)氧化氫)的積累.抗氧化酶系統(tǒng)不能完全清除具有高活性的活性氧,從而膜脂過(guò)氧化程度提高[23],植物體內(nèi)的丙二醛( MDA) 可以反映植物遭受逆境傷害的程度[24].本研究發(fā)現(xiàn),高體積分?jǐn)?shù)(100%)的百合根系分泌物導(dǎo)致幼苗葉片中的MDA、脯氨酸含量顯著上升,影響了構(gòu)成細(xì)胞質(zhì)膜[25]包括葉綠體片層膜的物質(zhì)組分,導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)改變,影響膜的流動(dòng)性及其與酶的結(jié)合力,從而使葉片色素含量降低,影響了植株的光合作用,限制了生長(zhǎng). 綜合以上結(jié)果可以看出,不同體積分?jǐn)?shù)的蘭州百合根系分泌物顯著影響了百合幼苗植株的生長(zhǎng),其幼苗生物量表現(xiàn)出低體積分?jǐn)?shù)增加、高體積分?jǐn)?shù)降低的現(xiàn)象.其中25%的根系分泌物對(duì)幼苗的促進(jìn)作用最大,100%的根系分泌物對(duì)幼苗的抑制作用最大. 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The root exudates at 25% and 50% promoted seedling growth. However,the exudates at 75% and 100% inhibited the seedling growth. The exudates increased activity of superoxide dismutase,peroxidase,catalase,decreased root activity,and content of chlorophyll,malondialdehyde and proline. 【Conclusion】 The root exudates from Lanzhou Lily show obviously allelopathy effect,the maximum is found at 100% of exudates. Lanzhou lily;root exudates;seedlings;allelopathy;continuous cropping obstacle 陳君良(1989-),男,碩士研究生,主要從事蔬菜栽培與生理方面的研究.E-mial:835978034@qq.com 師桂英,女,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)槭卟嗽耘嗯c生物技術(shù).E-mail:shigy@gsau.edu.cn 甘肅省高等學(xué)?;究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目;甘肅省農(nóng)牧廳農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目(GNCX-2013-36). 2015-10-11; 2016-02-29 S 641.1 A 1003-4315(2016)06-0064-062 結(jié)果與分析
3 討論與結(jié)論